一株生产抗氧化肽的苏云金芽孢杆菌及其筛选方法技术

一株生产抗氧化肽的苏云金芽孢杆菌，该苏云金芽孢杆菌的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。其筛选方法为，将腐败的鲅鱼肉按1：10(g/v)的比例加入无菌水中，混匀，梯度稀释后，28℃条件下培养24小时，涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上进行初步分离，以单菌落的透明圈直径与菌落直径的比值大小进行进一步的分离纯化；选取透明圈直径与菌落直径比值较大的菌株进行复筛；以牛肉膏蛋白胨培养基、不加蛋白胨液体酪素培养基、不加L-酪氨酸液体酪素培养基、液体酪素培养基为培养基，对透明圈直径与菌落直径比值较大的菌株测定其酶活力大小；筛选出酶活力较强的5株细菌；测序结果的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体设及一株生产抗氧化肤的苏云金芽抱杆菌及其筛 选方法。
技术介绍
自1956年化rman提出了衰老的自由基理论之后，人们认识到人体内的自由基与人 的衰老和许多疾病有关，因此许多抗氧化剂被应用于保健食品及医药等行业。另外，抗氧化 剂能延缓含脂肪食物的腐败变质，也被用于食品保鲜储藏。抗氧化剂的种类很多，其中已经 被广泛使用的多为化学合成类抗氧化剂，由于其有毒、副作用，各国政府严格强制控制其添 加量。目前研究较多的是从植物中提取的天然抗氧化活性物质。近年来，人们发现水解蛋白 质得到的肤也具有良好的抗氧化活性。1991年Prokorny提出，一些肤和蛋白水解产物能降 低自动氧化速率和脂肪的过氧化物含量，之后，高活性的蛋白源抗氧化剂成为新的研究焦 点。 在水产品加工中会产生许多废弃蛋白，作为制备抗氧化肤的优良原料采用生物酶 工程和发酵工程等手段生产抗氧化肤，不仅能提高水产品的附加值，而且可W有效降低环 境污染。已经有研究者利用鱼类、甲壳类、软体动物等多种水产品制备出具有抗氧化活性的 活性肤。 抗氧化肤的制备方法主要包括提取法、化学水解法、化学合成法、酶法水解和发酵 法等。前Ξ种方法由于提取纯化成本高、对活性破坏较大W及副反应产物较多等原因应用 受到了限制;酶法水解反应条件溫和、反应时间短、效率高，是获得食品级生物活性肤的常 用方法，酶法制备抗氧化肤需要多种酶共同作用，生产成本较高。发酵法是利用微生物发酵 生产抗氧化肤，微生物可对肤的基团进行修饰和重组，制得的肤无异味，可广泛用于食品和 医药行业。微生物发酵法与酶法相比，能将微生物产酶和酶水解两步合一，减少生产程序， 降低生产成本，更适合大规模生产。虽然近年来有较多相关研究，但迄今没有一株适合发酵 鱼肉等水产品制备抗氧化肤的细菌。
技术实现思路
为解决上述现有技术存在的问题，本专利技术的目的是提供一株生产抗氧化肤的苏云 金芽抱杆菌及其筛选方法，该菌株的发现，为鱼肉等水产品发酵制备抗氧化肤提供了高效 细菌，将微生物产酶和酶水解两步合一，减少生产程序，降低生产成本，更适合大规模生产。 为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是： -株生产抗氧化肤的苏云金芽抱杆菌，该苏云金芽抱杆菌的核巧酸序列如SEQ ID NO. 1所示。[000引一种生产抗氧化肤的苏云金芽抱杆菌的筛选方法，包括如下步骤：步骤一、将腐败的飯鱼肉按l:10(g/v)的比例加入无菌水中，混匀，梯度稀释后，28 °C条件下培养24小时，涂布在牛肉膏蛋白腺培养基上进行初步分离，用接种环挑取平板上 形态、大小、颜色、透明度不同的菌株平板划线纯化，分离后的单菌落在固体酪素培养基上 进行划线、W单菌落的透明圈直径与菌落直径的比值大小进行进一步的分离纯化;选取透 明圈直径与菌落直径比值较大的菌株进行复筛； 步骤二、W牛肉膏蛋白腺培养基、不加蛋白腺液体酪素培养基、不加 k酪氨酸液体 酪素培养基、液体酪素培养基为培养基，对透明圈直径与菌落直径比值较大的菌株测定其 酶活力大小;综合分析W上各方法测定的各株菌，共筛选出酶活力较强的5株细菌； 步骤Ξ、将5株细菌经初步鉴定都是芽抱杆菌，纯化后的菌株经检测，测序结果的 核巧酸序列如SEQ ID NO. 1所示。 进一步的，所述步骤二中，牛肉膏蛋白腺培养基：牛肉膏0.3%、蛋白腺1 %、NaCl 0.5%、琼脂 2%抑 7.2; 固体酪素培养基：蛋白腺1%、葡萄糖0.1%、酪素〇.5%、NaCl 0.5%、CaCl2 0.01%、L-酪氨酸0.01%、pH7.2、琼脂2.2%，pH7.2; 液体酪素培养基：蛋白腺1 %、葡萄糖0.1 %、酪素0.5%、NaCl 0.5%、 CaCl2〇. 01 %、L-酪氨酸0.01 %、pH7.2。 进一步的，所述步骤二中酶活力的测试方法为:福林酪法测定蛋白酶活力:取不同 培养时间发酵液4ml，4°C，lOOOOr/min离屯、30min，得粗酶液;取适当稀释的粗酶液1ml，30°C 保溫20min，实验组加入1ml 30°C保溫的2%酪蛋白，对照组加入2ml 0.4mol/LS氯乙酸，混 合均匀，在30°C水浴中准确反应lOmin，实验组反应后加入2ml 0.4mol/LS氯乙酸终止反 应;对照组加入1ml 30°C保溫的2%酪蛋白，混匀后，静置lOmin，400化/min离屯、20min。取上 清液1ml，加入5ml 0.4mol/L化C03,并加入1ml酪试剂，摇匀，30°C水浴反应15min，测定 680m处吸光值。 相对于现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的一株生产抗氧化肤的苏云金芽抱杆菌Bacillus thuringiensis及 其筛选方法能高效分解低值及水产加工废弃物并生产抗氧化肤，在大规模利用水产加工废 弃物方面具有很好的应用前景。【附图说明】 图1是Hy4酪素平板培养的菌落形态及透明圈； 图2是Hy-4经齐氏石碳酸复红染色的结果。【具体实施方式】 下面结合具体附图和实施方式对本专利技术进行详细说明。 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所 用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 牛肉膏蛋白腺培养基:牛肉膏0.3%、蛋白腺l%、NaCl 0.5%、琼脂2%pH7.2; 固体酪素培养基：蛋白腺1%、葡萄糖0.1%、酪素0.5%、NaCl 0.5%、CaCl2 0.01%、L-酪氨酸0.01%、pH7.2、琼脂2.2%，pH7.2; 液体酪素培养基：蛋白腺1%、葡萄糖0.1%、酪素0.5%、NaCl 0.5%、CaCl2 0.01 %、L-酪氨酸0.01 %、pH7.2;福林酪法测定蛋白酶活力：取不同培养时间发酵液4ml，4°C，10000r/min当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株生产抗氧化肽的苏云金芽孢杆菌，其特征在于，该苏云金芽孢杆菌的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯俊荣，牟伟丽，王爱敏，康玲玲，艾冰花，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：山东;37