一种检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒及方法。试剂盒包括微孔条、微孔试剂、试纸条和微孔塞，所述的微孔试剂为冻干的胶体金标记的头孢类和三聚氰胺特异性抗体，所述头孢类药物特异性抗体可为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克隆抗体；所述三聚氰胺特异性抗体可分为三聚氰胺单克隆抗体或三聚氰胺多克隆抗体；所述试纸条由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板，依次连接组成，所述反应膜上包括两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物和三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控线包被有抗抗体。用本发明专利技术试剂盒检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的方法，简便、快速、直观、准确、便于携带、适用范围广、成本低、易推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测β -内酰胺类和三聚氰胺的试剂盒及方法。
技术介绍
β_内酰胺类药物是医学和兽医学上的一类重要的抗菌药物，应用十分广泛。但由于过敏反应及细菌产生的耐药性等原因，许多国家都对该类药物在动物上的使用及在动物源性食品中的残留进行了严格控制。美国食品和药品监督管理局(FDA)的调查表明:不注意休药期、用药不合理或是使用违禁药物，是导致动物性食品中抗生素残留的主要原因。长期摄入含抗生素的食品，可造成药物积累，当达到一定浓度后，就会对人体的健康带来一系列负面影响，如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性等。更为重要的是，抗生素被过量食入健康人肠道，会破坏健康人的正常菌群环境，导致人体免疫力的降低，从而危害消费者的身体健康，同时也影响牛奶及乳制品的出口贸易。我国的原料乳中β_内酰胺类抗生素残留严重，对其开展监控检测是我国乳品业发展中极为关注的问题。欧盟、美国等多个国家都制定了牛奶、肌肉和肾脏等动物源性食品中该类药物的最高残留限量(MRL)，我国农业部235号文件公告对其MRL也做了严格规定，该类药物在牛奶中的MRL为4 100 μ g/L，在肌肉、肝脏和肾脏中的MRL为50 ΙΟΟΟμ g/kg。三聚氰胺(melamine)，简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物。食品工业中常需要测定食品中的蛋白质含量。由于直接测量蛋白质技术比较复杂，所以常用凯氏定氮法间接确定食品中蛋白质的含量。由于三聚氰胺与蛋白质相比含有更高比例的氮原子，所以三聚氰胺非法添加剂常被一些不法商贩用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标。2008年8月以来，中国一些医院陆续检查到部分婴儿患有胆结石，而这些患有胆结石的婴儿均喝了含有三聚氰胺的奶粉，这是影响全国的“三鹿奶粉”事件。在之后的调查中发现，有些不法商人为获取更高的利润，直接在原料奶中添加三聚氰胺。随后在全国奶粉和液态奶的检测中，发现市场上很大部分产品中均含有三聚氰胺，导致了乳品行业的诚信危机，也给人们的日常生活造成了巨大的负面影响。我国卫生部等五部门联合发布公告，规定了我国婴儿配方食品中三聚氰胺限量值为lmg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值为 2.5mg/kg。乳制品中的抗生素和三聚氰胺添加剂的残留目前已经成为消费者所迫切关注的焦点问题，为使牛奶中抗生素和三聚氰胺添加剂残留问题得到有效监控，符合最大残留限量标准，奶牛场、乳制品厂、政府监督部门、出入境检测、大型食品流通领域等都在努力寻求准确可行的检测方法，许多大型化学试剂和仪器公司也致力于开发β_内酰胺类和三聚氰胺残留检测的方法和仪器。目前，牛奶及生鲜奶中内酰胺类和三聚氰胺残留的检测方法依据不同的检测原理，大体可分为三大类:微生物受阻检测、仪器检测法、免疫学分析法。微生物受阻检测方法,主要有抑菌圈试验、浑浊度试验、变色型检测金标试剂盒方法,微生物检测方法检测成本价低，但是灵敏度低、耗时长、耐药菌的存在容易导致误检；仪器检测方法，是目前检测β -内酰胺类抗生素和三聚氰胺的主要方法，有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法、气相色谱-串联质谱法等，仪器检测方法精确度高，但其存在检测成本高，检测设备复杂，对检测人员的要求较高，检测耗时长等缺点，目前常用的免疫学分析法，主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法，两种方法的前处理过程较为复杂，对于现场大规模筛查样品还存在着一定局限性。中国专利技术专利200810162588.5 (CN101429241A)中公开了“青霉素与载体蛋白偶联产物和β-内酰胺类青霉素抗体制备的方法及用途”，该方法中的青霉素单克隆抗体制备的酶联免疫试剂盒仅能检测青霉素G、氨苄青霉素、羧苄青霉素三种β-内酰胺类抗生素，检测药物种类少，制备的胶体金试纸条检测灵敏度低。