本发明专利技术公开了一株苜蓿根际促生菌MJM-11及其应用。本发明专利技术提供的路氏肠杆菌（Enterobacter?ludwigii)菌株MJM-11，其保藏编号为CGMCC?No.6295。上述的路氏肠杆菌（Enterobacter?ludwigii)菌株MJM-11在如下1）-4）至少一种中的应用：1）制备ACC脱氨酶；2）制备吲哚乙酸；3）制备嗜铁素；4）在盐碱胁迫下促进植物生长。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术分离得到一株苜蓿根际促生菌MJM-11，其可以合成ACC脱氨酶、IAA嗜铁素，而且可在盐碱胁迫环境中有效地促进植物营养吸收、调节植物生长以及提高植物在逆境条件下抗逆能力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一株苜蓿根际促生菌MJM-Il及其应用。
技术介绍
苜蓿是多年生豆科植物，富含各种必要的氨基酸、多种维生素和矿物质，且作为畜牧业生产的当家草种，在世界各地得到广泛种植，其栽培历史已经有2000多年，突出优点表现在饲用上为产草量高，利用年限长，再生性强，耐刈割，草质好、适口性强，营养丰富，肥田增产，保持水土等作用，是一种多功能牧草，素有“牧草之王”之美誉。苜蓿是世界上分布最广的比较耐盐的豆科牧草，但在中重度盐碱地实际栽培中其耐盐性尚需提高。我国约有盐碱地约有O. 12亿公顷，主要分布在东北、华北、西北内陆地区以及长江以北沿海地带。盐碱地的改良是世界性的难题，同时盐碱地也成了制约我国生态 环境建设和农业可持续发展的最大障碍因子。因此了解植物盐害的机理及其应对盐胁迫的策略，对于进一步加快生态环境建设和农业可持续发展具有重要意义。植物根际促生细菌(plantgrowth-promoting rhizobacteria,简称 PGPR)是指自由生活在土壤或附生于植物根际的一类可促进植物生长、防治病害、增加作物产量的有益菌类。接种植物根际促生菌，可使土壤中无效营养有效化，预防和控制农作物病害，减少农药和化肥的使用，是解决土壤、水源和食品污染的根本途经，被普遍认为是一种环境友好、经济有效的提高作物产量的方法。其中含ACC (I-氨基环丙烷-I-羧酸1-aminocyclopropane-1-carboxylate,简称ACC)脱氨酶的PGPR受到了各国学者的广泛关注。ACC脱氨酶是一种有效降低逆境乙烯含量的外源促生物质，该酶在逆境条件下能减缓植物体内乙烯积累，促进植物生长，尤其是植物根部的生长，显著提高农作物的抗逆性和增加产量。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-II。本专利技术提供的路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11,其保藏编号为CGMCC No. 6295。上述的路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11在如下I) _4)至少一种中的应用也是本专利技术保护的范围I)制备ACC脱氨酶；2)制备吲哚乙酸；3)制备嗜铁素；4)促进植物生长；所述促进植物生长具体在盐碱胁迫条件下进行。本专利技术的另一个目的是提供一种制备产物的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤发酵上述的路氏肠杆菌(EnterobacterIudwigii)菌株MJM-II，即得到产物；所述产物为ACC脱氨酶、吲哚乙酸或嗜铁素。上述方法中，若所述产物为ACC脱氨酶时，所述发酵采用的培养基为TSB培养基和ADF培养基；其中，TSB培养基胰蛋白胨17g、大豆胨3g、NaC15g、葡萄糖2. 5g、K2HP042. 5g溶解到1000ml蒸馏水中，调整pH值至pH=7. 5。ADF 培养基=KH2PO4 4. 0g、Na2HP046 . 0g、MgSO4 · 7H20 0. 2g、FeSO4 · 7H20 0. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、柠檬酸2. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸馏水中溶解后，调整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml，高温灭菌后加入I-氨基环丙烷-I-羧酸(ACC)，使其终浓度为3. 0mmol/L· (可先配制母液 0. 5mol/L);其中，微量元素(IOOmL) =H3BO3IOmg, MnSO4Il. 2mg,ZnS04124. 