一种植物表达载体pGⅡ0229-GUS的构建及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种植物表达载体pGⅡ0229-GUS的构建及应用。植物表达载体pGⅡ0229-GUS的构建方法，包括引物设计、PCR扩增和载体构建。本发明专利技术设计的特异引物通过PCR扩增获得的目的片段，包含有35s启动子、GUS瞬时表达基因和NOS终止子，是一个完整的基因表达盒；植物表达载体pGⅡ0229-GUS只有7333bp，载体质粒小，含有左右边界，可以在农杆菌侵染转化上应用，也可以在基因枪轰击转化上应用。在遗传转化甘蔗时，GUS的瞬时表达率达到65%以上，适用于甘蔗，也适用于其他植物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物表达载体的构建及应用，具体涉及一种植物表达载体pG II 0229-GUS的构建及应用，属于生物

技术介绍
甘鹿(Saccharum Complex)是最主要的糖料作物,鹿糖占世界食糖总产的76%,占我国食糖总产的92% ;甘蔗也是最重要的生物质能源作物之一，是迄今大田栽培作物中单位面积生物量和燃料乙醇产量最大的C4植物。甘蔗品种改良对产业科技进步贡献率高达60%，但是甘蔗是高度杂合的无性繁殖作物，遗传背景非常复杂，表现为异源多倍体和多倍的非整倍体，染色体个数40 120个不等，变化幅度之大为其它作物所不及，常规有性杂交育种，从实生苗开始一般需要10 13年才能从10 30万株分离群体中培育出I个达到审(鉴)定要求的品种。现代分子生物学的发展和研究技术手段的进步，使品种的定向改良和目标性状育种成为可能。利用转基因技术改良甘蔗品种具有独特的优势，原因在于:(1)甘蔗属于转基因安全等级为I级的工业原料作物，批准转基因甘蔗产业化应用相对容易；(2)甘蔗又是无性繁殖作物，只要选到优良的单株就可以通过离体无性繁殖的方式，快速扩大群体并保持遗传上的稳定性。目前本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物表达载体pGⅡ0229?GUS的构建方法，包括引物设计、PCR扩增和载体构建；其特征在于：（1）引物设计：人工设计合成特异引物序列Forward?primer:?5’??GCAAGCTTTTTCCCGCCTTCAGTTTAGC???3’Reverse?primer:?5’??GCTCTAGAACACTGATAGTTTAATTCC???3’；　??（2）PCR扩增：?PCR反应体系是10×PCR?Buffer?2.5?μl，dNTP?2.0?μl，10?μmol/L的Forward?primer?1.0?μl，10?μmol/L的Reverse?primer?1.0?μl，5?U/μl的...

【技术特征摘要】
1.一种植物表达载体pG II 0229-GUS的构建方法，包括引物设计、PCR扩增和载体构建；其特征在于: (O引物设计:人工设计合成特异引物序列Forward primer: 5’ - GCAAGCTTTTTCCCGCCTTCAGTTTAGC - 3’Reverse primer: 5’ - GCTCTAGAACACTGATAGTTTAATTCC - 3’ ； (2) PCR 扩增:PCR 反应体系是 IOXPCR Buffer 2.5 μ I, dNTP 2.0 μ 1,10μ mol/L 的 Forward primer 1.0 μ I, 10 μ mol/L 的 Reverse primer 1.0 μ I, 5 U/ μ I的 Ex Taq 酶 0.125 μ 1,100 ng/ μ I 的 DNA 模板 1.0 μ 1，加 ddH20 至终体积 25 μ I ；PCR程序是95 °C预变性5 min，95 °C变性30 s，56°C退火30 s，72°C延伸3 min，30个循环，最后72°C延伸10 min ;所述DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：高世武，林庆良，郭晋隆，许莉萍，王天池，阙友雄，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：