目前免疫分析领域缺乏能够同时检测内酰胺类抗生素和三聚氰胺的技术及其应用。因此，在实践中有必要建立一种检测药物种类多、敏感度高、操作简单、成本低、适合大规模推广的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种能够同时检测β_内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒。本专利技术所提供的试剂盒包括微孔条、微孔试剂、微孔塞和试纸条，试纸条包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂为冻干的头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物和三聚氰胺特异性抗体-胶体金标记物；头孢类药物特异性抗体可为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克隆抗体，三聚氰胺特异性抗体可为三聚氰胺单克隆抗体或三聚氰胺多克隆抗体；反应膜上包被有两条检测线和一条质控线；当头孢类特异性抗体为头孢类药物单克隆抗体时，微孔试剂中包含头孢类单克隆抗体-胶体金标记物，β_内酰胺类药物检测线包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物，质控线包被羊抗鼠抗抗体；当头孢类药物特异性抗体为头孢类药物多克隆抗体时，微孔试剂中包含头孢类多克隆抗体-胶体金标记物，β_内酰胺类药物检测线包被头孢类药物-载体蛋白偶联物，质控线包被羊抗兔抗抗体；当三聚氰胺特异性抗体为三聚氰胺单克隆抗体时，微孔试剂中包含三聚氰胺单克隆抗体-胶体金标记物，三聚氰胺检测线包被有三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控线包被羊抗鼠抗抗体；当三聚氰胺特异性抗体为三聚氰胺多克隆抗体时，微孔试剂中包含三聚氰胺多克隆抗体-胶体金标记物，三聚氰胺检测线包被三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控线包被羊抗兔抗抗体；三聚氰胺半抗原是通过三聚氰酸二酰胺与琥珀酸酐反应，得到的三聚氰酸二酰胺的半琥珀酸酯半抗原。所述保护膜粘贴在样品吸收垫上的检测端，上面有MAX标记线。所述的三聚氰胺检测线靠近样品吸收垫一端，质控线靠近吸水垫一端，β -内酰胺类药物检测线在三聚氰胺检测线和质控线之间。其中三聚氰胺检测线用检测线(T)表示，β-内酰胺类药物检测线用检测线(B)表示，质控线用质控线(C)表示。以试纸条的样品吸收垫一端为始端，以试纸条的吸水垫一端为末端，质控线(C)距离反应膜与吸水垫始端相连的一端为5-8mm，检测线⑶距离质控线(C)4_6mm，检测线⑴距离检测线(B)4_6mm。所述头孢类药物-载体蛋白偶联物是由头孢类药物与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。所述三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物是由三聚氰胺半抗原与载体蛋白偶联得至IJ，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。所述头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物中的头孢类药物特异性抗体是以头孢类药物-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。所述头三聚氰胺特异性抗体-胶体金标记物中的三聚氰胺特异性抗体是以三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸；保护膜为PE材质保护膜。本专利技术的另一个目的是提供了一种制备上述试剂盒的方法，其包括步骤:I)在微孔条上制备冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物和三聚氰胺特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂，并用微孔塞该盖在微孔条上；2)制备两条分别具有包被头孢类药物-载体蛋白偶联物和三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和一条包被抗抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测β‑内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒，其特征在于包括试纸条、微孔条、微孔试剂和微孔塞，所述试纸条包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有头孢类药物‑载体蛋白偶联物和三聚氰胺半抗原‑载体蛋白偶联物，质控线包被有抗抗体，所述微孔试剂为冻干的头孢类药物特异性抗体‑胶体金标记物和三聚氰胺特异性抗体‑胶体金标记物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，吴鹏，罗晓琴，郭旭，崔海峰，冯静，段盈盈，崔彦虎，聂雯莹，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11