本发明专利技术公开了一种增城中慢生根瘤菌及其用途。增城中慢生根瘤菌(Mesorhizobium zengchengense)RITF1218于2014年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2014492。本发明专利技术是从黑木相思根瘤中分离筛选出的增城中慢生根瘤菌(Mesorhizobium zengchengense)RITF1218，该类菌株与黑木相思(Acacia melanoxylon)、网脉相思(Acacia aneura)、南洋楹(Albizia falcataria)和银合欢(Leucaena leucocephala)等结合能力，具有强的抗逆性，在固氮微生物菌剂和生物有机肥生产中具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
： 本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种增城中慢生根瘤菌及其用途。
技术介绍
： 生物固氮是指一些细菌等可以将大气中的分子态氮转换成植物能够直接吸收利 用的氨态氮的过程。大气中78%的氮气，只有通过生物固氮才能够得到利用。氮是动植物 以及微生物生长发育所必须的元素之一，为了提高经济效益，过去曾大力发展化工产业，生 产化肥以改善土壤肥力，促使植物的快速生长。但是，化肥的大量使用能源消耗、水土污染， 甚至破坏了生态平衡。世界上的人口、资源、环境已成为当今全球性的问题，被称为"绿色革 命"的生物固氮日益受到重视，尤其在林业上的应用。由于林业具有生产周期长，立地条件 复杂等特点，使林业的施肥并不像农业那样的方便、有效。因此，生物固氮成为林木所需氮 素的重要来源。 一些发达国家的林业生产中，非常重视固氮微生物资源的开发与利用。由于物价 的上涨、保护环境意识的提高，生物制剂因为物美价廉、对环境无污染而广受青睐。世界上 许多国家都把研宄和开发微生物肥料及制品作为一项长远的计划。 相思树种（Acacia)是我国引种的重要速生树种，它不仅速生而且适应性广，耐干 旱，耐贫瘠，速生丰产，能产生根瘤，有固氮作用，具有良好的改良土壤性能，从其引进试种 到目前的规模化种植，已在林业产业和生态环境建设中发挥了重大作用。选择合适的根瘤 菌制作菌肥是提高林业生产、创造经济价值和改善生态环境的重要环节，可实现经济效益 及生态效能的双赢，并能带动林业技术进步。 菌种是微生物肥料生产应用的基础。目前限制我国微生物肥料行业发展的瓶颈是 优良菌株的选育问题。林业生产迫切需求固氮能力强、抗逆性强的微生物肥料生产用菌株。
技术实现思路
： 本专利技术的目的是提供一种高效固氮结瘤并能与黑木相思、银合欢、南洋楹和网脉 相思共生结瘤的新菌种一增城中慢生根瘤菌（Mesorhizobium zengchengense)RITF1218， 该菌于2014年10月17日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC)，地址：中国武汉武汉 大学，保藏编号为CCTCC NO :M 2014492。 本专利技术是从黑木相思根瘤中分离筛选出的增城中慢生根瘤菌（Mesorhizobium zengchengense) RITF1218，该类菌株能与黑木相思（Acacia melanoxylon)、网脉相思 (Acacia aneura)、南洋楹（Albizia falcataria)和银合欢（Leucaena leucocephala)等 共生结瘤，具有较强的抗逆性，因此在固氮微生物菌剂和生物有机肥生产中具有广阔的应 用前景。本专利技术的 Mesorhizobium zengchengense RITF1218 于 2014 年 10 月 17 日保藏 于中国典型培养物保藏中心（CCTCC)，地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC N0:M 2014492。【附图说明】：图1是增城中慢生根瘤菌的16S rRNA与参比菌株的系统发育树 图2、图3和图4是采用最大似然法构建的系统发育树，分别是以增城中慢生根瘤 菌和中慢生根瘤菌属内较相近种群的持家基因r ecA、atpD和glnll的序列构建的。 图5是增城中慢生根瘤菌的生理生化反应。【具体实施方式】： 以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 YMA 培养基：甘露醇 10. 