本发明专利技术公开了一种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法，诱变电压为21kV，针尖距离为8mm，诱变时间为4min。所述的方法中采用的高压电晕电场装置，针尖间距为20mm，针板间距是25mm，针尖直径d＜0.01mm。黄霉素产生菌08-28对电场很敏感，随着诱变剂量的增大菌种致死率也随之增大，诱变电压为21kV，针尖距离为8mm，诱变时间为4min时是最佳诱变剂量。经过电场诱变处理、筛选及传代培养得到了“诱变3号”菌株，其产黄霉素的能力相对原始菌株最高提高了1.92倍。说明高压电晕电场处理黄霉素产生菌有较好的诱变效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是ー种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法及其装置。
技术介绍
黄霉素(Flavomycin)又名默诺霉素(Moeno_mycin)、黄磷酯素 (Flavophospolipl)、斑伯霉素(Bam-bermycin),是德国赫斯特公司在20世纪70年代初期开发的ー种新型抗生素类促生长剂。黄霉素主要由五个微生物活性物质组成，其中默诺霉素A为主要成分，此种抗生素通过真菌的厌氧发酵形成，存在于菌丝体中，可通过提取分离。对纯化后的抗生素进行理化分析表明，它是ー种含磷的糖酷，不同于现有的任何ー种抗生素。具有用量小、促生长效果显著，性能稳定，不与其它添加剂产生拮抗作用，不易产生耐药性，无污染、无残留、安全性高等特点。黄霉素在国外畜牧水产养殖业已得到普遍应用，而在我国的应用刚刚起步，科技工作者将紫外(UV)、微波物、离子注入剂和化学[9]诱变技术引进了诱变育种领域。为了提高黄霉素等微生物菌种的生产能力，应用合理的筛选程序及适当的筛选办法把优良的菌种选育出来，开发新的诱变方法为ー个有益的尝试，我们用高压电晕电场作为新的诱变源对黄霉素产生菌进行了研究。自从人们发现电场生物效应后，电场对生物体的影响成为了研究的热点，并且在许多领域得到了应用，电子束辐照可以对食物进行保鲜。电场处理能明显提高植物愈伤组织诱导率和分化率。而利用高压电晕电场对微生物进行诱变的方法尚未见报道。本试验用我们研究设计的针-板高压电晕电场处理装置，以出发菌08-28菌种进行电场诱变处理，以期得到性能稳定、优良高产的黄霉素生产菌种，从而证实高压电晕电场装置可以对微生物进行诱变。专利技术内容本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供ー种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法及其装置。本专利技术的技术方案如下ー种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法，诱变电压为21kV，针尖距离为8mm,诱变时间为4min。所述的方法中采用的高压电晕电场装置，针尖间距为20mm，针板间距是25mm，针尖直径d < O. 01mm。黄霉素产生菌08-28对电场很敏感，随着诱变剂量的增大菌种致死率也随之增大，诱变电压为21kV，针尖距离为8mm，诱变时间为4min时是最佳诱变剂量。经过电场诱变处理、筛选及传代培养得到了“诱变3号”菌株，其产黄霉素的能力相对原始菌株最高提高了 I. 92倍。说明高压电晕电场处理黄霉素产生菌有较好的诱变效果。附图说明图I为闻压电晕电场实验装直；a :针尖间距；d :针板间距；A :电流表；V :电压表；图2为负电晕放电的伏安特性；图3为正电晕放电的伏安特性；图4为极板间温度与电压的关系；图5为诱变致死率曲线。具体实施例方式以下结合具体实施例，对本专利技术进行详细说明。I.材料和方法I. I 材料I. I. I菌种出发菌种08-28 (斑驳链霉菌S. bambergiensis)内蒙古中牧生物药业有限公司提供。 I. 1.2试剂黄霉素标准品(Img相当于1395黄霉素单位)，中国兽医药品监察所；硫酸链霉素(650μ g/mg)，进ロ ；Ager，Japan ;糊精、K2HP043H20，天津市风船化学试剂科技有限公司；FeS04*7H20、葡萄糖、MgS04*7H20，天津市四通化工厂；甲酸铵、蛋白胨、天津市光复精细化工研究所；酵母浸粉，北京奥博星生物技术责任有限公司；抗坏血酸，天津市化学试剂三厂；牛肉浸膏，天津市英博生化试剂有限公司；淀粉酶，北京双旋微生物培养基制品厂；Tris-Base, Sigma ;以上试剂均为分析纯。