本发明专利技术属于菌种诱变，特别是指一种菌种诱变仪以及利用其复合诱变放射形根瘤菌的方法。菌种诱变仪包括箱体、箱门、箱盖；电路部分包括电源、紫外灯管、红外线灯、变压器、电感线圈、滑动变阻器以及显示仪表，紫外灯管、红外线灯和变压器初级线圈并联后分别接于电源两端，变压器次级线圈经滑动变阻器与电感线圈构成回路，显示仪表联接于回路中，采用上述诱变仪对放射形根瘤菌CGMCCNO.5031进行复合诱变。本发明专利技术解决了现有技术存在解决了现有设备中诱变效果不明显、菌种产胶率低的问题，具有复合诱变仪可有效提高菌种诱变机率、诱变后的菌种产胶率得到明显提高等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于菌种诱变，特别是指一种。
技术介绍
微生物正常状态下发生基因突变的机率为10_6，发生正向突变的机率更低。采用单一的物理诱变方法对微生物突变产生的效应小，两种或两种以上的物理诱变方法复合使用对微生物突变产生的效应大。专利号为03218655. x的技术专利中公开了一种诱变接种两用箱，该技术通过外接的磁力搅拌器对其内部的菌种实现单一物理方法的诱变， 其强度不易实现调整和控制，且诱变效果不明显。放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的菌种，申请号为201110219188. 5的专利技术专利申请中公开可以利用该菌种生产可得然胶，但利用该菌种生产可得然胶发酵液中可得然胶的固含量较低。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种菌种诱变仪，本专利技术的目的之二是提供利用菌种诱变仪复合诱变放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031的方法，通过采用紫外灯光照、外加强度可调的磁场、使用红外线灯提高菌种诱变环境温度、以及利用药物诱变对放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031进行诱变，达到提高突变效应，提高突变后菌种的产胶率的目的。保藏编号为CGMCCNo. 5031的放射形根瘤菌已于2011年7月12日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，该保藏单位位于北京市朝阳区北辰西路I号院3号， 该诱变株的分类命名为放射性根瘤菌(Rhizobium radiobacter)。本专利技术的目的之一是这样实现的菌种诱变仪，包括箱体、封装于箱体前部的箱门、设置于箱体外部的箱盖；电路部分包括电源、紫外灯管、红外线灯、变压器、电感线圈、滑动变阻器以及显示仪表，紫外灯管、红外线灯和变压器初级线圈并联后分别接于电源两端，变压器次级线圈经滑动变阻器与电感线圈构成回路，显示仪表联接于回路中；其中紫外灯管、红外线灯设于箱体内部上方；显示仪表包括串联设置于回路中的电流表，分别联接于电感线圈首尾两端的电压表；电源选用220V交流电源，电感线圈用直径O. 5毫米铜导线、缠绕匝数为1000，紫外灯管的波长为 260nm，红外线灯的功率为35W。本专利技术的第二个目的是这样实现的利用菌种诱变仪复合诱变放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031的方法，由如下工艺步骤组成A、化学诱变将放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031试管菌种斜面接种于装有灭菌后的150-200ml培养基的三角瓶中，进行摇床培养得到菌悬液，摇瓶培养的条件为转速200-220转/分钟，温度36-38°C，培养时间20-24小时；摇瓶培养基由如下质量百分数的组分组成葡萄糖O. 5%-1%、蛋白肽O. 1%-0. 3%、磷酸氢二钾O. 15%-0. 25%、磷酸二氢钾O.05%-0. 1%、生物素 5ppm-10ppm、5-溴尿嘧啶 O. 005%-0. 01%、利福平 O. 0005%-0. 001%、余量为无菌水，pH=6-7 ；B、磁光热药复合诱变 BI、培养平板的制备将步骤A中制备的菌悬液稀释后，取O. 1-0. 15ml均匀涂覆在盛有固体培养基的培养皿表面，固体培养基由如下质量百分数的组分组成葡萄糖O. 