【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体而言，涉及一种抗d-二聚体单克隆抗体及其制备方法、组合物、试剂盒。
技术介绍
1、d-二聚体(d-dimer)是纤维蛋白单体经活化因子xiii交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物。具体而言，血浆中纤维蛋白原在凝血酶(thrombin)、factorxiiia(转谷酰胺酶)和钙离子的作用下，去掉血纤肽a、b，暴露出新的结合位点，自发聚集形成非共价结合的纤维蛋白束；纤维蛋白束再在factor xiiia的作用下，形成γ-γ的异肽键，将聚合形式以共价键的方式稳定下来，称为交联纤维蛋白，即血栓的基本骨架；交联纤维蛋白在纤溶酶的作用下，降解为不同大小的交联纤维蛋白降解产物，其最小结构因为含有两个由异肽键共价交联的d片段而称为d-二聚体。
2、d-二聚体反映受检者体内凝血-纤溶系统活化状况，检测对多种疾病的诊断及治疗有重要的价值。尤其可在无症状的高危患者中对深静脉血栓进行早期筛选；与肺泡动脉氧分压差联合检测可作为排除诊断肺栓塞的首选筛选试验。此外还可辅助诊断肝脏疾病；对脑梗死进行诊断及预后判断；鉴别恶性肿瘤。其他能够引起d二聚体升高的因素还有：创伤性的骨折、严重感染、稳定性冠心病、重症感染、儿童过敏性紫癜急性期、脓毒血症、结节病等。
3、常用的d-二聚体检测方法主要有：elisa法、胶乳凝集法和发色底物法，这些检测方法都需要选用具有高度特异性和高亲和力的抗d二聚体单克隆抗体为载体，且抗d-二聚体单克隆抗体的品质直接影响试剂盒检验结果的准确性和可靠性。现在高质量的抗d-二聚体单克隆抗
技术实现思路
1、本专利技术解决的技术问题是提供特异性强、亲和力高的抗d-二聚体单克隆抗体，通过对抗体的氨基酸序列进行改造，实现了提高抗体的特异性和亲和性的技术效果，能够满足临床检测的需求，并且适合大量生产以满足生产和临床检测的需求。
2、为解决上述问题，本专利技术提供一种抗d-二聚体单克隆抗体，其重链可变区氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.3所示，其轻链可变区氨基酸序列如seq id no.2或seqid no.4所示。
3、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本专利技术提供了多种抗体，进行配对筛选后，获得灵敏度及特异性均能满足需求的抗体组合，同时其方便大量生产，可满足日后大规模临床应用的需求。
4、在本专利技术的一个实例中，抗d-二聚体单克隆抗体，其重链可变区氨基酸序列如seqid no.1所示，其轻链可变区氨基酸序列如seq id no.2所示。
5、在本专利技术的一个实例中，抗d-二聚体单克隆抗体，其重链可变区氨基酸序列如seqid no.3所示，其轻链可变区氨基酸序列如seq id no.4所示。
6、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：上述两种抗d-二聚体单克隆抗体形成抗体对组合，检测灵敏度高，特异性好。
7、本专利技术还提供一种上述任一实例的抗d-二聚体单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：s10：构建重组表达载体：将seq id no.1所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列和seqid no.2所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列插入表达载体一，获得重组表达载体一；将seq id no.3所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列和seq id no.4所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列插入表达载体二，获得重组表达载体二；s20：抗体的重组表达：将重组表达载体一转染至哺乳动物表达细胞中进行瞬时表达，纯化，得到第一抗d-二聚体单克隆抗体；将重组表达载体二转染至哺乳动物表达细胞中进行瞬时表达，纯化，得到第二抗d-二聚体单克隆抗体。
8、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本专利技术的抗体可以通过本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或pcr扩增获得编码本专利技术抗体的重链和轻链基因的dna分子，将所得dna分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本专利技术的抗体，制备方法高效，获得的抗体特异性强、亲和力高。
9、本专利技术还提供一种核酸，包含编码上述任一实例的抗d-二聚体单克隆抗体的核苷酸序列、可操作地连接至核苷酸序列的启动子和选择性标志物。
10、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本专利技术提供的核酸具有上述任一实例的抗d-二聚体单克隆抗体的所有有益效果，在此不再赘述。
11、本专利技术还提供一种细胞，包含上述实例的核酸。
