检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒。试剂盒包括微孔条、微孔试剂、试纸条和微孔塞，所述试纸条由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板依次连接组成，所述反应膜上包括两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物和三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控线包被有羊抗鼠抗抗体。用本实用新型专利技术试剂盒同时检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的方法，简便、快速、直观、准确、便于携带、适用范围广、成本低、易推广使用。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种检测β -内酰胺类和三聚氰胺的试剂盒及方法。
技术介绍
内酰胺类药物是医学和兽医学上的一类重要的抗菌药物，应用十分广泛。但由于过敏反应及细菌产生的耐药性等原因，许多国家都对该类药物在动物上的使用及在动物源性食品中的残留进行了严格控制。美国食品和药品监督管理局(FDA)的调查表明不注意休药期、用药不合理或是使用违禁药物，是导致动物性食品中抗生素残留的主要原因。长期摄入含抗生素的食品，可造成药物积累，当达到一定浓度后，就会对人体的健康带来一系列负面影响，如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性等。更为重要的是， 抗生素被过量食入健康人肠道，会破坏健康人的正常菌群环境，导致人体免疫力的降低，从而危害消费者的身体健康，同时也影响牛奶及乳制品的出口贸易。我国的原料乳中β_内酰胺类抗生素残留严重，对其开展监控检测是我国乳品业发展中极为关注的问题。欧盟、 美国等多个国家 都制定了牛奶、肌肉和肾脏等动物源性食品中该类药物的最高残留限量 (MRL)，我国农业部235号文件公告对其MRL也做了严格规定，该类药物在牛奶中的MRL为 Γ ΟΟμ g/L，在肌肉、肝脏和肾脏中的MRL为5(Γ 000μ g/kg。三聚氰胺(melamine)，简称三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物。食品工业中常需要测定食品中的蛋白质含量。由于直接测量蛋白质技术比较复杂，所以常用凯氏定氮法间接确定食品中蛋白质的含量。由于三聚氰胺与蛋白质相比含有更高比例的氮原子， 所以三聚氰胺非法添加剂常被一些不法商贩用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标。2008年8月以来，中国一些医院陆续检查到部分婴儿患有胆结石，而这些患有胆结石的婴儿均喝了含有三聚氰胺的奶粉，这是影响全国的“三鹿奶粉”事件。在之后的调查中发现，有些不法商人为获取更高的利润，直接在原料奶中添加三聚氰胺。随后在全国奶粉和液态奶的检测中，发现市场上很大部分产品中均含有三聚氰胺，导致了乳品行业的诚信危机，也给人们的日常生活造成了巨大的负面影响。我国卫生部等五部门联合发布公告，规定了我国婴儿配方食品中三聚氰胺限量值为lmg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值为 2. 5mg/kg。乳制品中的抗生素和三聚氰胺添加剂的残留目前已经成为消费者所迫切关注的焦点问题，为使牛奶中抗生素和三聚氰胺添加剂残留问题得到有效监控，符合最大残留限量标准，奶牛场、乳制品厂、政府监督部门、出入境检测、大型食品流通领域等都在努力寻求准确可行的检测方法，许多大型化学试剂和仪器公司也致力于开发β_内酰胺类和三聚氰胺残留检测的方法和仪器。目前，牛奶及生鲜奶中内酰胺类和三聚氰胺残留的检测方法依据不同的检测原理，大体可分为三大类微生物受阻检测、仪器检测法、免疫学分析法。微生物受阻检测方法,主要有抑菌圈试验、浑浊度试验、变色型检测金标试剂盒方法,微生物检测方法检测成本价低，但是灵敏度低、耗时长、耐药菌的存在容易导致误检；仪器检测方法，是目前检测β -内酰胺类抗生素和三聚氰胺的主要方法，有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法、气相色谱-串联质谱法等，仪器检测方法精确度高，但其存在检测成本高，检测设备复杂，对检测人员的要求较高，检测耗时长等缺点，目前常用的免疫学分析法，主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法，两种方法的前处理过程较为复杂，对于现场大规模筛查样品还存在着一定局限性。中国专利技术专利200810162588. 5 (CN101429241A)中公开了“青霉素与载体蛋白偶联产物和β-内酰胺类青霉素抗体制备的方法及用途”，该方法中的青霉素单克隆抗体制备的酶联免疫试剂盒仅能检测青霉素G、氨苄青霉素、羧苄青霉素三种β-内酰胺类抗生素，检测药物种类 少，制备的胶体金试纸条检测灵敏度低。目前免疫分析领域缺乏能够同时检测内酰胺类抗生素和三聚氰胺的技术及其应用。因此，在实践中有必要建立一种检测药物种类多、敏感度高、操作简单、成本低、适合大规模推广的检测方法。