一种高脂质含量葡萄藻新品系的选育方法技术

本发明专利技术涉及葡萄藻开发利用，旨在提供一种高脂质含量葡萄藻新品系的选育方法。该方法是向葡萄藻液中加入微粒型的黄单胞多糖，置于冰水浴中用超声波将葡萄藻集落制备成单细胞；经紫外线辐射诱变及低熔点琼脂糖固定化培养后，利用尼罗红显微荧光活体筛检技术获得高含脂量的葡萄藻候选突变体；再经扩大培养和脂质含量测定选育出高脂质含量的葡萄藻新品系。本发明专利技术方法与传统选育方法相比，具有简便、高效，且可实现高通量筛检等优点，可为葡萄藻育种等提供必要的技术方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于能源微藻一葡萄藻开发利用的技术，特别涉及。
技术介绍
葡萄藻(Botryococcus)是一种世界广布的能源微藻，该藻因脂质含量通常为其细胞干重的25-35%，普遍高于小球藻等其它微藻，且脂质的组成和结构与化石原油的也最为相近，而被誉为“油藻”，以其生产航空燃油等高品质燃料一直是近年来全球生物能源领域的石开发热点之一 [Metzger & Largeau.Botryococcus brauni1: a rich source forhydrocarbons and related ether lipids.Appl Microbiol Biotechnol.2005, 66:486 - 496; Sakamoto, et al.0ptimization of light for growth, photosynthesis,and hydrocarbon production by the colonial microalga Botryococcus brauniiBOT-22.Bioresource Technology.2012, 110: 474 47本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高脂质含量葡萄藻新品系的选育方法，其特征在于，该方法是：将葡萄藻液置于离心管，加入微粒型的黄单胞多糖，然后置于冰水浴中，并用超声波将由几十至上百个细胞形成的葡萄藻集落制备成单细胞；单细胞化的葡萄藻经紫外线辐射诱变及低熔点琼脂糖固定化培养后，利用尼罗红显微荧光活体筛检技术获得高含脂量的葡萄藻候选突变体；再经扩大培养和脂质含量测定选育出高脂质含量的葡萄藻新品系；所述的低熔点琼脂糖是指在多糖链上引入羟乙基后的琼脂糖；所述的高脂质含量的葡萄藻是指脂质含量比其出发品系至少高30%的葡萄藻。

【技术特征摘要】
1.一种高脂质含量葡萄藻新品系的选育方法，其特征在于，该方法是:将葡萄藻液置于离心管，加入微粒型的黄单胞多糖，然后置于冰水浴中，并用超声波将由几十至上百个细胞形成的葡萄藻集落制备成单细胞；单细胞化的葡萄藻经紫外线辐射诱变及低熔点琼脂糖固定化培养后，利用尼罗红显微荧光活体筛检技术获得高含脂量的葡萄藻候选突变体；再经扩大培养和脂质含量测定选育出高脂质含量的葡萄藻新品系；所述的低熔点琼脂糖是指在多糖链上引入羟乙基后的琼脂糖；所述的高脂质含量的葡萄藻是指脂质含量比其出发品系至少高30%的葡萄藻。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤: (1)取4mL待测葡萄藻液于5 mL离心管中，再加入微粒型黄单胞多糖，并置于冰水浴中预冷；微粒型黄单胞多糖的添加量为5粒,0.2 mg/粒,共I mg ； (2)预冷藻液经超声波处理10s后，在光学显微镜下观察葡萄藻集落是否已被分散成单细胞； (3)若没有，则用每次5s的超声波进行多次处理，直至被分散成单细胞，由此计算被测葡萄藻液适宜的超声处理时间T=10+5Xn，单位为S，其中n为每超声处理5 s的次数； (4)用孔径为0.45Mffl的无菌滤膜过滤藻液使藻细胞均匀平铺于滤膜上，并用紫外线进行诱变处理； (5)将滤膜上的藻细胞转移至培养液中，并使其560nm的光密度D56tl为0.05，转入10ml的PE管中，每管装4 ml，并置于37°C水浴中保温； (6)用低熔点琼脂糖固定细胞，并置于25°C光照培养箱中培养30d； (7)将含藻细胞的低熔点琼脂糖凝胶切成Imm厚的圆片，并置于含2%(V/V) 二甲基亚砜和I吒/mL尼罗红的染色液中于黑暗下4...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪志平，马丽芳，刘新颖，于金鑫，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：