本发明专利技术公开了一种检测与女性抑郁症相关的SNP的PCR试剂盒。本发明专利技术还提供了一种检测该多态位点及其与女性抑郁症易感性的方法。利用本发明专利技术提供的多态位点的核酸序列及其检测方法，分析人体的位于11q13.3区域甘丙肽基因上的常见型单核苷酸多态性位点rs694066的A等位位点，即在其DNA互补链上为T等位位点有无，来应用于抑郁症的辅助诊断和对个体是否具有抑郁症的易感性进行评判。从而有利于疾病的预防、早期诊断和治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种甘丙肽基因单核苷多态性位点rs694066的多态性与女性的相关抑郁症的相关性，本专利技术还涉该多态位点的PCR检测试剂盒，以及该多态性位点在预防、辅助诊断与治疗女性抑郁症方面的用途。该专利技术属于生物
技术介绍
抑郁症是发病率、致残性高，社会危害严重的精神障碍。大量研究认为抑郁症的病因复杂，涉及遗传、生化、心理和社会环境等多种因素。研究显示，单相抑郁的终生患病率在10%以上，且女性是男性的2倍左右。单核苷酸多态性(SNP)是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP可以出现在基因调控区和编码区，出现在编码区的SNP可能改变基因的编码使蛋白中某个氨基酸发生改变而影响其功能；而出现在基因调控区的SNP则主要影响基因的表达。SNP作为一种稳定遗传的早期突变，与疾病有着密切的相关性。当一种SNP的频率在患者明显超过非患者时，即表明该SNP与疾病关联，通过比较分析两者的单倍型和研究连锁不平衡性，可将基因组中任何未知的致病基因定位。SNP在疾病基因定位中所发挥的作用主要包括:一是在疾病定位区域中寻找致病SNP，这种SNP的出现可能直接导致了基因转录水平上和翻译水平上的变化，即改变了基因表达量或者基因产物蛋白质的组成结构，从而导致某种疾病发生或使得个体对某种特殊的环境易感；二是SNP作为一个遗传标记，与疾病或表型紧密连锁。 甘丙肽是一个由定位于11号染色体上的甘丙肽基因编码的，30个氨基酸组成的多肽，广泛分布于中枢神经系统，通过与不同的受体结合表现出多种生理效应。多项文献显示，甘丙肽与单胺类递质和应激通路关系密切，具有调节中枢5-HT能和去甲肾上腺素能神经兀的活性和表达的作用。同时，通过给予大鼠脑室内注射甘丙肽或其不同的受体激动剂或拮抗剂后能能影响大鼠的抑郁样行为。而且，甘丙肽受体拮抗剂M40可以阻断药氟西汀的抗抑郁效果。因此，甘丙肽基因可能是抑郁症的一个易感基因。通过神经发育实验大鼠、绵羊的研究显示，甘丙肽的表达可能受到雌激素的调节，且甘丙肽在机体的含量具有性别两极性分布，即雌性动物体内含量显著高于雄性。Paul GU 等人通过对欧洲抑郁症患者和焦虑症患者研究也发现，甘丙肽基因多态性与女性患者的症状严重性密切相关，在男性患者未发现这种关联。这一结果提示，甘丙肽可能是抑郁症患者尤其是女性患者的易感基因或女性抑郁症患者的保护性因素。但这一结果有待于进一步的证实。本研究通过对来自北京和河南两地的700例抑郁症患者和673例健康对照者进行甘丙肽基因10个SNPs位点基因分型检测，结果发现，整体样本中多态性位点rs694066位点与抑郁症高度关联；性别分层后，仅在女性样本中表现出高度关联，而男性患者无显著性关联。这一结果充分提示，甘丙肽基因可能是女性抑郁症的易感基因。经对现有国内外文献和专利检索，至今未见有任何甘丙肽基因多态性位点rs694066与女性抑郁症易感性相关的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的就在 于揭示甘丙肽基因多态性位点与抑郁症的相关性，及其在检测抑郁症方面的用途。本专利技术的目的在于揭示甘丙肽基因的单核苷酸多态位点与女性抑郁症的易感性，以及该多态性位点在筛选女性抑郁症易感人群方面的用途。本专利技术通过对700例抑郁症患者(男性324例，女性376例)和673例健康对照者(男性313例，女性360例)的甘丙肽基因10个单核苷酸多态性位点的研究发现:甘丙肽基因SNP位点rs694066与抑郁症具有显著关联。抑郁症患者组甘丙肽基因的rs694066多态性位点基因型GG频率显著减少，AG型增多；抑郁症患者组rs694066等位基因G频率降低，A等位基因频率则升高。