一种抗生素检测试纸条及其制备方法、应用技术

本发明专利技术公布了一种抗生素检测试纸条，包括底板，所述底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜上设有包被有β-内酰胺抗原的检测线B、包被有四环素抗原的检测线T、包被有磺胺类抗原的检测线S和包被有羊抗鼠IgG的质控线C，所述结合垫上包被有β-内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、磺胺类特异性抗体-胶体金标记物和四环素特异性抗体-胶体金标记物。本发明专利技术还公布了该试纸条的制备方法及在牛奶抗生素检测的应用。本发明专利技术的试纸条检测快速；携带方便；灵敏度高；操作简便；便于储存；保质期长；可工业化生产；生产成本低；能够实现一次对β-内酰胺类抗生素、四环素类抗生素和磺胺类抗生素的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学检测领域，具体涉及β -内酰胺类、四环素类和磺胺类抗生素检测试纸条及其制备方法、应用。
技术介绍
奶牛在养殖过程中易患疾病，由于抗生素药效好、价格低廉，奶农在奶牛患病时大量使用，尤其是内酰胺类，四环素类和黄胺类抗生素被大量使用，导致原料乳中抗生素残留现象普遍，长期摄入含抗生素的食品，可造成药物积累，当达到一定浓度后，就会对人体的健康带来一系列负面影响，如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性等。更为重要的是，抗生素被过量食入健康人肠道，会破坏健康人的正常菌群环境，导致人体免疫力的降低，从而危害消费者的身体健康。欧盟、美国等多个国家都制定了牛奶、肌肉和肾脏等动物源性食品中该类药物的最高残留限量(MRL)，我国农业部235号文件公告对其MRL也做了严格规定，该类药物在牛奶中的MRL为4?100 μ g/L,在肌肉、肝脏和肾脏中的MRL为50?1000 μ g/kg。但极少量的产品能够达到该标准。目前，常用的检测方法中微生物受阻检测方法成本价低，但是灵敏度低、耗时长、耐药菌的存在容易导致误检；仪器检测方法精确度高，但其存在检测成本高，检测设备复杂，对检测人员的要求较高，检测耗时长等缺点，目前常用的免疫学分析法前处理过程较为复杂，不能实现样品的大规模检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的β -内酰胺类、四环素类和磺胺类抗生素检测耗时长、成本高的缺陷，提供一种灵敏度高，方便快捷的内酰胺类、四环素类和磺胺类抗生素检测试纸条及其制备方法、应用。本专利技术的技术方案是这样实现的:一种抗生素检测试纸条，包括底板，所述底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜上设有包被有内酰胺抗原的检测线Β、包被有四环素抗原的检测线Τ、包被有磺胺类抗原的检测线S和包被有羊抗鼠IgG的质控线C，所述结合垫上包被有β -内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、磺胺类特异性抗体-胶体金标记物和四环素特异性抗体-胶体金标记物。进一步地，所述反应膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有检测线S、检测线Τ、检测线Β和质控线C。进一步地，所述底板为PVC底板。进一步地，所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。进一步地，所述β -内酰胺抗原、四环素抗原和磺胺类抗原分别为β -内酰胺类抗生素-载体蛋白、四环素类抗生素-载体蛋白和磺胺类抗原抗生素-载体蛋白。进一步地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白的一种。 改进地，所述样品垫上还设有MAX标记线。更进一步地，所述样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫依次搭接粘贴到所述底板上。—种制备试纸条的方法，包括以下步骤:1)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；2)制备含有β -内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、四环素特异性抗体-胶体金标记物和磺胺类特异性抗体-胶体金标记物这3种胶体金标抗体的混合物；3)结合垫的包被:将步骤2)制备的3种胶体金标抗体混合物包被到所述结合垫上，包被后干燥；4)反应膜的包被:将羊抗鼠IgG、β -内酰胺抗原，四环素抗原和磺胺类抗原包被到反应膜上，分别制得质控线C、检测线Β、检测线Τ和检测线S，包被后干燥；5)试纸条的组装:在所述底板上依次粘贴样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫。抗生素检测试纸条在牛奶抗生素检测中的应用。本专利技术的一种抗生素检测试纸条，在反应膜上设有包被有β -内酰胺抗原的检测线Β、包被有四环素抗原的检测线Τ、包被有磺胺类抗原的检测线S和包被有羊抗鼠IgG的质控线C，以及在结合垫上包被有β -内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、磺胺类特异性抗体-胶体金标记物和四环素特异性抗体-胶体金标记物的能够实现一次对β-内酰胺类抗生素、四环素类抗生素和磺胺类抗生素的检测，由于在结合垫上直接包被这3类抗生素的特异性抗体-胶体金标记物，所述不需要另外设包被有胶体金标抗体提的微管，直接将待测样品滴加或将试纸条插入到样品中进行检测即可。本专利技术的试纸条具有以下有益效果:本专利技术的试纸条检测快速，仅需要5-10min ;携带方便；灵敏度高；操作简便，不需要对样品进行处理，也不需要单独准备特异性抗体-胶体金标记物，直接将样品滴加或将试纸条插入样品即可一次对3类抗生素进行检测；便于储存、保质期长；可工业化生产；生产成本低。【附图说明】为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术的抗生素检测试纸条的结构示意图；图2为抗生素检测试纸条的结果判断示意图。图中，1-底板；2_样品垫；3_结合垫；4_反应膜；5_吸水垫。【具体实施方式】下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例，仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1:试纸条的制备1.1胶体金颗粒的制备取0.01 % HAuC14水溶液100mL置于烧杯内；加入2mLl %柠檬酸三钠水溶液，用恒温电磁搅拌器加热煮沸15min左右，直至溶液呈红色；室温冷却后加入0.5mL 0.2mol/LK2C(V混匀。此法制备的胶体金颗粒直径为15nm，且大小均一。将制备好的胶体金颗粒置于4 °C冰箱保存备用。1.2特异性抗体-胶体金标记物的制备取30mL胶体金溶液加于50mL离心管中，用0.1M 1(20)3或0.1M HC1调节pH至7.0-7.5，用铝箔纸包住离心管，轻轻振荡；边振荡边逐滴加入lmL含lOOugP -内酰胺特异性抗体溶液，继续振荡20min ;边振荡边逐滴加入lmL含lOOug四环素特异性抗体溶液，继续振荡20min ;边振荡边逐滴加入lmL含100ug磺胺类特异性抗体，继续振荡20min ;逐滴加入2mL 1% BSA溶液以饱和游离的胶体金，然后于4°C，lOOOOrpm,离心45min。离心后取出离心管，轻轻将上清液吸掉一部分后，用移液枪将管底沉淀的混合有3种胶体金标抗体的混合物吸至2mL的离心管中，4°C保存备用。其中，β -内酰胺特异性抗体-胶体金标记物中的β -内酰胺特异性抗体是用β-内酰胺抗原作为免疫原制备获得，β -内酰胺特异性抗体可为β-内酰胺单克隆抗体或β -内酰胺多克隆抗体；磺胺类特异性抗体-胶体金标记物中的磺胺类特异性抗体是用磺胺类抗原作为免疫原制备获得，磺胺类特异性抗体可为磺胺类单克隆抗体或磺胺类多克隆抗体；四环素特异性抗体-胶体金标记物中的四环素特异性抗体是用四环素抗原作为免疫原制备获得，四环素特异性抗体可为四环素单克隆抗体或四环素类多克隆抗体；其中， 内酰胺抗原，四环素抗原和磺胺类抗原分别为内酰胺类抗生素-载体蛋白、四环素类抗生素-载体蛋白和磺胺类抗生素-载体蛋白的偶联物，载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白。其中，单克隆抗体的使用进一步增加了检测结果的可靠性。1.3结合垫的包被将1.2制备的3种胶体金标抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗生素检测试纸条，其特征在于：包括底板，所述底板上依次粘贴有样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述反应膜上设有包被有β‑内酰胺抗原的检测线B、包被有四环素抗原的检测线T、包被有磺胺类抗原的检测线S和包被有羊抗鼠IgG的质控线C，所述结合垫上包被有β‑内酰胺特异性抗体‑胶体金标记物、磺胺类特异性抗体‑胶体金标记物和四环素特异性抗体‑胶体金标记物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：梁展洪，杨漾，
申请(专利权)人：广州璞雅医药生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44