【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及血液循环DNA测定
，具体是一种定量测定血液循环DNA的方法。
技术介绍
血液循环DNA (Circulating DNA, ctDNA)，又称游离 DNA 或无细胞 DNA (Cell-freeDNA)，主要来源于细胞的凋亡和死亡。可作为肿瘤、自身免疫病及胎儿遗传学检测的依据。目前的检测方法均需要先从血清或血浆中提取DNA，然后扩增基因组中某个基因的方式，计算ctDNA的浓度或基因组拷贝数。由于个体间、不同病理状态间ctDNA含量及片段完整程度存在较大差异，即便不考虑操作者的因素，所用提取方法和试剂的不同就会造成提取效率存在巨大差别。在此基础上的ctDNA测定结果误差会更大。但直接用血浆或血清扩增，血清或血浆中含有的蛋白质等会严重干扰PCR，使标本间的扩增效率不一致。此外，以SYBR Green为染料的定量PCR技术存在荧光染料信号强度低，灵敏度不高，对于低拷贝数的模板不容易检测到。
技术实现思路
为了克服以上技术缺陷，本专利技术提供一种快速准确的定量测定血液循环DNA的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案为，一种定量测定血液循环DN...
【技术保护点】
一种定量测定血液循环DNA的方法，其特征在于，其步骤如下：(1)取1ml同一个肿瘤患者外周静脉血，置于EDTA抗凝管中，10℃?20℃静置4小时，2000g离心5分钟，取上层血浆100ul?200ul，加入相同体积的缓冲液，充分混匀，95℃静置5?10分钟，16000g离心10分钟，取上清液为模板直接用于定量PCR扩增；(2)取10ul上述处理后的血浆DNA，加入90ul的0.5×缓冲液稀释10倍，再取10ul稀释后的血浆DNA，加入90ul的0.5×缓冲液再稀释10倍，依次稀释下去，制备出不同稀释倍数的血浆；(3)分别取2ul不同稀释倍数的血浆直接进行定量PCR扩增，取P...
【技术特征摘要】
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