本发明专利技术公开一种茎瘤芥根瘤内生细菌GJ-06、含有该内生细菌的根肿病防治剂及应用，所述茎瘤芥根瘤内生细菌（Bacillus subtilis）GJ-06保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2015年11月9日，菌种保藏号为CCTCC NO：M 2015665；所述根肿病防治剂包括上述茎瘤芥根瘤内生细菌GJ-06，上述茎瘤芥根瘤内生细菌GJ-06作为有效成分；所述茎瘤芥根瘤内生细菌GJ-06和根肿病防治剂可在根肿病防治中应用。本发明专利技术内生细菌GJ-06将茎瘤芥的根肿病发病指数从75.3降低到36.1，对茎瘤芥的防治率达到52%，可有效减缓田间根肿病发病程度，取得了意想不到的效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于内生菌
，具体涉及一种茎瘤芥根瘤内生细菌sub tilis ) GJ-06、含有该内生细菌的根肿病防治剂及应用。
技术介绍
芸笞根肿菌{Plasmod1p hora brassicae fforon)属于原生生物界根肿菌门根肿菌纲根肿菌目根肿菌科，其主要危害白菜、油菜、榨菜、萝卜等十字花科植物，造成植物根部肿大，影响植物吸收，同时根肿菌侵染造成植物根系表皮破裂，土壤其他病原菌侵入，导致植物根系腐烂，植株矮小黄化甚至死亡，严重减产。芸薹根肿菌可在土壤中长期存活，一旦田间发病，难以消除，田块无法继续种植十字花科作物。近年来，随着我国十字花科作物种植面积的增加、种子和蔬菜广泛调运、连作年限增加等因素的影响，我国十字花科根肿病发生逐年加重，严重威胁十字花科作物的生产。棒菜(莖瘤芥)CSrawica juncea var.tumidaTsen etLee)属十字花科芸薹属芥菜种叶芥亚种大叶芥变种的变种。“涪陵榨菜”已经成为我国重庆的特色农业，涪陵区榨菜的种植面积和产量均居全国第一位。自1994年在涪陵地区发现榨菜根肿病起，目前该病已成为榨菜的主要病害，田间发病率30-50%，发病田块很难再继续种植榨菜，造成榨菜种植面积下降，严重威胁榨菜的可持续发展(高明泉，彭洪江，王旭，等.涪陵榨菜根肿病的危害与产量损失测定.植物保护，2002，28(6): 31-33 ;肖崇刚，郭向华，韩海波，等.涪陵榨菜根肿病病菌鉴定及主要特性.西南农业大学学报，2002，24(4): 539-541)。涪陵地区榨菜种植连作年限达10-20年，单一作物长期连作会导致连作障碍，造成土壤酸化、土壤微生物生态系统失衡、土传病害增加等问题(.Zhang X, Pan Z, Zhou X, et al.Autotoxicity and Continuous Cropping Obstacles:A Review.Chinese Journal of Soil Science,2007, 4: 33-38)。目前，涪陵地区榨菜连作田土壤已经呈现酸化，根肿菌休眠孢子在酸性环境下更容易存活(Narisawak, Ohhi K T, Hashiba Τ.Suppress1 η of clubroot andverticilli um yellowsin Chinese cabbage in the field by the root endophyticfungus Heteroconi umchaetospir a.Plant Pathology, 2000, 49: 141-146)，这也导致根肿病逐年加重。作为土传病害，根肿病的发生与土壤微生物、植物根系分泌物和土壤理化性质密切相关。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述不足，本专利技术所要解决的技术问题是:如何提供一种能够抑制根肿病的内生细菌和根肿病防治剂，使其可应用于根肿病防治中，有效降低茎瘤芥的根肿病病情指数。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案:一种茎瘤芥根瘤内生细菌(Bacillus sub tilis) GJ-06，其分类命名为枯草芽抱杆菌 GJ-06 (Bacillus sub tilisGJ-伙?)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址:中国武汉武汉大学，保藏日期为2015年11月9日，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2015665 ;所述茎瘤芥根瘤内生细菌{Bacillus subtil is) GJ-06 的 16SrDNA 序列如 SEQ ID N0.1 所示。