本发明专利技术涉及工程化抗体，当施用于人时，该工程化抗体在人中表现出低水平的免疫原性。本公开还涉及用于产生抗体的方法。工程化抗体可以源自例如非人(例如鼠)供体抗体、或源自嵌合的或人源化的抗体，当长期施用于人时，所述抗体已知、预测或预期在人中引起中和性抗-抗体反应。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的领域是医学、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。背景 将啮齿动物抗体(例如，小鼠、大鼠或兔)施用于人通常导致人中抗啮齿动物免疫球蛋白抗体的产生。抗啮齿动物抗体可以中和治疗性抗体的任何可能的治疗作用。对于施用于人的其它类型的非人抗体(例如，猿类抗体)，发生同样的过程。为了克服这个问题，可以将非人抗体再工程化(re-engineered)为，例如，嵌合人抗体或⑶R-嫁接(grafted)的人抗体。在人嵌合抗体中，可变区是非人来源的(例如，小鼠来源)，恒定区是人来源的。通常被称为人源化抗体的CDR-嫁接的抗体的产生是更复杂的过程，其中，用非人供体抗体的⑶R替换完全人受体抗体的⑶R。然而，对于这些再工程化抗体变体中的每一种，仍然报道了人抗人抗体(HAHA)反应。例如，Welt 等.描述了人源化的抗-A33抗体，当施用于人结肠癌患者时，在73%的患者中引起了 HAHA反应。在另一个例子中，已经 显示，嵌合的抗-TNF抗体Remicade (Johnson & Johnson)在单一治疗的最高达53%的类风湿关节炎患者中和当与甲氨喋呤联合治疗的高达15%的患者中引起了 HAHA 反应。(见,例如,Aarden 等.(2008) Curr Opin Iwmuno 12。: 431-435。)发现高达26%的强直性脊柱炎患者在重复施用药物后产生针对Remicade 的抗体。Anderson [ (2005) Semin Arthritis Rheum A: 19-221 报道,在接受完全人源化抗体阿汰木单抗(adalimumab , HUMIRA )的患者中，人抗阿达木单抗抗体的发生率约为6%。如同Remicade ,当阿达木单抗与甲氨喋呤联合施用时，观察到了针对阿达木单抗的较低发生率的HAHA反应(见Aarden等(2008),同上)。然而,Aarden等发现,近20%的针对阿达木单抗的HAHA反应是中和的。因此，对于人源化治疗性抗体以降低人类患者中的免疫原性、尤其对于要长期施用的治疗性抗体的改进的方法显然仍然有需要。概沭 本公开至少部分基于专利技术人的发现，即人源化抗-C5抗体依库丽单抗(eculizumab)在人中表现出非常低水平的免疫原性。正如随附的工作实施例中所详述的，在数年期间，超过130个治疗剂量的依库丽单抗施用于患有阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的个体患者。患者没有同时施用免疫抑制剂如甲氨喋呤。从患者获得血液样品，并分析以确定样品是否包含结合于依库丽单抗的抗体。这种抗体的存在表明针对依库丽单抗的人抗-人抗体反应。结果发现，仅有1.2%的患者(2/161)具有低、但可检测水平的结合于依库丽单抗的抗体。然而，进一步的分析验证了两份血液样品都不包含能够中和依库丽单抗的治疗作用的抗体。因此，专利技术人推测，可以将依库丽单抗用作产生额外的治疗性抗体的支架，该额外的治疗性抗体在人中也表现出低水平的免疫原性。因此，本公开的特征在于工程化的抗体，其包含嫁接于免疫原性降低的受体抗体支架上的供体抗体的CDR，与供体抗体在人中的免疫原性相比，其在人中的免疫原性更低。工程化的抗体可以源自已知、预测或预期在人中，尤其当它们长期施用时，引起中和性抗-抗体反应的供体抗体。如此处所述，供体抗体可以是，例如，非人抗体(例如，啮齿动物抗体或非人类灵长类抗体)或者被发现产生人抗-人抗体(HAHA)反应(例如，在人中中和供体抗体的治疗作用的HAHA反应)的人源化的或完全的人抗体。供体抗体和/或获得的工程化抗体可以是用于治疗或诊断人受试者中任何各种疾病的抗体，所述疾病包括但不限于，癌症、感染、代谢紊乱、炎症状况、自身免疫性疾病、神经病症、血液病症和心血管病症。正如工作实施例中所讨论的，依库丽单抗是人源化的抗体，其具有一组源自1.23 Ig轻链分子的轻链框架区域和一组源自H20C3 Ig重链分子的重链框架区域。Weng等.(1992) J IimunolUQ ( 、:2518-2529提供了 H20C3重链多肽的氨基酸序列，该序列也可根据NCBI登录号AAA529 85获得。