0g，谷氨酸钠 0? 5g，K2HP040. 5g，MgS04 ? 7H20 0? 2g， NaClO. Olg，酵母粉0. 5g，琼脂粉17g，蒸馏水1000mL，pH 7. 0。灭菌备用。 Jensen' s 无氮营养液：K2HP040 . 05g，NaCl 0? 05g，MgS04 ? 7H20 0? 05g， CaHP040. 25g，FeCl30.05g，lmL 微量元素溶液（H3B032. 86g/L，MnS04 ? H20 2. 08g/L， ZnS04 ? 7H20 0? 022g/L，CuS04 ? 7H20 0? 08g/L，NaMo040. llg/L)，蒸馏水 1000mL。灭菌备用。 实施例1:增城中慢生根瘤菌RITF1218、RITF907、RITF908的分离与鉴定 -、根瘤菌的分离 菌株分离自广东省惠州市和增城市苗圃的黑木相思根瘤。根瘤用自来水冲洗干净 表面泥沙，于95 %酒精浸泡30秒后，放入0. 1 %升汞溶液中表面消毒5分钟，无菌水冲洗8 次。将经表面消毒后的根瘤放在两片无菌载玻片之间，用力挤压使根瘤破碎，用无菌接种针 沾取根瘤液在YMA平板上划线，28~30°C恒温培养箱培养至菌落出现，挑取典型菌落纯化 及鉴定。由此纯化得到根瘤菌RITF1218、RITF907、RITF908。 二、根瘤菌的鉴定 从以下几个方面鉴定根瘤菌1?打？1218、1?几?907、1?几?908: 1、形态学鉴定 将处于对数生长期，且菌落大小稳定，上述步骤一分离并纯化的根瘤菌RITF1218、 RITF907和RITF908进行单菌落状态描述，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、湿润度、菌 落表面状态、菌落边缘状态。 对于处于对数生长期的根瘤菌，经涂片染色后采用光学显微镜观察菌体的形态。 结果表明，上述步骤一分离纯化的3株根瘤菌RITF1218、RITF907和RITF908为革 兰氏阴性菌，菌落圆形凸起，乳白色，半透明，表面光滑，边缘整齐；菌体杆状无芽孢。 2、生理生化特征分析 API 50CH和API 20NE用来分析代表菌株RITF1218的生理生化特征。如图5。 所述根瘤菌的生理生化特征测定结果如下：根瘤菌RITF1218、RITF907和RITF908的菌落黏稠，边缘整齐；在BTB培养基上产 酸；菌株RITF1218能利用甘氨酸、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、D-核糖、D-木糖、L-木糖、 D-侧金盏花醇1、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、卫矛醇、肌醇、甘露 醇、山梨醇、熊果苷、七叶灵、D-纤维二糖、D-麦芽糖、D-密二糖、D-蔗糖、D-海藻糖、D-棉 籽糖、木糖醇、D-龙胆二糖、D-松二糖、D-来苏糖、D-塔格糖、D-岩藻糖、L-岩藻糖、D-阿 拉伯醇和苹果酸作为唯一碳源的培养基上生长；在L-山梨糖、甲基-a D-吡喃葡萄糖苷、 N-乙酰葡萄糖胺、水杨苷、D-乳糖、L-阿拉伯醇和5酮葡萄糖酸钾作为唯一碳源的培养基 上缓慢生长；但是不能在能在赤藻糖醇、甲基-0 D吡喃木糖苷、甲基-a D-吡喃甘露糖苷、 苦杏仁苷、菊粉、D-松三糖、淀粉、糖原、葡萄糖酸盐、2酮葡萄糖酸钾、葵酸、己二酸、柠檬酸 和苯乙酸的培养基上生长。硝酸盐反应、脲酶反应、半乳糖苷酶反应和氧化酶反应为阳性； 色氨酸吲哚反应、葡萄糖酸化反应、精氨酸双水解反应和明胶蛋白酶水解反应为阴性。 3、16S rRNA序列测定及系统发育分析 常规方法培养根瘤菌RITF1218、RITF907和RITF908,提取菌株的总DNA作为基因 扩增模板，以细菌 16S rRNA 通用引物，27F :5' 一 AGAG本文档来自技高网...
【技术保护点】
增城中慢生根瘤菌(Mesorhizobium zengchengense)RITF1218，其保藏编号为CCTCC NO：M 2014492。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陆俊锟，朱亚杰，康丽华，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44
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