6mg、CuS0478. 2mg、Mo0310mg。若所述产物为吲哚乙酸时，所述发酵采用的培养基为DF培养基或含有色氨酸的DF 培养基；其中 DF 培养基KH2P04 4. 0g、Na2HP046. 0g、MgS04 · 7H20 0. 2g,FeSO4 · 7H200. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、柠檬酸2. 0g、(NH4) 2S042. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸馏水中溶解后，调整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml。微量元素配制同上。若所述产物为嗜铁素时，所述发酵采用的培养基为MKB培养基，其中MKB培养基(IL):酸解酪蛋白 5g，甘油 15mL，Κ2ΗΡ042· 5g，MgSO4 · 7H20 2. 5g，pH 7. 2。121°C，20min 灭菌。上述制备ACC脱氨酶的方法包括如下步骤I)在所述TSB培养基中培养上述的路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-II，收集菌体，得到培养菌I ;2)将所述培养菌I接种到所述ADF培养基中诱导培养，收集诱导培养产物，即得到ACC脱氨酶。在上述制备ACC脱氨酶的方法中，步骤I)中，所述培养条件为28°C，180rpm培养12h ；步骤2)中，所述诱导培养为28°C，180rpm培养48h。上述制备ACC脱氨酶的方法还包括如下步骤先将所述菌体、0. lmol/L Tris-HCl(pH=8. 5)、甲苯和0. 5mol/L ACC混匀，培养，得到甲苯培养物；再将所述甲苯培养物加入0. 56mol/L HCl混匀，离心收集上清液，得到ACC脱氨酶。在上述制备ACC脱氨酶的方法具体包括如下步骤挑取上述的路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-11于50ml TSB培养基中28°C，180rpm培养12h后，4°C离心收集菌体，用50ml DF培养基洗涤三次，将菌体转接于ADF培养基中28°C，180rpm诱导培养48h，收集诱导培养产物；将诱导培养产物离心收集菌体，再将菌体悬浮于Iml 0. lmol/L Tris-HCl(pH=7. 6)中转移至1.5ml的离心管中，1600g离心去上清，收集菌体；再重悬菌体于600 μ 10. lmol/L Tris_HCl(pH=8. 5)中，加入30 μ I甲苯漩涡震荡30s，得到甲苯细胞，向甲苯细胞中加入20μ1 0. 5mol/L ACC短暂震荡后，30°C培养15min，之后加入Iml 0. 56mol/LHCl混合震荡室温(25°C )离心5min，收集上清液，得到ACC脱氨酶。上述制备吲哚乙酸的方法包括如下步骤在所述DF培养基或所述含有色氨酸的DF培养基中培养上述的路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)菌株MJM-II,收集发酵产物，即得到吲哚乙酸。上述制备吲哚乙酸的方法中，所述含有色氨酸的DF培养基中色氨酸的终浓度为0-500 μ g/mL,且不为 O。上述制备吲哚乙酸的方法中的培养条件为28°C，ISOrpm培养2天；上述制备吲哚乙酸的方法还包括如下步骤将所述发酵产物离心，收集上清液，得到吲哚乙酸。上述制备吲哚乙酸的方法具体包括如下步骤上述的路氏肠杆菌(Enterobacter Iudwigii)单菌落MJM-11于DF液体培养基中28°C，180rpm培养2d，转接到添加不同浓度(0、50、100、200、500 μ g · ml/1)色氨酸的DF培养基中，280C，180rpm培养2d，收集发酵产物，然后将发酵产物8000rpm离心，收集上清液，得到IAA。上述制备嗜铁素的方法包括如下步骤在MKB培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
路氏肠杆菌（Enterobacter？ludwigii)菌株MJM？11，其保藏编号为CGMCCNo.6295。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭长虹，马嘉敏，康慧颖，蔡洪生，谢宝明，
申请(专利权)人：哈尔滨师范大学，
类型：发明
国别省市：
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