编码H20C3的核酸序列与对应的人种系重链免疫球蛋白基因约 98%相似。Klein 等.(1993) Eur J Immunol 23(12):3248-3262 部分描述了1.23轻链多肽的氨基酸序列，其完整序列也可根据NCBI登录号CAA51145.1而公开获得。1.23编码序列源自人种系V K和Jk基因，但是在第38位包含来自种系序列的单一氨基酸改变。因此，来自依库丽单抗的框架区(依库丽单抗的轻链或重链可变区)，1.23和/或H20C3可用于产生在人中表现出低水平免疫原性的工程化抗体。工作实施例描述了额外的功能性的人源化抗体的构建，该抗体包括来自依库丽单抗的轻链框架区1-3和重链框架区1-3。在一些实施方案中，一个或多个但不是所有的依库丽单抗的⑶R，1.23和/或!120〇3也可用于产生工程化抗体。 在一个方面，本公开的特征在于多肽(例如，轻链多肽)，其包含下列顺序的氨基酸序列区段:LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。从具有 SEQ ID NO:2 或 SEQ IDN0:8所述的氨基酸序列的轻链可变区获得一个或多个轻链框架区LFR1、LFR2和LFR3，从供体抗体获得一个或多个轻链互补决定区IXDRl、IXDR2和IXDR3，条件是该多肽不包含SEQID N0:2或SEQ ID NO:8所述的完整氨基酸序列。在一些实施方案中，可以从具有SEQ IDN0:2或SEQ ID N0:8所述的氨基酸序列的轻链可变区获得LFR4。在一些实施方案中，可以从具有SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:8所述的氨基酸序列的轻链可变区获得一个⑶R。在一些实施方案中，可以从具有SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:8所述的氨基酸序列的轻链可变区获得两个CDR。在一些实施方案中，至少两个CDR可以来自同样的供体抗体。在一些实施方案中，所有的CDR可以来自同样的供体抗体。在一些实施方案中，根据Kabat定义框架区和⑶R。在一些实施方案中，根据Chothia定义框架区和⑶R 。在一些实施方案中，根据组合的Kabat-Chothia定义来定义框架区和⑶R。在一些实施方案中，LFRl包含或组成为SEQ ID NO:9所述的氨基酸序列。在一些实施方案中，LFR2包含或组成为SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 18所述的氨基酸序列。在一些实施方案中，LFR3包含或组成为SEQ ID NO: 11所述的氨基酸序列。在一些实施方案中，LFR4包含或组成为SEQ ID NO: 12所述的氨基酸序列。在一些实施方案中，LFRl包含或组成为SEQ ID N0:9所述的氨基酸序列；LFR2包含或组成为SEQ ID NO: 10所述的氨基酸序列；LFR3包含或组成为SEQ ID NO: 11所述的氨基酸序列；以及LFR4包含或组成为SEQ ID NO: 12所述的氨基酸序列。在一些实施方案中，LFRl包含或组成为SEQ ID N0:9所述的氨基酸序列；LFR2包含或组成为SEQ ID NO: 18所述的氨基酸序列；L本文档来自技高网...
【技术保护点】
多肽，包含下列顺序的下列氨基酸序列区段：LFR1‑LCDR1‑LFR2‑LCDR2‑LFR3‑LCDR3‑LFR4，其中从具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:8所述的氨基酸序列的轻链可变区获得轻链框架区LFR1、LFR2和LFR3中的一个或多个，并且其中从供体抗体获得轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3中的一个或多个，条件是所述多肽不包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:8所述的完整氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：RP罗瑟，PP坦伯里尼，
申请(专利权)人：阿雷克森制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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