12、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：该细胞能够表达上述实例的抗d-二聚体单克隆抗体，通过杂交瘤技术，能够制备得到抗d-二聚体单克隆抗体，进而该细胞能够用于批量生产抗d-二聚体单克隆抗体。
13、本专利技术还提供一种组合物，包含上述任一实例的抗d-二聚体单克隆抗体和固体支持物，其中抗d-二聚体单克隆抗体与固体支持物共价或非共价结合。
14、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本专利技术提供的组合物具有上述任一实例的抗d-二聚体单克隆抗体的所有有益效果，在此不再赘述。
15、在本专利技术的一个实例中，固体支持物为胶乳颗粒。
16、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：抗d-二聚体单克隆抗体与胶乳颗粒偶联后，抗体体积有了数量级上的增长，能够大幅提升可检测性。
17、本专利技术还提供一种用于检测样品中d-二聚体的存在或其量的试剂盒，试剂盒包括试剂二，试剂二包括至少一种上述实例的组合物，10-300mmol/l缓冲液和0.1-10.0g/l防腐剂。
18、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：本专利技术的提供的抗体能够特异性结合d-二聚体，从而可用于检测d-二聚体在样品中的存在或其水平。本专利技术提供的试剂盒具有上述任一实例的抗d-二聚体单克隆抗体的所有有益效果，在此不再赘述。
19、在本专利技术的一个实例中，试剂盒还包括：试剂一，试剂一包括10-300mmol/l缓冲液，0.1-10.0g/l表面活性剂和0.1-10.0g/l防腐剂，缓冲液的ph值为5.0-9.0。
20、与现有技术相比，采用该技术方案所达到的技术效果：缓冲液能够保证抗体的稳定性，抵抗ph改变。添加防腐剂可以有效延长表面活性剂的使用寿命，防止表面活性剂受到空气中的氧化作用而变质。
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1.一种抗D-二聚体单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ IDNO.2或SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的抗D-二聚体单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的抗D-二聚体单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQID NO.4所示。
4.一种权利要求1所述的抗D-二聚体单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.一种核酸，其特征在于，包含编码权利要求1至3中任一项所述的抗D-二聚体单克隆抗体的核苷酸序列、可操作地连接至所述核苷酸序列的启动子和选择性标志物。
6.一种细胞，其特征在于，包含权利要求5所述的核酸。
7.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1至3中任一项所述的抗D-二聚体单克隆抗体和固体支持物，其中所述抗
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述固体支持物为胶乳颗粒。
9.一种用于检测样品中D-二聚体的存在或其量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂二，所述试剂二包括至少一种权利要求7所述的组合物，10-300mmol/L缓冲液和0.1-10.0g/L防腐剂。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：
...【技术特征摘要】
1.一种抗d-二聚体单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如seq id no.1或seq id no.3所示，其轻链可变区氨基酸序列如seq idno.2或seq id no.4所示。
2.根据权利要求1所述的抗d-二聚体单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如seq id no.1所示，其轻链可变区氨基酸序列如seqid no.2所示。
3.根据权利要求1所述的抗d-二聚体单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如seq id no.3所示，其轻链可变区氨基酸序列如seqid no.4所示。
4.一种权利要求1所述的抗d-二聚体单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.一种核酸，其特征在于，包含编码权利要求1至3中任...
【专利技术属性】
技术研发人员：张玉凤，徐海燕，吴永菲，应伽静，
申请(专利权)人：宁波普瑞柏生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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