血清淀粉样蛋白A检测方法及试剂技术

本发明专利技术公开了一种血清淀粉样蛋白A检测方法，包括：将受测体的血清SAA抗原和包被有SAA抗体的胶乳交联物混合，在体外进行凝集反应，定量测定血清中SAA含量。本发明专利技术还公开了一种血清淀粉样蛋白A检测试剂。本发明专利技术的血清淀粉样蛋白A检测方法及试剂所具有的优点如下：线性范围宽、检测快速、检测灵敏度高、准确度高、成本低、试剂稳定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测试剂
，尤其是涉及一种血清淀粉样蛋白A检测方法。本专利技术还涉及一种血清淀粉样蛋白A检测试剂。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A(serumamyloidAprotein，SAA)是一类多基因编码的多形态蛋白家族，组织淀粉样蛋白A的前体物质，属于急性时相反应蛋白。炎症或疾病感染期SAA在48～72h内迅速升高，可升高至最初浓度的1000倍，并且在疾病恢复期迅速下降(UrieliShovalS，et,al.ExpressionandfunctionofserumamyloidA，amajoracutephaseprotein，innormalanddiseasestates[J].CurrOpinHematol，2000，7(1):64-69.)。SAA在病毒和细菌感染中均升高，而病毒感染中CRP几乎不升高或升高不明显，两者联合检测有助于鉴别细菌感染和病毒感染。杨兰辉等研究表明手足口病患儿SAA明显升高，且与病情的严重程度呈正相关(杨兰辉，等.C‐反应蛋白和淀粉样蛋白A在手足口病诊疗中的应用研究，检验医学与临床，2012，11(22)，2838-2839)。此外，监测SAA/CRP比值比单独检测SAA或CRP具有更大的应用价值。SAA在肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等多种肿瘤患者体内均有不同程度升高，且其水平与肿瘤的活动期、恶性程度及侵袭转移有明显的相关性，反映肿瘤患者的疗效及预后(CoccoE，etal.SerumamyloidA:anovelbiomarkerforendometrialcancer[J].Cancer，2010，116(4):843-851.)。SAA水平还与淀粉样变性疾病、冠心病、排斥反应(MullerT，etal.Prospectiveanalysisof10differentparametersofacuterenalallograftrejection[J].TransplantProc，1992，24(6):2731-2734.)等疾病(陈长强，等.血清淀粉样蛋白A在疾病应用中的研究进展[J].检验医学，2012，27(9):776-779.)密切相关，为临床诊断提供更好的参考信息。目前，用于临床血清SAA检测的方法主要包括免疫胶体金法、乳胶增强速率散射比浊法、微球捕获酶免疫法(MEIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶乳增强免疫比浊法等。乳胶增强速率散射比浊法只能在配套的特定蛋白分析仪上使用且检测成本相对较高，免疫胶体金法只能与金标数码定量分析仪配套使用，无法满足自动化快速批量检测的要求，近两年相关专利公开的胶乳增强免疫比浊法，采用多克隆抗体胶乳增强法，适用于全自动生化分析仪，但其线性范围较窄，临床应用中若遇到高浓度SAA样本需不断稀释，操作繁琐。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种血清淀粉样蛋白A检测方法，它具有可以同时满足线性宽和自动化快速批量检测的要求，具有良好的准确度、精密度、抗干扰性及灵敏度，能够满足临床检验要求的特点。本专利技术还公开了一种血清淀粉样蛋白A检测试剂。本专利技术所采用的第一个技术方案是：血清淀粉样蛋白A检测方法，包括：将受测体的血清SAA抗原和包被有SAA抗体的胶乳交联物混合，在体外进行凝集反应，定量测定血清中SAA含量。所述SAA抗原与包被有SAA抗体的胶乳交联物通过相应的稀释后在液相中发生凝集反应，所述液相环境pH为6.0-9.0、温度为15℃-40℃。所述检测方法采用的检测仪器为：自动生化分析仪；分析方法为：两点终点法；反应方向为：上升反应；校准方式为：Spline；测定波长为：546nm；测定温度为：37℃；样本：R1：R2＝8μl:250μl:50μl；步骤为：8μl样本和250μl试剂R1混匀后于37℃孵育3-5min，随即加入50μl试剂R2，读取第1读数点吸光度A1，混匀后37℃孵育5min，读取第2读数点吸光度A2，计算A2-A1差值，得出样本中血清淀粉样蛋白A含量。本专利技术所采用的第二个技术方案是：血清淀粉样蛋白A检测试剂，包括试剂R1、试剂R2，试剂R1包括：pH为6.5-8.5、浓度为10-100mmol/L的缓冲液，质量百分比为0.01％-2.00％的表面活性剂，质量百分比为0.01％-5.00％的反应促进剂，质量百分比为0.05％-3.00％的电解质，质量百分比为0.01％-1.00％的防腐剂，以及质量百分比为0.01％-4.00％的稳定剂；试剂R2包括：质量百分比为0.05％-3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.02％-12.00％的稳定剂，质量百分比为0.01％-1.00％防腐剂，质量百分比为0.05％-3.00％的电解质，pH为6.5-8.5、浓度为10-100mmol/L的缓冲液，胶乳交联物；以及该胶乳交联物是标记有SAA多克隆抗体的大胶乳颗粒和标记有SAA单克隆抗体的小胶乳颗粒。所述SAA多克隆抗体是含有功能部位的完整抗体或抗体片段，选自兔抗人多克隆抗体或羊抗人多克隆抗体；所述SAA单克隆抗体为含有功能部位的完整抗体、抗体片段或重组抗体。所述大胶乳颗粒，其粒径为110-380nm，质量百分比为0.01％-0.06％，所述小胶乳颗粒，其粒径为20-120nm，质量百分比为0.10％-0.50％，所述试剂R2中的大胶乳颗粒和小胶乳颗粒的混合比例为1:2～1:16。所述缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸盐缓冲液、磷酸缓冲液中的一种。所述表面活性剂为非离子型表面活性剂，所述非离子型表面活性剂为Tween20、Tween80、EmulgenB-66、TritonX-100中的至少一种。所述反应促进剂为聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000、溴化乙二甲氨、聚凝胺中的至少一种。所述电解质为正价金属离子中的一种或多种，所述防腐剂为叠氮钠、叠氮锂、苯甲酸及其盐类、山梨酸盐类、亚硝酸钠、PC300中的至少一种，所述稳定剂为蛋白质、金属络合剂、助悬剂中的至少一种，所述蛋白质为牛血清蛋白或明胶中的至少一种，所述金属络合剂为HEDTA、CMOM、CMOS中的至少一种，所述助悬剂包括乙二醇、乳糖、蔗糖、甘油中的至少一种。本专利技术的血清淀粉样蛋白A检测方法及试剂所具有的优点如下：1、线性范围宽：为5-500mg/L，健康人参考范围为≤10mg/L，基本满足临床需要；2、检测快速：适用自动生化分析仪，满足批量检测需求，检测快速简便；3、检测灵敏度高：试剂缓冲液、界面活性剂等成分的配比提高了反应的灵敏度；4、准确度高：采用优化的试剂配比，并溯源至国际参考物质NIBSC92/680，保证测定结果的准确度；5、成本低：与进口试剂的相关性达到0.9988，可替代进口试剂，进入市场后可降低使用成本；6、试剂稳定：试剂各成分配比优化，试剂在2-8℃密闭条件下可稳定18个月。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明：图1是本专利技术的血清淀粉样蛋白A检测方法的操作步骤；图2是本专利技术SAA试剂和西门子对比试剂/方法相关性；图3是本专利技术SAA试剂线性范围测定；图4是本专利技术SAA的溯源性。具体实施方式实施例1血清淀粉样蛋白A检测试剂，包括试剂R1、试剂R2。具体的讲：试剂R本文档来自技高网...