5%-1%、花生饼粉O. 1%-0. 3%、蛋白胨O. 1%-0. 3%、磷酸氢二钾O. 08%-0. 1%、 磷酸二氢钾O. 02%-0. 04%、生物素20ppm-30ppm、5-溴尿嘧啶O. 005%-0. 01%、利福平 lppm-1. 5ppm、琼脂 I. 5%-2. 0%、余量为无菌水，pH=6_7 ；B2、复合诱变开启菌种诱变仪预热，打开红外线灯D3使箱体内温度保持至36-38°C ;打开紫外灯管 D2，然后调节滑动变阻器R旋钮使电流表A指针指向O. 6A，紫外照射30秒后关闭紫外灯管 D2 ；72小时时，调节滑动变阻器R旋钮使电流表A指针指向O刻度，关闭红外线灯D3 ;将培养皿包扎严密后取出，倒置放置于培养箱中36-38°C培养86-96小时得到该菌种的诱变株。申请人:已于2012年3月6日将该诱变株提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，该保藏单位位于北京市朝阳区北辰西路I号院3号，该诱变株的分类命名为放射性根瘤菌rat/ioAacier),保藏编号为CGMCCNo. 5848。本专利技术的具体技术构思还有为便于进行箱体内的菌种诱变操作，观察操作过程中培养容器中的菌落形态，优选的技术方案是在箱体内部上方还设一照明灯，该照明灯与紫外灯管、红外线灯、变压器初级线圈并联后接于电源两端。为便于对电感线圈所在的回路中的电流和电压情况进行观察和控制，优选的技术方案是电压表和电流表设于箱盖表面，变压器、滑动变阻器、电感线圈、电源设于箱体一侧外部的箱盖内。电感线圈可以根据实际情况选用包括铁氧体线圈、铁芯线圈等多种现有的形式， 并不脱离本专利技术的实质。其中优选的技术方案是采用铁芯线圈。为便于对滑动变阻器进行控制，以有效改变电感线圈所产生的磁场强度，优选的设计方案是滑动变阻器的滑动端与位于箱盖表面的控制手柄联连。所述的步骤BI中的菌悬液稀释是将步骤A中制备的菌悬液稀释为体积比为10, 的菌悬液。优选的稀释方法是，稀释是按照体积比为1:10的比例依次将步骤A中制备的菌悬液稀释为体积比为10_10的菌悬液，即依次稀释为10' 10_2、10' 10_4、10_5、10' 10' 10_8、 10'I (Tici。可以显而易见的是，步骤B2中对培养皿的包扎可以选用多种现有不透气的遮光材料(如牛皮纸、遮光膜等等)，以避免外界环境对培养皿内菌种的影响。其中较为优选且常见的是，步骤B2中采用牛皮纸将培养皿包扎严密。诱变后菌种发酵制备可得然胶固形物的检测(一)发酵液制备将诱变后的放射形根菌CGMCC NO. 5031试管斜面I支，无菌操作接种于装有灭菌好的 150-200ml培养基的三角瓶中进行摇床培养制成摇瓶种子，培养条件为转速200-220转/ 分钟，温度36-38°C，培养时间20-24小时。摇瓶培养的培养基由如下质量百分数的组分组成葡萄糖O. 5%-1%、蛋白肽O. 1%-0. 3%、磷酸氢二钾O. 15%-0. 25%、磷酸二氢钾 O. 05%-0. 1%、生物素 5ppm-10ppm、pH=6-7、余量为无菌水。将培养好摇瓶种子按照质量百分比为5-10%的接种量接入灭菌后的发酵培养基中进行摇床培养发酵，发酵条件为转速200-220转/分钟，温度36-38°C，培养时间90-96 小时，制得发酵液。发酵培养基由如下质量百分数的组分组成葡萄糖10%-12%、硝酸钠O. 3%-0. 45%、磷酸氢二钾O. 1%-0. 2%、磷酸二氢钾O. 15%-0. 3%、 FeSO4 10ppm-15ppm、生物素20ppm-30ppm、聚醚消泡剂O. 03%-0. 1%、余量为无菌水；(二)检测对发酵液中可得然胶的含量采用如下检测方法将发酵液倒入一定体积的小烧杯中，用玻璃棒搅拌使其无气泡，用玻璃棒把表面抹平， 把杯子外的发酵液清洗干净。发酵液用质量百分比为90-95%的乙醇提取、沉降、过滤布挤干，将其撕碎后全部彻底移入到培养皿中，在微波炉小火烘3分钟，然后放入100±5°C烘箱中烘至恒重(约4小时)，拿出称重。(三)计算固形物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张星昊，
申请(专利权)人：张星昊，
类型：发明
国别省市：
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