一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法。本发明专利技术方法采集金丝油的当年生枝条，以其带腋芽的茎段为外植体，采用特定方法消毒除菌，大大降低了褐死率及污染率；研制特定的培养基进行丛芽诱导、继代增殖及生根诱导，丛芽诱导率为15.4％且无玻璃化，增殖倍数达2.7，生根率达到72.5％；选择合适的炼苗条件和移植方法，成活率可达75％以上；由此得到大量土沉香易结香优株金丝油的无性系种苗，该类种苗能完全继承优株金丝油的优良结香特性，充分满足市场对金丝油无性系苗木的需求。充分满足市场对金丝油无性系苗木的需求。充分满足市场对金丝油无性系苗木的需求。

【技术实现步骤摘要】
一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法


[0001]本专利技术属于生物育种
，具体涉及一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法。

技术介绍

[0002]土沉香(Aquilaria sinensis(Lour.)G)是我国乡土珍贵树种，其木质部能产生沉香木，药用价值极高，是我国传统珍贵药材，也是香薰、香水、高端工艺品的重要原料来源。市场对沉香木的需求主要来自人工栽培，在栽培过程中人们发现一个优良单株易结香、产香量高、香品质好(含油量达到40％且香气怡人)，极受市场欢迎；这株具有优良结香品质的土沉香树被命名为金丝油。人们希望能获得大量金丝油的子代树，然而当香农用金丝油母树的种子继续种植时，子代所产沉香木的含油量达不到40％，香味极淡，完全达不到金丝油母树的品质。因为土沉香是异花授粉植物，基因组杂合度高，种子实生苗分化大，种子子代不能保证继承金丝油母株的优良特性，只有通过无性繁殖的方法获得的子代才可以保证子代完全继承母株的优良性状。
[0003]组织培养是一种高效的无性繁殖方法，通过组织培养获得的金丝油种苗能完全继承金丝油母株的所有优良性状。土沉香的组织培养研究有一些报道，但采用已有的研究报道的方法均无法获得金丝油的组培苗。如有研究者采用洗衣粉、酒精处理外植体(土沉香愈伤组织培养及植株再生(简报)，热带亚热带植物学报，1998,6(2):172
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176；沉香树组织培养快速繁殖技术研究，林业建设,2006,(4):10
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12；白木香的组织培养研究，农业生物技术学报，2007,(15):222
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225；土沉香启动培养及其生理特性研究，湖北农业科学，2015,54(7):1742
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1745.)，或者采用吐温处理外植体(土沉香的组培快繁技术研究，广东农业科学，2006(8):44
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46)，或者采用次氯酸钠处理外植体(土沉香组织培养再生体系的研究，中国林业科学研究院，2012)，这些方法都会导致金丝油茎段褐变死亡。而在组培苗的生根诱导阶段，采用已有的研究报道的大量元素配比和激素配比，或者无法诱导金丝油组培苗生根，或者生根率极低。有的研究报道中要采用2步法诱导土沉香组培苗生根(土沉香的组培快繁技术研究，广东农业科学，2006(8):44
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46；白木香的组织培养研究，农业生物技术学报，2007,(15):222
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225.)，降低了组培苗的生产效率，提高了成本，不适合大规模快速繁殖组培苗。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的上述不足，本专利技术的目的是提供一种有重要经济及药用价值的土沉香易结香优株金丝油的可规模化无性快繁方法。
[0005]本专利技术的一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法，包括以下步骤：
[0006]S1.采集金丝油当年新萌且枝条外皮为嫩绿色、含顶梢的5～10cm长的枝条，剪去叶片，仅保留顶芽下第2和第3个腋芽，分别将两个腋芽连同茎段剪下且每个腋芽基部的两端均保留0.8～1.2cm长的茎段，然后对带腋芽的茎段外植体进行消毒处理；
[0007]S2.将消毒后的外植体接种到丛芽诱导培养基上培养诱导丛芽；所述的丛芽诱导
培养基为MS培养基+6
‑
BA0.6mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8；
