一株枯草芽孢杆菌及其应用。所述菌株（Bacillussubtilis）KW119，于2012年2月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.5789。?枯草芽孢杆菌KW119在鸡肠道内生境条件下产蛋白酶能力较高，达到538.5U/mL；通过产生蛋白酶，能促进饲料中蛋白质的消化，提高饲料蛋白质的消化率，饲料蛋白质消化率提高17%；提高饲料的利用率，减少粪便中的氮含量，降低了鸡舍中氨气质量浓度，应用于鸡饲料中，能改善鸡舍环境，减少环境污染，有利于鸡只的健康生长。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物领域，特别涉及一株枯草芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
随着养鸡生产的规模化集约化，鸡舍内饲养密度增大，空间相对狭窄，空气流通能力差，产生的有害气体中，氨气(NH3)是对鸡危害最大、引起鸡舍环境恶臭的主要有害气体之一，而氨气是饲料中未被消化的蛋白质中的氮元素发酵产生的。在我国，多数地区以农户养鸡为主，普遍存在规模小，资金投入少，采用人工操作，工作量大的现状，不能做到每天及时清粪，因此很容易造成舍内鸡粪堆积和发酵，产生恶臭污染环境；如果生产管理不当，将会严重影响舍内空气质量、鸡只生产性能及工作人员的健康。·为了改善鸡舍空气质量，可以通过减少鸡粪中蛋白质的含量，降低鸡舍内氨气含量。然而，鸡的消化道较短，对于鸡饲料中的蛋白质消化率较低。芽孢杆菌是生产蛋白酶的主要菌种，在鸡饲料中使用芽孢杆菌具有以下优点耐高温、耐酸碱、耐挤压，能够耐受饲料加工的影响；在饲料保存过程中，以孢子形式存在，不消耗饲料养分；进入消化道后，在肠道中复活率接近100% ;能够产生各种消化酶类、氨基酸和维生素等益生物质；在肠道可以消耗大量氧，维持肠道厌氧环境。但现有枯草芽孢杆菌存在以下缺陷在鸡消化道内产蛋白酶能力不高。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一株枯草芽孢杆菌及其应用，在鸡消化道内产蛋白酶能力高、可显著提高鸡饲料蛋白质消化率，可应用于鸡饲料中。本专利技术的技术解决方案 一株枯草芽孢杆菌(ifeci77i/5· 5· Α Υ7 5·)ΚΙ119,于2012年2月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 5789。所述的枯草芽孢杆菌KWl 19在鸡饲料中的应用。所述的枯草芽孢杆菌KW119在鸡饲料中的应用，以菌粉的形式添加到饲料中，菌粉中活菌数为2. OX 108cfu/g，在肉仔鸡饲料或产蛋鸡饲料中所述菌粉的添加量为O. 2%。本专利技术通过平板初筛、模拟鸡肠道生境复筛，最终得到一株能在鸡肠道生境条件下高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌KW119，其有益效果是 枯草芽孢杆菌KW119在鸡肠道生境条件下产蛋白酶能力较高，达到538. 5U/mL ;通过产生蛋白酶，能促进饲料中蛋白质的消化，提高饲料蛋白质的消化率，在鸡饲料里添加O. 2%活菌数为2. OX 108cfu/g的枯草芽孢杆菌KW119菌粉后，饲料蛋白质消化率提高17% ;提高饲料的利用率，减少粪便中的氮含量，降低了鸡舍中氨气质量浓度，改善了鸡舍环境，减少环境污染，有利于鸡只的健康生长。枯草芽孢杆菌(ifeci77i/5· 5· Α Υ7Υ5·)ΚΙ119,于2012年2月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 5789。具体实施例方式一、枯草芽孢杆菌UaciJJmKWl 19菌株的获得 I、培养基 富集培养基牛肉膏3g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，蒸馏水lOOOmL，调节pH至6. 5 7. O ; 分离培养基豆柏40g, Na2HPO4 lg, KH2PO4 Ig,琼脂15g，蒸馏水IOOOmL,调节pH至6.5 7. O ; 初筛培养基牛肉膏3g，酪素10g，NaCl 5g，琼脂20g，蒸馏水lOOOmL，调节pH至6. 5 7.O ；· 种子培养基葡萄糖IOg,蛋白胨5g，酵母膏5g, KH2PO4 lg, MgSO4 0. 