上述茎瘤芥根瘤内生细菌subtil is) GJ-06在根肿病防治中的应用。一种根肿病防治剂，其组分包括上述莖瘤芥根瘤内生细菌{Bacillus sub tilis)GJ-06 ;其中，上述茎瘤芥根瘤内生细菌(也ciWys仰况iWs) GJ-06作为有效成分。上述根肿病防治剂在根肿病防治中的应用。相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果: 1、本专利技术从茎瘤芥中分离出内生细菌，并通过试验研究发现，内生细菌GJ-06将茎瘤芥的根肿病病情指数从75.3降低到36.1，对茎瘤芥根肿病的抑制达到52%，可有效减缓田间根肿病发病程度，取得了意想不到的效果。2、接种本专利技术GJ-06菌株的茎瘤芥发病时间较晚，茎瘤芥产量与健康菌株相当，经第二年田间试验表明，该菌可以稳定地抑制茎瘤芥根肿病，具有良好的稳定性。3、本专利技术根肿病防治剂以茎瘤芥根瘤内生细菌GJ-06为有效成分，且通过研究发现当该根肿病防治剂中GJ-06的浓度为2X 10scfu -mL 1时，对茎瘤芥根肿病抑制效果更好，抑制率达到52%。【附图说明】图1为内生细菌GJ-06的高倍显微镜图； 图2为内生细菌GJ-06的扫描电镜图； 图3为接种根肿病内生细菌GJ-06后茎瘤芥发病程度图。【具体实施方式】下面结合具体实施例和说明书附图对本专利技术作进一步详细说明。本实施案例在以本专利技术技术为前提下进行实施，现给出详细的实施方式和具体的操作过程，来说明本专利技术具有创造性，但本专利技术的保护范围不限于以下的实施例。下述实施例中使用的化学药品如无特殊说明，即为普通市售产品。实施例1 茎瘤芥根部内生细菌的分离: 将茎瘤芥(永安小叶)根肿病产生的根结和健康根表面消毒，放入无菌研钵中研磨成浆液，涂布于NA平板(牛肉浸膏3 g/L，蛋白胨2.5 g/L，葡萄糖5 g/L，琼脂16g/L。)上，37°C培养48 h后，挑取细菌菌落，纯化，备用。将分离得的根瘤内生细菌，经菌落形态及革兰氏染色初步鉴定，共得到8株内生细菌，初步标号为 GJ-01、GJ-02、GJ-03、GJ-04、GJ-05、GJ-06、GJ-07、GJ-08，采用 NA 培养基液体发酵培养，培养条件37°C培养12 h，用于后续试验，以清水为对照(CK)。实施例2 内生细菌的鉴定: 以细菌通用引物16SrDNA序列为设计引物(16S-F: agagtttgatcctggctcag，16S-R:tacggctaccttgttacgactt)，利用 PCR 方法(95 °C , 5min ；95 °C，30s，55 °C，30s, 72 °C，lmin30s，32cycle ；72 °C，lOmin ；12 °C , forever)扩增 GJ-06 菌株的16SrDNA序列，将扩增的序列转化大肠杆菌感受态细胞，挑取阳性克隆测序，在NCBI比较分析确定其分类地位；结果显示GJ-06与细菌域、厚壁菌门、芽孢杆菌纲、芽孢杆菌目、芽孢杆菌科、芽孢杆菌属细菌16SrDNA序列一致性为100%，表明该菌属于枯草芽孢杆菌。对GJ-06菌株进行高倍显微镜(目镜十倍，物镜100倍，放大1000倍)和扫描电镜表征，分析其形态特征，确定内生细菌种类。结果如图1和图2所示，单个细胞0.7-0.8X2-3微米，无荽腥，周生鞭壬，能运动，芽孢0.6椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏。其结构特征也与枯草芽孢杆菌相符，因此，鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。实施例3 内生细菌对茎瘤芥根肿病的抗性分析: 选择根肿病病发病重的茎瘤芥地块进行，在移栽时，将茎瘤芥幼苗截根处理， 将100 mL实施例1培养后的八种菌株悬浮液(IX 109 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种茎瘤芥根瘤内生细菌（Bacillus subtilis）GJ‑06，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2015年11月9日，菌种保藏号为CCTCC NO：M 2015665。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王殿东，潘丽梅，谭永忠，王旭祎，田雪亮，曾甜，姜清敏，
申请(专利权)人：长江师范学院，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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