[0008]S3.将丛芽接种至增殖培养基进行增殖培养；所述的增殖培养基为改良MS培养基+6
‑
BA 0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8；其中，改良MS培养基是将MS培养基中硝酸钾的含量调整为2470mg/L，其余组分的含量保持不变的培养基；
[0009]S4.将高度≥2.5cm、有顶芽且有2片以上叶片的单芽切下接入生根诱导培养基培养诱导生根，获得生根苗；所述的生根诱导培养基为1/4MS培养基+ABT 1mg/L+IBA 1mg/L+活性炭0.05g/L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，pH为5.8；
[0010]S5.将生根苗在光照强度为3000～4500Lx、温度20℃～30℃条件下炼苗10～20天，然后移植至栽培基质中培养，进行苗期管理。
[0011]优选，所述的步骤S1的消毒处理是用无菌水浸泡2次，每次5min，然后用质量分数0.1％的HgCl2水溶液浸泡5min，然后用无菌水洗5次，每次5min。
[0012]优选，所述的栽培基质为将黄心土、泥炭土、蛭石按体积比1:2:2混合制备得到的。
[0013]优选，所述的苗期管理为：
[0014]移植15天内，苗床加盖薄膜，在薄膜上加盖1层90％遮阳网；晴天每天喷雾5～6次，阴天每天喷雾3～4次，雨天每天喷雾1～2次，温度高时，在遮阳网上淋降温水，控制苗床温度不超过33℃；
[0015]移植15～30天内，苗床上晚上盖薄膜，并在苗床的两头保持通风，白天不盖薄膜但盖80％遮阳网；晴天每天淋水2～3次，阴天每天淋水1～2次，雨天则全天仅盖薄膜且两头保持通风，不要淋水；
[0016]移植30天后至苗木高50cm，苗床上不再盖薄膜；但在非雨天，白天盖50％遮阳网，晴天每天淋水1～2次，阴天每天淋水0～1次，雨天不要淋水。
[0017]优选，所述的步骤S2和S3中的培养，其培养条件为：温度25
±
2℃，光照10～12h
·
d
‑1，光照强度2500Lx～3000Lx；每30天转接一次。
[0018]优选，所述的步骤S4中的培养，其培养条件为：温度25
±
2℃，光照10～12h
·
d
‑1，光照强度2500Lx～3000Lx。
[0019]本专利技术具有如下有益效果：
[0020]本专利技术提供了一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法。本专利技术方法为采集土沉香易结香优株金丝油的当年生枝条，以其带腋芽的茎段为外植体，采用特定方法消毒除菌，大大降低了褐死率及污染率，使得能够顺利进行后续的诱导和培养；研制特定的培养基进行丛芽诱导、继代增殖及生根诱导，丛芽诱导率为15.4％且无玻璃化，增殖倍数达2.7，生根率达到72.5％；选择合适的炼苗条件和移植方法，成活率可达75％以上；由此得到大量土沉香易结香优株金丝油的无性系种苗，该类种苗能完全继承优株金丝油的优良结香特性，充分满足市场对金丝油无性系苗木的需求。利用本专利技术方法将产生极高的经济效益，促进土沉香种植业的产业升级，具有广阔的市场前景。
附图说明
[0021]图1是褐变外植体。
[0022]图2是无褐变外植体。
[0023]图3是不同消毒方式对金丝油外植体的影响。
[0024]图4是不同消毒时长对金丝油外植体影响。
[0025]图5是金丝油正常丛芽。
[0026]图6是金丝油玻璃化丛芽。
[0027]图7是金丝油玻璃化芽。
[0028]图8是金丝油玻璃化至死芽。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种土沉香易结香优株金丝油的无性快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.采集金丝油当年新萌且枝条外皮为嫩绿色、含顶梢的5～10cm长的枝条，剪去叶片，仅保留顶芽下第2和第3个腋芽，分别将两个腋芽连同茎段剪下且每个腋芽基部的两端均保留0.8～1.2cm长的茎段，然后对带腋芽的茎段外植体进行消毒处理；S2.将消毒后的外植体接种到丛芽诱导培养基上培养诱导丛芽；所述的丛芽诱导培养基为MS培养基+6
‑
BA0.6mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8；S3.将丛芽接种至增殖培养基进行增殖培养；所述的增殖培养基为改良MS培养基+6
‑
BA 0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8；其中，改良MS培养基是将MS培养基中硝酸钾的含量调整为2470mg/L，其余组分的含量保持不变的培养基；S4.将高度≥2.5cm、有顶芽且有2片以上叶片的单芽切下接入生根诱导培养基培养诱导生根，获得生根苗；所述的生根诱导培养基为1/4MS培养基+ABT 1mg/L+IBA 1mg/L+活性炭0.05g/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：李湘阳，曾炳山，胡冰，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：