【技术保护点】
血清淀粉样蛋白A检测方法，包括：将受测体的血清SAA抗原和包被有SAA抗体的胶乳交联物混合，在体外进行凝集反应，定量测定血清中SAA含量。

【技术特征摘要】
1.血清淀粉样蛋白A检测方法，包括：将受测体的血清SAA抗原和包被有SAA抗体的胶乳交联物混合，在体外进行凝集反应，定量测定血清中SAA含量。2.根据权利要求1所述的血清淀粉样蛋白A的检测方法，其特征在于：所述SAA抗原与包被有SAA抗体的胶乳交联物通过相应的稀释后在液相中发生凝集反应，所述液相环境pH为6.0-9.0、温度为15℃-40℃。3.根据权利要求1或2所述的血清淀粉样蛋白A的检测方法，其特征在于：所述检测方法采用的检测仪器为：自动生化分析仪；分析方法为：两点终点法；反应方向为：上升反应；校准方式为：Spline；测定波长为：546nm；测定温度为：37℃；样本：R1：R2＝8μl:250μl:50μl；步骤为：8μl样本和250μl试剂R1混匀后于37℃孵育3-5min，随即加入50μl试剂R2，读取第1读数点吸光度A1，混匀后37℃孵育5min，读取第2读数点吸光度A2，计算A2-A1差值，得出样本中血清淀粉样蛋白A含量。4.血清淀粉样蛋白A检测试剂，包括试剂R1、试剂R2，其特征在于：试剂R1包括：pH为6.5-8.5、浓度为10-100mmol/L的缓冲液，质量百分比为0.01％-2.00％的表面活性剂，质量百分比为0.01％-5.00％的反应促进剂，质量百分比为0.05％-3.00％的电解质，质量百分比为0.01％-1.00％的防腐剂，以及质量百分比为0.01％-4.00％的稳定剂；试剂R2包括：质量百分比为0.05％-3.00％的表面活性剂，质量百分比为0.02％-12.00％的稳定剂，质量百分比为0.01％-1.00％防腐剂，质量百分比为0.05％-3.00％的电解质，pH为6.5-8.5、浓度为10-100mmol/L的缓冲液，胶乳交联物；以及该胶乳交联物是标记有S...

【专利技术属性】
技术研发人员：王剑，林清菁，
申请(专利权)人：宁波普瑞柏生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33