苜蓿根瘤菌及其应用制造技术

苜蓿根瘤菌及其应用，属于农业微生物应用领域。所述苜蓿根瘤菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11589，保藏日期为2015年11月25日，保藏地址为北京市朝阳区北辰路1号院3号。本发明专利技术的苜蓿根瘤菌菌剂和保护剂的配合使用将会显著提高国产紫花苜蓿的结瘤率和产量，特别是显著提高国产苜蓿幼苗期的结瘤率。幼苗期结瘤率的提高说明本发明专利技术可以提高接种菌剂的占瘤率和竞争性。同时，随着结瘤率的提高，固氮效率也随之提高，株高及产量也得到了显著增高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业微生物应用领域，涉及一株苜蓿根瘤菌及利用其提高国产紫花苜蓿结瘤率和产量的方法。
技术介绍
紫花苜蓿(Medicagosativa)是一种多年生豆科草本植物，因其抗逆性强、分布广、栽培面积大、产量高、品质好、利用方式多、适口性好、经济价值高，具有其他豆科牧草不能比拟的许多优点。同时它也是世界上栽培最早、分布最广的一种豆科牧草，堪称“牧草之王”。全世界苜蓿属植物有65个品种，在我国主要有：野生种、地方品种、育成品种、引进品种和一年生种。苜蓿在世界上主要分布在欧洲、亚洲和非洲，在我国广泛分布在华北、西北、黄淮海、东北南部地区。苜蓿含有多种化学成分，如：皂苷类、挥发油、黄酮类等。在我们的日常生产中，之所以有国产苜蓿和进口苜蓿的概念，主要是因为进口苜蓿与国产苜蓿的诸多理化指标上存在着较大的差异。然而，正是这种理化指标差异，最终造成泌乳奶牛干物质采食量的不同，从而影响了牛奶产量。国产苜蓿相对进口苜蓿而言单产较低、质量不高、商品率不足。但是进口苜蓿却有着返青率低，抗逆性差的特点。因此发展苜蓿产业的出发点应从提高进口苜蓿返青率和提高国产苜蓿产量上入手。紫花苜蓿叶蛋白有很高的应用价值，而氮是苜蓿正常生长所必需的大量营养元素之一，也是构成蛋白质的重要组成部分，所以如何满足紫花苜蓿氮的需求成为其工业化大规模生产的一个关键问题。根瘤菌促进紫花苜蓿固氮对苜蓿的生长、发育乃至产量、品质都有重要的影响。紫花苜蓿与根瘤菌可以形成共生固氮体系进行生物固氮，减少施用氮肥对环境造成的污染，因此在紫花苜蓿种植中一般不提倡大量使用化学氮肥。但紫花苜蓿自然结瘤不好，因此接种根瘤菌是提高国产紫花苜蓿结瘤率和产量的一个重要措施。
技术实现思路
针对目前国产苜蓿虽然有着更适宜国内种植的优势，但是面临着单产低、结瘤率低的情况，本专利技术提供了一株苜蓿根瘤菌及其应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一株苜蓿根瘤菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11589，保藏日期为2015年11月25日，保藏地址为北京市朝阳区北辰路1号院3号。该菌从黑龙江省大庆市盐碱土地上分离筛选获得。经鉴定，是一株苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)，命名为SD101。在需氧环境下培养，培养基表层生长，菌落性状大致呈圆形，白色，边缘不规则，表面粘液较多。革兰氏阴性细菌，杆菌镜检照片如图1。本专利技术的苜蓿根瘤菌菌剂和保护剂的配合使用将会显著提高国产紫花苜蓿的结瘤率和产量，特别是显著提高国产苜蓿幼苗期的结瘤率。幼苗期结瘤率的提高说明本专利技术可以提高接种菌剂的占瘤率和竞争性。同时，随着结瘤率的提高，固氮效率也随之提高，株高及产量也得到了显著增高。保藏信息：分类命名：苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：CGMCCNo.11589；保藏日期：2015年11月25日；保藏地址：北京市朝阳区北辰路1号院3号。