本发明专利技术公开了小檗碱的一种新用途，可作为金属β‑内酰胺酶抑制剂用于防止对金属β‑内酰胺酶敏感的化合物被酶解，特别是防止金属β‑内酰胺酶对β‑内酰胺类抗生素的水解，对该类抗生素起到保护作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及小檗碱的一种新用途，作为金属β -内酰胺酶抑制剂，用于防止对金 属β -内酰胺酶敏感的化合物被酶解，优选防止金属β -内酰胺酶对β -内酰胺类抗生素 的水解，对该类抗生素起到保护作用。通过在青霉素等β-内酰胺类抗生素的各类制剂中 添加小檗碱，以抑制产金属β -内酰胺酶的微生物对β -内酰胺类抗生素的水解，从而提高 β-内酰胺类抗生素的稳定性，维持抗生素的疗效。或者作为预防用药，在使用β-内酰胺 类抗生素之前，先用小檗碱抑制金属β -内酰胺酶的活性，提高β -内酰胺类抗生素的作用 效果。
技术介绍
内酰胺类抗生素疗效好而毒性小，是目前治疗感染性疾病的重要药物。该类 药物包括青霉素类、头孢菌素类、青霉烯类、头霉素类、硫霉素类、单环内酰胺类抗生素 等，它们结构上都具有一个发挥抗菌活性不可缺少的内酰胺环。 β -内酰胺酶是细菌产生的一类耐药酶，它可催化β -内酰胺类抗生素中的内酰 胺环水解开环而破坏，从而使细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性。基于DNA序列相似 性，β -内酰胺酶分为4类：A-D。其中，A，C，D三类酶依赖于活性中心的Ser发挥催化作用， 可以被克拉维酸、他唑巴坦和舒巴坦等临床上使用的抗生素所抑制；而B类酶需要依赖活 性中心的Zn发挥催化作用酶，被称为金属β-内酰胺酶（MBL)，该类酶临床上尚无有效的抑 制剂。 2010年8月11日出版的英国《柳叶刀-传染病》期刊报道了一种新的超级细菌， 该菌能产生NDM-1型金属β -内酰胺酶（新德里金属β -内酰胺酶1)，携带这一耐药因子 的新型细菌对几乎包括碳氢霉烯在内的几乎所有抗生素都具有抗药性，患者死亡率很高。 由于这一耐药因子的基因是存在质粒上的，可以独立于染色体之外自主复制，并可以转移 到不同种属的细菌内，病菌拥有传播和变异的惊人潜能。NDM-1超级细菌的出现引起全球的 关注和紧张，世界卫生组织呼吁各国加强监控，敦促各国采取措施抗击耐药性细菌，积极 减少细菌对抗生素产生抗药的机会。NDM-1的出现也使得金属β -内酰胺酶及其抑制剂的 研究成为全球关注的热点。
技术实现思路
本专利技术公开了小檗碱的新用途，其可以抑制金属内酰胺酶的活性，可作为金 属β -内酰胺酶抑制剂用于提高β -内酰胺类抗生素的稳定性，延长作用时间，提高抗生素 的活性。 本专利技术具体技术方案如下： 小檗碱及其盐、水合物或溶剂合物在制备金属内酰胺酶抑制剂中的用途。 小檗碱化合物原型结构如下： 本专利技术所述的小檗碱可以为季铵式、醛式或醇式的小檗碱。优选季铵式的小檗碱。 所述小檗碱的盐优选盐酸小檗碱或硫酸小檗碱。 小檗碱来源简单，原材料是常见中药，可以从植物中提取，也可以从原料商业来源 购买得到。 本专利技术所述金属β -内酰胺酶包括IMP-1、V頂-2或NDM-1型金属β -内酰胺酶。 所述金属内酰胺酶包括从自然界中提取或用基因工程菌制备的金属内酰胺酶。 本专利技术所述的用途，可以将小檗碱及其盐、水合物或溶剂合物作为金属β-内酰 胺酶抑制剂，抑制β -内酰胺类抗生素被金属β -内酰胺酶水解。所述β -内酰胺类抗生素 为分子结构中包括β-内酰胺环的抗生素。优选的，包括青霉素类、头孢菌素类、青霉烯类、 头霉素类、硫霉素类、单环β-内酰胺类抗生素。进一步优选，青霉素类的氨苄西林，阿莫西 林，替卡西林，哌拉西林；头孢类的头孢氨苄、头孢拉定，头孢呋辛，头孢克洛，头孢他啶；头 霉素；单环β -内酰胺类的氨曲南，碳氢霉烯类的亚胺培南，美罗培南，比阿培南等。 