甲醇(色谱纯)，天津市光复精细化工研究所；こ腈(色谱纯)，天津市永大化学试剂有限公司；大豆粉、玉米浆、玉米淀粉，市售。I. I. 3 色谱柱选用 Agilent HC-C18 色谱柱(250X4. 6mm)。I. I. 4仪器AKTA Purifier 10蛋白纯化仪(通用电气中国医疗集団)JY92-II型超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；数显恒温水浴锅(苏州威尔实验用品有限公司)；KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；pH计(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；G154DWS型高温灭菌锅(美国独资致微厦门仪器有限公司)；BS110S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；高速冷冻离心机(USA)；恒温摇床(上海智城分析仪器制造有限公司)；低温冰箱(青岛海尔股份有限公司)；生化培养箱(湖北省黄石市恒丰医疗机械有限公司)。I. I. 5培养基斜面及平板分离培养基(g/100mL):糊精I. 5g, K2HPO4 ·3Η20 O. 05g，蔗糖 O. 3g，MgSO4 · 7H20 0.04g，酵母浸粉 0. 3g，FeSO4 · 7H20 0. Olg，大豆蛋白胨 0. 5g，NaCl0. 05g，牛肉浸膏0. lg，琼脂粉I. 2g。使用超纯水配制，定容至配制体积，用lmol/L的NaOH和 lmol/L 的 HCl 调节 pH 至 6. 8-7. O。种子摇瓶培养基(g/1 OOmL):玉米浆0. 3g，K2HPO4 O. Ig,大豆粉3. Og,轻质CaCO3O. 25g，葡萄糖4. 0g。注超纯水配制，配制时，先将玉米浆和大豆粉加水混合，在100°C下加热糊化30min ;再加入其他成分，定容至配制体积调节pH至6. 8-7. O, CaCO3单独称量且分装到每个摇瓶中。发酵摇瓶培养基(g/1OOmL):玉米浆O. 9g，FeSO4 · 7H20 O. 00004g,大豆粉 3. 4g，CoSO4 · 7H20 0. 0001g,玉米淀粉 3. 2g, ZnSO4 · 7H20 0. 0002g,大豆色拉油 4. 0g, CuSO4 · 5H20O. 0005g, (NH4)2SO4 0. 3g, CaCO3 0. 5g, K2HPO4 0. Olg,淀粉酶，0. 0000064g, MgSO4 · 7Η20O. 05g,消泡剂 O. 02ml/100ml。以上均为121°C灭菌30min。1.1.6培养条件斜面及平板分离培养基37°C恒温培养72h_96h，单菌落直径在3_5mm。种子摇瓶培养基37°C恒温培养24h，摇床转速250_260r/min。发酵摇瓶培养基37°C恒温培养170h，摇床转速250_260r/min。I. I. 7菌悬液的制备取平板分离培养基上生产良好的单菌落，在无菌状态下接至种子药瓶中。待培养完成后，将已灭菌的玻璃珠和碎玻璃片倒入三角瓶中，包扎好，放在摇床上(250-260r/min) 振荡30分钟后，梯度稀释平板计数，菌丝段浓度约为8*107个/ml，封ロ待用。I. 2 方法I. 2. I平板分离取一定量出发菌液08-28进行梯度稀释并涂布在平板分离培养基上，37°C恒温培养3-4d，以去除杂菌。I. 2. 2抗性菌株的筛选挑选单菌落制成菌悬液并分别涂布于含有链霉素(浓度为O-l.Ou/ml)的平板培养基上37°C恒温培养3-4d。观察不同平板上的菌落生长情况，记录链霉素的最低作用浓度，即为菌株对链霉素的最小抑制浓度，此浓度下生长的菌株即为抗性菌株。I. 2. 3高压电晕电场的设计实验装置示意图如本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ー种利用高压电晕电场对黄霉素产生菌进行诱变的方法，其特征在于，诱变电压为2IkV,针尖距离为8mm,诱变时间为4min。2.权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：那日，
申请(专利权)人：那日，
类型：发明
国别省市：
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