一种牛奶中抗生素残留的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种牛奶中抗生素残留的检测方法，在牛奶中加入破乳剂，超声分散，加入缓冲溶液进行超声提取，离心，移取上清液，进行酸化，放置，待净化，转移至固相萃取柱中进行洗脱萃取，氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，过微孔滤膜后滤液待测；用高效液相色谱‑串联质谱法，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。本发明专利技术检测方法处理简单，分析时间短，检测速度快，通过加入破乳剂来消除乳化现象，促使牛奶中的蛋白质、脂肪、糖类与抗生素有效分离，提高样品中抗生素的溶出率，保证最终检测结果的准确性，为食品安全提供有益保障。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品安全检测领域，具体是一种牛奶中抗生素残留的检测方法。
技术介绍
抗生素在乳制品中的残留越来越引起关注。除了一些常见的炎症疾病，奶牛尤其易患乳腺炎，因此兽医常采用抗生素进行治疗。由于一般抗生素能耐高温，现有的加热杀菌工艺根本无法完全消除牛奶中的抗生素残留。长期饮用含有微量抗生素的牛奶，会增加人体内细菌的耐药性，降低或完全抵消抗生素类药物的疗效，另外，对于特定人群，含有超量抗生素的牛奶还可能会引起抗生素过敏反应。因此，对牛奶进行抗生素残留检测对保证食品安全具有重要意义。目前，对牛奶中的抗生素残留检测主要有酶联免疫法、单一的高效液相色谱法、固相萃取技术、固相微萃取技术以及基质固相分散等前处理技术，以用来解决样品分析测试中的基质干扰问题。这些检测方法都涉及到样品前处理步骤，需要从牛奶中提取出抗生素。由于，牛奶中含有蛋白质、脂肪、糖类等成分，萃取时有机相与水相的界面不清，乳化状态很严重。采用常规的化学试剂并不能完全萃取出其中的抗生素成分，从而造成检测结果的准确度不高。再有，这些检测技术存在样品处理过程复杂、有毒试剂接触多、耗材消耗量大等问题，因此无法很好的检测出残留的抗生素。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种牛奶中抗生素残留的检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种牛奶中抗生素残留的检测方法，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入破乳剂，超声振荡20～30min后，分散均匀后，加入磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液，超声提取16～20min，离心4～6min，移取上清液，加入体积比为1:1～2的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液和盐酸进行酸化，混合均匀，放置2～3h，待净化；（2）将待净化液转移至固相萃取柱中，依次用水、甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，真空减压抽干后，用甲酸水/甲醇洗脱，收集洗脱液；在50～55℃的水浴中用氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，保温20～30min，再次混合均匀，过孔径为0.20～0.24μm的微孔滤膜后滤液待测；（3）用高效液相色谱-串联质谱法，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，质谱采用离子化电喷雾，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。作为本专利技术进一步的方案：所述破乳剂为聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚或聚氧乙烯聚氧丙烯十八醇醚。作为本专利技术进一步的方案：所述固相萃取柱为C18柱或HLB萃取柱。作为本专利技术再进一步的方案：所述高效液相色谱-串联质谱法，洗脱梯度以体积计分别为95：5、75：25、5：95，各梯度洗脱时间分别为2.5min、3.5min、4.0min、2.5min；离子化电喷雾的离子源为HESI-II，毛细管温度为320℃，鞘气流速40L/min，辅助气流速5L/min，吹扫气流速2.5L/min，喷雾电压为3KV，透镜电压为45V，采用正离子和负离子模式分别采集数据或者正负离子同时切换采集数据，一级全扫描的分辨率R=70000，扫描范围100～1000m/z。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术检测方法处理简单，分析时间短，检测速度快，通过加入破乳剂来消除乳化现象，促使牛奶中的蛋白质、脂肪、糖类与抗生素有效分离，提高样品中抗生素的溶出率，保证最终检测结果的准确性，为食品安全提供有益保障。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1牛奶中抗生素残留的检测方法，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚，超声振荡20min后，分散均匀后，加入磷酸盐缓冲溶液，超声提取20min，离心4min，移取上清液，加入体积比为1:1的磷酸盐缓冲溶液和盐酸进行酸化，混合均匀，放置2h，待净化；（2）将待净化液转移至C18固相萃取柱中，依次用水、甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，真空减压抽干后，用甲酸水/甲醇洗脱，收集洗脱液；在50℃的水浴中用氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，保温30min，再次混合均匀，过孔径为0.22μm的微孔滤膜后滤液待测；（3）用高效液相色谱-串联质谱法，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，质谱采用离子化电喷雾，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。