本专利技术公开了小檗碱作为金属β -内酰胺酶抑制剂方面的应用，小檗碱可以通过 固体粉末、颗粒以及溶液等形式与β -内酰胺类抗生素混合，以保护抗生素不被金属β -内 酰胺酶水解，提高内酰胺类抗生素的稳定性。或者作为预防用药，在使用内酰胺类 抗生素之前，先用小檗碱抑制金属β -内酰胺酶的活性，提高β -内酰胺类抗生素的作用效 果。 小檗碱是一种异喹啉生物碱，又称黄连素，存在于小檗科等4科10属的许多植物 中。小檗碱对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌均有抗菌作 用，并有增强白血球吞噬作用。小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素）多用于治疗胃肠炎、细 菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。随着临床耐药 菌、超级细菌的出现，很多抗生素的临床效果并不理想，甚至是毫无作用。目前尚未有小檗 碱在抗耐药菌，尤其是超级细菌作用方面有新的报道，也未见盐酸小檗碱作为MBL抑制剂， 尤其是对超级细菌产生的NDM-1型金属β-内酰胺酶的抑制活性方面的报道，本专利技术公开 了盐酸小檗碱这一新的活性，可用于抑制产MBL微生物对β -内酰胺类抗生素的水解，提高 抗生素的稳定性，作为β-内酰胺类抗生素的保护剂以及抗超级细菌的潜在药物，而具有 良好的开发应用前景。【具体实施方式】 结合以下具体实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的保护内容不局限 于以下实施例。在不背离专利技术构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优 点都被包括在本专利技术中，并且以所附的权利要求书为保护范围。 实施例1小檗碱对金属β -内酰胺酶抑制活性的检测 使用60 μ Μ头孢呋辛钠为底物，所用缓冲液为50mM HEPES (4-羟乙基哌嗪乙磺酸）， 200mM NaCl，100yM ZnCl2，pH = 7. 2,反应温度为30°C，使用的金属β-内酰胺酶终浓度为 1〇ηΜ，检测波长为260nm,具体过程如下： 1. 首先将金属β -内酰胺酶用缓冲液配置成浓度1〇ηΜ的溶液，置于30°C孵育lOmin， 使得Zn2+充分占据活性中心； 2. 将小檗碱溶于缓冲液中，配置成不同的浓度，加入到酶液中，30°C孵育6min，使抑制 剂与酶充分结合； 3. 取lml上述溶液加入石英比色皿中，加入3 μ L头孢呋辛钠（终浓度60 μ M)摇匀，立 即测定体系吸光度的变化，记录数据。 由于底物头孢呋辛钠被酶水解后其吸光度下降，因而通过测定吸光度的变化可以 表征底物的水解程度。计算不同浓度的小檗碱对β-内酰胺酶水解底物的抑制率，以化合 物的浓度对抑制率拟合曲线，计算IC5。值，并以已知的NDM-1酶抑制剂L-卡托普利作为阳 性对照，结果表明小檗碱抑制NDM-1型金属β -内酰胺酶的IC5。为6. 77±0. 45 μΜ，抑制 V頂-2型金属β -内酰胺酶的1(：5。为12. 21±1. 30 μΜ，抑制頂Ρ-当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
小檗碱及其盐、水合物或溶剂合物在制备金属β‑内酰胺酶抑制剂中的用途。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑珩，劳兴珍，周丹丹，余永柱，
申请(专利权)人：南京广方生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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