2g, Na2CO3 10g,蒸馏水IOOOmL,调节pH至6. 5 7. O ; 发酵培养基豆柏40g,蒸馏水IOOOmL,调节pH至6. 5 7. O ; 固体斜面培养基葡萄糖10g，蛋白胨5g，酵母膏5g，KH2PO4 lg, MgSO4 0. 2g, Na2CO310g，琼脂20g，蒸馏水lOOOmL，调节pH至6. 5 7. O。2、菌株的分离 取IOg长期存放豆柏的土壤置于装有90mL无菌生理盐水的三角瓶中，漩涡混合仪上震荡2min，静止30min，80°C水浴加热20min，杀死微生物营养细胞，所得液为原液I;取IOmL原液I加入到IOOmL富集培养基中，41°C，160r/min摇床增殖培养24h ;用无菌生理盐水对增殖培养后的菌液进行梯度稀释至10_4，取10_2、10_3、10_4稀释液各0. ImL分别涂布于分离培养基平板上，41°C培养24h，挑选出革兰氏阳性菌接入固体斜面培养基中，置于41°C培养箱中培养24h，放入4°C冰箱中保藏，待筛选。3、产蛋白酶菌株的初筛 大试管(2.0cmX20cm)内装5mL富集培养基，分别接入分离纯化得到的菌株，41°C条件下160r/min旋转摇床发酵培养48h,发酵培养后的菌液经3500r/min离心后，以0. 5cm直径圆形滤纸片沾上清液贴于初筛培养基平板上，于30°C保温24 h，形成蛋白酶水解圈，然后用直尺测蛋白酶水解圈直径，选出水解圈直径和菌落直径的比值(R/r)大于3的菌株。4、摇瓶发酵试验模拟鸡肠道生境复筛高产蛋白酶的菌株 4. I模拟胃消化环境，评价耐酸性 配置人工胃液取质量分数为10%的盐酸16. 4mL加蒸懼水稀释,使pH值分别为2. O、6. 5 (对照组)，每IOOmL溶液中加Ig胃蛋白酶，充分溶解后用0. 22 μ m的微孔滤膜过滤除菌； 将初筛得到的菌株经斜面活化后，接种于种子培养基中，41°C条件下160 r/min振荡培养12h，按体积比为5%的接种量转接至人工胃液中，放入41 °C恒温水浴锅内，120 r/min振荡培养，放入5min后开始计时，3h后取培养菌液0. 1ml，进行平板菌落计数，计算存活率；存活率计算公式A1/A0X100% AlipH为2的处理组的活菌数，AOipH为6. 5的对照组的活菌数； 筛选出存活率大于80%的菌株。4. 2模拟肠道消化环境，评价耐胆盐性 配制人工肠液取KH2PO4 6. 8g，加蒸馏水500mL溶解，用浓度为0. 4%的NaOH溶液调节pH值至6. 8，加水至lOOOmL，每IOOmL溶液中添加O. 3g禽胆盐，以不加禽胆盐的为对照组，充分溶解后用O. 22 μ m的微孔滤膜过滤除菌； 将耐酸性筛选出的菌株经斜面活化后，接种于种子培养基中，41°C条件下160r/min振荡培养12h，按体积比为5%的接种量转接至人工肠液，放入41 °C恒温水浴锅内，120r/min振荡培养；放入5min后开始计时，4h后取培养菌液O. 1ml，进行平板菌落计数，计算存活率；存活率计算公式A1/A0X 100% Al:添加禽胆盐处理组的活菌数，A0:未添加禽胆盐对照组的活菌数； 筛选出存活率大于80%的菌株。4.3产蛋白酶能力复筛 将耐胆盐性筛选得到的菌株经斜面活化后，接种于种子培养基中，41°C条件下160r/·min振荡培养12h，按体积比为5%的接种量转接至发酵培养基中，41 °C继续振荡培养48 h，3500 r/min离心30min，取上清液采用福林-酚法测定蛋白酶活力(ImL酶液在pH为7. 2、40°C温度下，每分钟水解酪蛋白产生I μ g酪氨酸的酶量为一个酶活力单位，以“U/mL”表示)，筛选酶活力大于538. OU/mL的菌株,得到一株芽孢杆菌。5、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株枯草芽孢杆菌（Bacillus？subtilis）KW119，于2012年2月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC？No.？5789。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许云鹤，王铁良，刘秀萍，唐峰，唐雨顺，
申请(专利权)人：辽宁凯为生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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