其中，高效液相色谱-串联质谱法，洗脱梯度以体积计分别为95：5、75：25、5：95，各梯度洗脱时间分别为2.5min、3.5min、4.0min、2.5min；离子化电喷雾的离子源为HESI-II，毛细管温度为320℃，鞘气流速40L/min，辅助气流速5L/min，吹扫气流速2.5L/min，喷雾电压为3KV，透镜电压为45V，采用正离子和负离子模式分别采集数据或者正负离子同时切换采集数据，一级全扫描的分辨率R=70000，扫描范围100～1000m/z。实施例2牛奶中抗生素残留的检测方法，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入聚氧乙烯聚氧丙烯十八醇醚，超声振荡30min后，分散均匀后，加入柠檬酸盐缓冲溶液，超声提取16min，离心6min，移取上清液，加入体积比为1:2的柠檬酸盐缓冲溶液和盐酸进行酸化，混合均匀，放置3h，待净化；（2）将待净化液转移至HLB固相萃取柱中，依次用水、甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，真空减压抽干后，用甲酸水/甲醇洗脱，收集洗脱液；在55℃的水浴中用氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，保温20min，再次混合均匀，过孔径为0.22μm的微孔滤膜后滤液待测；（3）用高效液相色谱-串联质谱法，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，质谱采用离子化电喷雾，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。其中，高效液相色谱-串联质谱法，洗脱梯度以体积计分别为95：5、75：25、5：95，各梯度洗脱时间分别为2.5min、3.5min、4.0min、2.5min；离子化电喷雾的离子源为HESI-II，毛细管温度为320℃，鞘气流速40L/min，辅助气流速5L/min，吹扫气流速2.5L/min，喷雾电压为3KV，透镜电压为45V，采用正离子和负离子模式分别采集数据或者正负离子同时切换采集数据，一级全扫描的分辨率R=70000，扫描范围100～1000m/z。对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征在于，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入破乳剂，超声振荡20～30min后，分散均匀后，加入磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液，超声提取16～20min，离心4～6min，移取上清液，加入体积比为1:1～2的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液和盐酸进行酸化，混合均匀，放置2～3h，待净化；（2）将待净化液转移至固相萃取柱中，依次用水、甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，真空减压抽干后，用甲酸水/甲醇洗脱，收集洗脱液；在50～55℃的水浴中用氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，保温20～30min，再次混合均匀，过孔径为0.20～0.24μm的微孔滤膜后滤液待测；（3）用高效液相色谱‑串联质谱法，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，质谱采用离子化电喷雾，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统计数据并判定结果。

【技术特征摘要】
1.一种牛奶中抗生素残留的检测方法，其特征在于，步骤如下：（1）量取牛奶于离心管中，加入破乳剂，超声振荡20～30min后，分散均匀后，加入磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液，超声提取16～20min，离心4～6min，移取上清液，加入体积比为1:1～2的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲溶液和盐酸进行酸化，混合均匀，放置2～3h，待净化；（2）将待净化液转移至固相萃取柱中，依次用水、甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，真空减压抽干后，用甲酸水/甲醇洗脱，收集洗脱液；在50～55℃的水浴中用氮气吹干，加入乙腈水溶液，混合均匀，保温20～30min，再次混合均匀，过孔径为0.20～0.24μm的微孔滤膜后滤液待测；（3）用高效液相色谱-串联质谱法，采用甲酸水/甲醇作为洗脱液，利用梯度洗脱的方式进行洗脱，质谱采用离子化电喷雾，进行测定和确证，采用外标法进行定量，统...

【专利技术属性】
技术研发人员：周朱晨，张根义，胡彬，张进，吴念绮，
申请(专利权)人：百奥森江苏食品安全科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32