一株苜蓿根际促生菌MJM-5及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株苜蓿根际促生菌MJM-5及其应用。本发明专利技术提供的荧光假单胞菌（Pseudomonas?fluorescens）菌株MJM-5，其保藏编号为CGMCC?No.6293。上述的荧光假单胞菌（Pseudomonas?fluorescens）菌株MJM-5在如下1）-4）至少一种中的应用：1）制备ACC脱氨酶；2）制备吲哚乙酸；3）制备嗜铁素；4）在盐碱胁迫下促进植物生长。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术分离得到一株苜蓿根际促生菌MJM-5，其可以合成ACC脱氨酶、IAA嗜铁素，而且可在盐碱胁迫环境中有效地促进植物营养吸收、调节植物生长以及提高植物在逆境条件下抗逆能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物
，尤其涉及ー株苜蓿根际促生菌MJM-5及其应用。
技术介绍
盐碱土是陆地上分布广泛的ー种土壤类型，是陆地表面生态脆弱区域。目前全世界盐碱地面积约10亿公顷以上，且随着生态环境的日益恶化，土壌次生盐碱化也日益加剧，影响了农牧业的发展，加重了沙漠化、荒漠化程度，已成为世界性环境问题。中国盐碱化土地约有0. 12亿公顷，占世界盐碱地面积的I. 2%左右，占中国现有耕地面积的15%左右，这些地区植被減少，已经成为限制中国农业经济发展的重要因素。盐碱化土地资源的及时恢复和合理利用开发对推动经济和生态环境协调发展具有重大意义。作物耐盐碱性的提高、盐碱土的生物治理和综合开发是未来农业的重大课题。·盐碱胁迫从多方面对植物整个生命周期都会产生影响。盐碱胁迫能抑制种子萌发、幼苗生长，影响根、茎、叶、花、果实等器官的生长发育，抑制植物的光合作用过程，影响根系对矿质离子的吸收、转运、分布和利用，干扰植物碳、氮、氧的利用及次生代谢的形成，同时严重影响植物的呼吸作用，给农牧业生产造成了严重的损失。I-氨基环丙烧-I-羧酸(l-aminocyclopropane-l-carboxylate, ACC)是植物体内こ烯的合成前体，含ACC脱氨酶的植物根际促生细菌(plant growth-promotingrhizobacteria,简称PGPR)对植物的促生作用基于细菌能产生ACC脱氨酶，降低了逆境条件下植物体内こ烯积累来減少植物胁迫，促进植物根部生长和繁殖，从而提高植物抗逆性。同吋，PGPR合成的植物生长素IAA，能刺激植物细胞生长和増殖，还能诱导ACC合成酶的活性。通过接种PGPR有助于减轻盐分对植物产生的不良反应，被认为是一种环境友好、经济有效提高作物产量、改良盐溃化土壌的方法。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株MJM-5。本专利技术提供的突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株MJM-5,其保藏编号为 CGMCC No. 6293。上述的突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株MJM-5在如下1)_4)至少一种中的应用也是本专利技术保护的范围I)制备ACC脱氨酶；2)制备吲哚こ酸；3)制备嗜铁素；4)促进植物生长；所述促进植物生长具体在盐碱胁迫条件下进行。本专利技术的另ー个目的是提供ー种制备产物的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤发酵上述的突光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)菌株MJM-5，即得到产物；所述产物为ACC脱氨酶、吲哚こ酸或嗜铁素。上述方法中，若所述产物为ACC脱氨酶时，所述发酵采用的培养基为TSB培养基和ADF培养基；其中，TSB培养基胰蛋白胨17g、大豆胨3g、NaC15g、葡萄糖2. 5g、K2HP042. 5g溶解到1000ml蒸馏水中，调整pH值至pH=7. 5。ADF 培养基KH2P044. 0g、Na2HP046 . 0g、MgSO4 7H200. 2g、FeSO4 7H200. lg、葡萄糖2. 0g、葡萄糖酸2. 0g、柠檬酸2. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸馏水中溶解后，调整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml，高温灭菌后加入I-氨基环丙烷_1_羧酸(ACC)，使其终浓度为3. 0mmol/L (可先配制母液 0. 5mol/L);其中，微量元素(IOOmL) =H3BO3IOmg, MnSO4Il. 2mg,ZnS04124. 6mg、CuS0478. 2mg、MoO3IOmg0若所述产物为吲哚こ酸(IAA)时，所述发酵采用的培养基为DF培养基或含有色氨酸的DF培养基；其中DF培养基KH2P044. 0g、Na2HP046. 0g、MgS04 7H200. 2g,FeSO4 7H200. lg、葡萄糖 2. 0g、葡萄糖酸 2. 0g、柠檬酸 2. 0g、(NH4)2S042. 0g、微量元素0. lmL、加入蒸馏水中溶解后，调整pH值至pH=7. 5，定容至1000ml。微量元素配制同上。若所述产物为嗜铁素时，所述发酵采用的培养基为MKB培养基，其中MKB培养基(IL):酸解酪蛋白 5g，甘油 15mL, K2HP042. 5g, MgSO4 7H202. 5g, pH7. 20 121°C，20min 灭菌。上述制备ACC脱氨酶的方法包括如下步骤I)在所述TSB培养基中培养上述的突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株MJM-5，收集菌体，得到培养菌I ;2)将所述培养菌I接种到所述ADF培养基中诱导培养，收集菌体，即得到ACC脱氨酶。在上述制备ACC脱氨酶的方法中，步骤I)中，所述培养条件为28°C，180rpm培养12h ；步骤2)中，所述诱导培养为28°C，180rpm培养48h。上述制备ACC脱氨酶的方法中还包括如下步骤先将所述菌体、0. lmol/LTris-HCl (pH=8. 5)、甲苯和0. 5mol/L ACC混匀，培养，得到甲苯培养物；再将所述甲苯培养物加入0. 56mol/L HCl混匀，离心收集上清液，得到ACC脱氨酶。在上述制备ACC脱氨酶的方法具体包括如下步骤挑取上述的突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株MJM-5于50ml TSB培养基中28°C，180rpm培养12h后，4°C离心收集菌体，用50ml DF培养基洗涤三次，将菌体转接于ADF培养基中28°C，180rpm诱导培养48h，收集诱导培养产物；将诱导培养产物离心收集菌体，再将菌体悬浮于ImlO. lmol/L Tris-HCl (pH=7. 6)中转移至I. 5ml的离心管中，1600g离心去上清，收集菌体;再重悬菌体于600 ii 10. lmol/LTris-HCl (pH=8. 5)中，加入30 u I甲苯漩涡震荡30s，得到甲苯细胞，向甲苯细胞中加入20iU0. 5mol/L ACC短暂震荡后，30°C培养15min，之后加入ImlO. 56mol/LHCl混合震荡室温(25°C )离心5min，收集上清液，得到ACC脱氨酶。上述制备吲哚こ酸的方法包括如下步骤在所述DF培养基或所述含有色氨酸的DF培养基中培养上述的突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌株MJM-5,收集发酵产物，即得到吲哚こ酸。上述制备吲哚こ酸的方法中，所述含有色氨酸的DF培养基中色氨酸的终浓度为0-500 u g/mL,且不为 0。上述制备吲哚こ酸的方法中的培养条件为28°C，ISOrpm培养2天；上述制备吲哚こ酸的方法还包括如下步骤将所述发酵产物离心，收集上清液，得到吲哚こ酸。上述制备吲哚こ酸的方法具体包括如下步骤上述的突光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)单菌落MJM-5于DF液体培养基培养基中28で，180印111培养2(1，转接到添加不同浓度(0、50、100、200、5001^*111じ1)色氨酸的DF培养基中，280C，180rpm培养2d，收集发酵产物，然后将发酵产物8000rpm离心lOmin，收本文档来自技高网...

【技术保护点】
荧光假单胞菌（Pseudomonas？fluorescens）菌株MJM？5，其保藏编号为CGMCCNo.6293。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭长虹，马嘉敏，王晓丹，蔡洪生，谢宝明，
申请(专利权)人：哈尔滨师范大学，
类型：发明
国别省市：