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种能够同时检测β_内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒。本技术所提供的试剂盒包括微孔条、微孔试剂、微孔塞和试纸，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂的冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物和三聚氰胺特异性抗体-胶体金标记物；反应膜上具有包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物以及三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物的两条检测线和包被羊抗鼠抗抗体的一条质控线。两条检测线和一条质控线互相平行，三聚氰胺检测线靠近样品吸收垫一端，质控线靠近吸水垫一段。β_内酰胺类药物检测线在三聚氰胺检测线和质控线之间。其中三聚氰胺检测线用检测线(T)表示，β-内酰胺类药物检测线用检测线(B)表示，质控线用质控线(C)表示。质控线(C)距离反应膜的末端与吸水垫相连的一端为5-8mm,检测线(B)距离质控线(C) 4_6mm，检测线(T)距离检测线(B) 4_6mm。在试纸条上标记有MAX标记线的样品吸收垫上的检测端粘贴有保护膜。在装有冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物和三聚氰胺单克隆抗体-胶体金标记物的微孔条上具有微孔塞。为了便于运输和使用，试剂盒还有固定用具及其固定于其中用于盛装试纸条和冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物和三聚氰胺特异性抗体-胶体金标记物的微孔条的试剂桶，所述试剂桶上具有密封盖。本技术试剂盒中试纸条底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂盒盒体为硬纸盒；试剂桶为塑料试剂桶；固定用具为硬质支撑材料。本技术试剂盒具有如下有益效果I.灵敏度高传统的试纸卡均具有固定试纸条的卡壳固定装置,卡壳固定装置紧紧地将试纸条固定其中，在对样品检测时，由于卡壳与试纸条结合的比较紧密，致使检测样品溶液不能够充分渗透到样品吸收垫一段，并在试纸条上进行层析的速度十分缓慢，导致检测样品中的药物不能够与检测线上包被的包被原充分接触，致使试纸卡的灵敏度下降。本技术试剂盒比传统试纸卡的检测灵敏度高，由于本技术试剂盒的试纸条为裸条状，无需壳体紧固装置，检测样品可以直接接触试纸条的样品吸收垫一端，并且样品在试纸条上的层析速度比较快，使样品中的待检药物能够充分的与检测线上包被的包被原结合， 从而提高了试纸条的检测灵敏度。β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺检测试剂盒以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。其中的头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物和三聚氰胺单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂条中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试剂盒具有较高的特异性和灵敏度。本试剂盒对β-内酰胺类药物检测灵敏度分别为青霉素 G 2μ g/L、氨节青霉素3 μ 8/1、阿莫西林4 4 g/L、苯唑青霉素6μ g/L、邻青霉素6μ g/L、双青霉素6 μ g/L、萘夫西林20 μ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺的试剂盒，其特征在于包括试纸条、微孔条、微孔试剂和微孔塞，所述试纸条包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物和三聚氰胺半抗原-载体蛋白偶联物，质控线包被有抗抗体，所述微孔试剂为冻干的头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物和三聚氰胺特异性抗体-胶体金标记物。2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述反应膜上的两条检测线和一条质控线互相平行，并且与试纸条的长相垂直。3.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述的三聚氰胺检测线靠近样品吸收垫一端，质控线靠近吸水垫一端，β_内酰胺类药物检测线在三聚氰胺检测线和质控...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，吴鹏，罗晓琴，郭旭，崔海峰，冯静，段盈盈，崔彦虎，聂雯莹，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
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