经过性别分层后，376例女性抑郁症患者和360例女性健康对照者纳入分析。结果显示，女性抑郁症患者组甘丙肽基因的rs694066多态性位点基因型GG频率显著减少，AG型增多；抑郁症患者组rs694066等位基因G频率降低，A等位基因频率则升高。对324例男性抑郁症患者与313例男性健康对照者分析结果显示，甘丙肽基因的多态性位点与疾病无显著性。本专利技术首先提供一种检测甘丙肽基因的单核苷酸多态性的方法，包括以下步骤:(a)确定甘丙肽基因片段的SEQ ID NO:1所示序列的第91位SNP的核苷酸；(b)检测在所述位置是否存在单核苷酸多态，即在第91位存在A/G(在序列表中标注为r)，在其DNA互补链上为T/C等位位点。本专利技术的第二方面是提供一种分离核酸，具有SEQ ID NO:1所示的序列，且第91位为A/G。本专利技术的第三个方面提供了一对特异性的核酸引物，具有SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3所示序列，且特异性地扩增出含甘丙肽基因部分序列的SEQ ID NO:1所示序列中第91位单核苷酸多态的扩增产物。优选的核甘酸引物的序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示，长度各为22bp，能特异性的扩增出SEQ ID NO:1所示的序列，该序列包含rs694066单核苷酸多态位点。本专利技术的第四个方面还提供了一种抑郁症易感人群进行遗传筛查PCR试剂盒。该试剂盒基于等位基因特异性PCR(allele specific PCR，AS_PCR)检测甘丙肽基因rs694066位点多态性。该试剂盒是由分离包装的引物、无MgCl2的缓冲液、高保真DNA聚合酶、MgCl2、dNTP料和水组成，其中引物的序列为:上游引物:5'-TCATGTCAAATATAGCCGACTT-3' (SEQIDN0:2)；下游引物:5'·-AGAACCGTACACAGATCAAG-3' (SEQID NO:3)；rs694066_AF:5/ -GTTCTAAGTCCTCTGCCATGCCA-3' (SEQ ID NO:4);rs694066_AR:5/ -GGTCCAGCCTCGTTTTTCCT-3' (SEQ ID NO:5);rs694066_GF:5/ -GTTCTAAGTCCTCTGCCATGCCG-3' (SEQ ID NO:6)；rs694066_GR:5/ -ACGGGCAATGAGGTCAAGAG-3' (SEQ ID NO:7)。试剂盒检测rs694066SNP位点的具体方法如下:1.样品基因组DNA的提取:按照常规的DNA提取方法进行DNA提取；2.目的基因片段(包含SEQ ID NO:1所示序列)的PCR扩增:以样品基因组DNA为模板，用上、下游引物扩增目的基因片段；3.rs694066位点多态性检测:以第2步PCR扩增所得的基因片段为模板，分别以rs694066_A+rs694066_AR和rs694066_G+rs694066_GR引物对扩增多态性位点基因片段；4.结果判定:1.5%琼脂糖凝胶电泳检测片段大小，当扩增片段长度为125bp时rS694066位点的基因型为A，在其互补链上等位位点为T ;当扩增片段长度为283bp时rs694066位点的基因型为G，在其互补链上等位位点为C。利用本专利技术所提供的与抑郁症相关的多态位点的核酸序列，可构建对抑郁症易感人群进行遗传学筛选的试剂盒。本专利技术所述试剂盒使用方便，只需对扩增产物做琼脂糖凝胶电泳检测即可，无需测序，对于仪器的要求较低无需测序仪，检测所需时间较少。附图说明图1Ge本文档来自技高网...
【技术保护点】
SEQ?ID?NO：1所示的部分甘丙肽基因的核苷酸序列中第91位核苷酸的A/G多态性序列在制备用于诊断女性抑郁症的试剂盒中的引物和/或探针的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王永军，王立娜，张勇辉，葛洪敏，王艳，
申请(专利权)人：天津市安定医院，
类型：发明
国别省市：
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