附图说明图1为苜蓿根瘤菌SD101镜检照片；图2为同源性比对结果；图3为敖汉在蛭石上生长的结瘤数；图4为敖汉在伽马射线土中的结瘤数；图5为敖汉在野生土样中的结瘤数；图6为龙牧801在蛭石上生长的结瘤数；图7为龙牧801在伽马射线土中的结瘤数；图8为龙牧801在野生土样中的结瘤数；图9为敖汉在蛭石中生长的株高；图10为敖汉在伽马射线土中生长的株高；图11为敖汉在野生土样中生长的株高；图12为龙牧801在蛭石中生长的株高；图13为龙牧801在伽马射线土中生长的株高；图14为龙牧801在野生土样中生长的株高；图15为田间试验设计图；图16为敖汉和龙牧801在田间试验中的总结瘤数情况；图17为敖汉和龙牧801在田间试验中的平均株高情况；图18为敖汉和龙牧801在田间试验中的平均干草重情况。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本专利技术的保护范围中。本专利技术提供了一株苜蓿根瘤菌及其应用，具体包括以下两部分内容：一、苜蓿根瘤菌的筛选鉴定：1、本专利技术所述菌株是一株从黑龙江省大庆市盐碱土地上分离筛选出来的苜蓿根瘤菌。该菌经鉴定，是一株苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)，命名为SD101。在需氧环境下培养，培养基表层生长，菌落性状大致呈圆形，白色，边缘不规则，表面粘液较多。革兰氏阴性细菌，杆菌镜检照片如图1。使用YMA或TY固体或液体培养基培养斜面和菌剂，配制方式：YMA培养基：甘露醇10g/L；酵母粉0.4g/L；NaCl0.1g/L；K2HPO40.5g/L；MgSO4·7H2O0.2g/L；琼脂粉18-20g，加水至1000mL，121℃灭菌即可。pH6.8-7；28℃。TY培养基：蛋白胨5g/L；酵母粉3g/L；CaCl20.87g；琼脂粉18-20g，加水至1000mL，121℃灭菌即可。pH6.8-7；28℃。苜蓿根瘤菌的筛选方法：取新鲜的根瘤洗净，经常规表面灭菌，将根瘤夹破，于加结晶紫的中性YMA固体培养基上划线分离，挑取单菌落反复划线分离，肉眼观察比较纯的单菌落，挑取少量菌体革兰氏染色，置于Olympus显微镜下镜检，再进行下一步生物学鉴定。2、苜蓿根瘤菌菌株SD101的生物学鉴定：通过采用16SrDNA测序方法进行苜蓿根瘤菌菌株SD101的生物学鉴定。由上海生工生物工程技术服务公司完成。经鉴定SD101为苜蓿中华根瘤菌。DNA序列如SEQIDNO.1所示，同源性比对结果如图2所示。二、苜蓿根瘤菌的应用1、SD101与保护剂在盆栽试验中的应用效果(1)材料和研究方法：表1三种不同基质表2三种不同接种方式表3实施的九个处理本专利技术选用两个常见国产苜蓿品种：敖汉和龙牧801，保护剂由阿根廷利索公司提供。氮肥施用方式：基肥。200g尿素1m3土或惰性基质。苜蓿根瘤菌SD101施用方式：可摇瓶培养苜蓿根瘤菌SD101至OD600值达到0.8到1.0，以8mL/kg种子的施用量与4mL/kg种子的施用量的保护剂预先混合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株苜蓿根瘤菌，分类命名为苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti，保藏编号为CGMCC No.11589。

【技术特征摘要】
1.一株苜蓿根瘤菌，分类命名为苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium
meliloti，保藏编号为CGMCCN...

【专利技术属性】
技术研发人员：石杰，高宇，孙宇峰，刘宇峰，张正海，刘淑霞，樊川，殷博，杨旭升，姬妍茹，杨庆丽，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院大庆分院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23