鸡pcdh1基因部分片段的克隆、表达及多克隆抗体的制备制造技术

发明专利技术涉及protocadherin1(pcdh1)基因的部分序列在制备多克隆抗体和表达检测中的应用，具体而言，是对鸡pcdh1基因的部分序列进行了PCR扩增，插入到表达载体，并通过在大肠杆菌E.coliBL21中原核表达和融合蛋白亲和纯化，把纯化的蛋白与弗氏完全佐剂混合乳化后通过足垫等部位多点注射免疫SD大鼠,快速地产生针对目的抗原的特异性抗体。利用该方法快速制作的免疫血清，对不同发育阶段鸡胚中的pcdh1基因的表达情况进行检测，说明利用本方法制作的针对pcdh1蛋白部分肽段的多抗有望成为pcdh1基因蛋白表达检测的有效工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多克隆抗体制作技术，具体而言，就是利用设计的特定引物，通过相应手段原核表达和纯化目的蛋白，免疫动物制作免疫血清，进而通过实验阐明本抗血清用作基因蛋白表达检测的可行性。
技术介绍
原I丐粘蛋白(Protocadherins, pcdh)是一种带有亲同种抗原粘附活性的跨膜蛋白，是钙粘蛋白超家族中最大的亚群。/7 *主要在中枢神经系统中表达，迄今为止已经发现大约有60多种在大脑中表达。现有的研究表明对神经元突触的发育有直接的影响。pcdh分子不仅可以作为粘附分子加强神经突触的连接，而且还可以作为受体在信号转导过程中起到一定作用。此外，/7 *参与细胞迁移和细胞分选，神经元回路和神经突触的建立以及细胞存活和细胞生长抑制。一箜PCdh基因的突变已经与一些人类疾病联系在了一起。比如，功能的缺失会导致动脉管壁的结构和功能发生改变，通过启动子的高度甲基化使沉默表达会导致17肿瘤抑制活性的消失，说明PCdhM的表达可以抑制食管癌的发生；临床研究表明等位突变可导致隐形视网膜色素变性'pcdtm的突变或者缺失会造成女性患家族性的癫痫；Koppelman等发现是气道高反应的易感基因，又有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡pcdh1特异性多克隆抗体的制备方法，其特征是包括如下步骤：(1)?根据鸡pcdh1基因，设计并合成引物：?上游引物5’?GGGATCCTCCTGCCTGGCCCTGTGGTTCCTCT?3’，下游引物5’?GGAATTCCTCGGGGCCAGCCAGCAGTTCATA?3’；?通过RT?PCR扩增鸡pcdh1基因片段，其全长为516?bp；(2)?将步骤(1)获得的pcdh1基因片段连入表达载体pGEX?2TK中，将连接产物转化大肠杆菌E.coli?DH5α感受态细胞，筛选得到重组表达质粒pGEX?2TK?pcdh101；(3)?将步骤(2)获得的表达鸡pcdh1基因片段的重组表达质粒...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李永海，李萌，陈国荣，王琳，陈红丽，刘涌涛，赵兴华，李超英，丰慧根，林俊堂，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：