古巴烯合成相关蛋白制造技术

本发明专利技术公开了古巴烯合成相关蛋白

【技术实现步骤摘要】
古巴烯合成相关蛋白SgTPS3的应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，更具体的说是涉及古巴烯合成相关蛋白
SgTPS3
的应用
。

技术介绍

[0002]倍半萜
(sesquiterpenes)
是指分子结构中由三个异戊二烯单元组成的天然萜类化合物，主要存在于植物的挥发油中，多具有较强的香气和生物活性，是医药
、
食品
、
精油
、
化妆品等行业的重要原料
。
古巴烯是一种三环倍半萜类化合物，因首次从产树脂的热带苦配巴油树
(Copaifera langsdorffii)
中分离出来而得名
。
古巴烯具有重要的经济价值，其可强烈吸引农业害虫地中海实蝇
。
同时，古巴烯也是很多高档精油的主要成分，具有杀菌
、
消炎
、
抗氧化
、
镇痛等多种功能
。
然而，古巴烯在植物中的含量极少，其在香脂树属中的含量可达9％左右，但该树种主要分布于热带美洲和非洲地区
。
[0003]油楠
(Sindora glabra)
是豆科油楠属乔木，与香脂树同属于苏木科，其树干含有大量无色透明的芳香油，天然分布于我国海南
、
广东
、
福建
、
云南等地
。
油楠树脂油中古巴烯含量可达
25
％以上，在材用<br/>、
药用
、
食品和精油等方面具有较大应用潜力
。
目前古巴烯主要从植物中提取而得，尚未有特异性古巴烯合成酶等相关报道
。
[0004]因此，提供古巴烯合成相关蛋白
SgTPS3
的应用是本领域技术人员亟需解决的问题
。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了古巴烯合成相关蛋白
SgTPS3
的应用，从油楠基因组中分离鉴定得到一种倍半萜类合成酶，该酶可催化产生特异的
α
‑
古巴烯和
β
‑
古巴烯化合物，可用于体外生产合成古巴烯
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]油楠倍半萜合成酶
SgTPS3
在制备环苜蓿烯
、
α
‑
古巴烯和
β
‑
古巴烯中的应用，所述油楠倍半萜合成酶
SgTPS3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0008]具体地，以法呢基焦磷酸为底物，通过所述油楠倍半萜合成酶
SgTPS3
催化产生环苜蓿烯
、
α
‑
古巴烯和
β
‑
古巴烯
。
[0009]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了古巴烯合成相关蛋白
SgTPS3
的应用，
SgTPS3
可在体外特异性催化产生
α
‑
古巴烯和
β
‑
古巴烯，对于生产制备古巴烯产品具有重要应用价值
。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据
提供的附图获得其他的附图
。
[0011]图1附图为本专利技术目的基因
PCR
片段；
[0012]其中，
M
：
DNA marker DL2000
；1：目的基因
SgTPS3
片段；
[0013]图2附图为本专利技术目的基因菌落
PCR
电泳图；
[0014]其中，
M
：
DNA marker
；1‑8：阳性菌；
[0015]图3附图为本专利技术
pET30a(+)
载体图谱信息；
[0016]图4附图为本专利技术重组质粒酶切图；
[0017]其中，
M
：
DNA marker(SM0331)
；1：酶切结果；
[0018]图5附图为本专利技术融合蛋白表达
SDS
‑
PAGE
分析图；
[0019]其中，
M
：
Protein Marker(Cat.No.:C600525)
；1：诱导前总蛋白；2：
20℃
上清；3：
20℃
沉淀；4：
37℃
上清；5：
37℃
沉淀；
[0020]图6附图为本专利技术融合蛋白镍琼脂糖亲和层析纯化
SDS
‑
PAGE
分析图；
[0021]其中，
M
：
Protein marker(Cat.No.C600525)
；1：上样；2：流出；3：
20mM Imidazole
洗脱组分；4：
50mM Imidazole
洗脱组分；5：
500mM Imidazole
洗脱组分；箭头所指为目的蛋白；
[0022]图7附图为本专利技术最终纯化蛋白
SDS
‑
PAGE
分析图；
[0023]其中，
M
：
Protein marker(Cat.No.C600525)
；1融合目的蛋白；
[0024]图8附图为本专利技术最终纯化蛋白
WesternBlot
分析图；
[0025]其中，
M
：
Protein marker(Cat.No.C610013)
；1：融合目的蛋白；
[0026]图9附图为本专利技术蛋白浓度测定标准曲线；
[0027]图
10
附图为本专利技术
GC
‑
MS
检测图谱
。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例
。
基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围
。
[0029]实施例1油楠倍半萜合成酶基因
SgTPS3
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
油楠倍半萜合成酶
SgTPS3
在制备环苜蓿烯
、
α
‑
古巴烯和
β
‑
古巴烯中的应用，所述油楠倍半萜合成酶
SgTPS3
的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2

【专利技术属性】
技术研发人员：余纽，杨锦昌，李荣生，吴伟煌，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：