膜联蛋白1抗体制造技术

本发明专利技术提供一种特异性结合分子，该特异性结合分子针对具有图2A所示的氨基酸序列的人类Anx-A1蛋白而产生。本发明专利技术还涉及这种特异性结合分子在治疗T细胞介导的疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与膜联蛋白-Al结合的特异性结合分子和产生这种特异性结合分子的杂交瘤细胞系，特别涉及该分子的抗体和片段。这种特异性结合分子可用于治疗T-细胞介导的疾病。
技术介绍
由于糖皮质激素(GCs)能够同时阻止固有免疫应答和适应性免疫应答，因此经常被用于治疗各种慢性自身免疫疾病。通过本专利技术人和其他研究组过去约10年的研究已经表明GCs对固有免疫应答的某些炎症效应是由被称作膜联蛋白-1(Anx-Al)的蛋白介导的。已经证明该蛋白在许多细胞种类包括中性粒细胞、巨噬细胞和内皮细胞的自我平衡控制中发挥着作用。然而，经常被忽视的方面是Anx-Al在适应性免疫应答中的作用。令人惊讶的是考虑已经将Anx-Al提议作为GCs的药理作用的第二信使之一。本专利技术人先前已经证明，Anx-Al通过调节T细胞受体(TCR)信号的强度在T细胞中发挥自我平衡作用(D，Acquisto et al.，Bloodl09:1095-1102，2007)。而且，本专利技术人已经证明，高水平的Anx-Al降低T细胞活化的阈值，并促进其分化成Thl细胞，但Anx-Al基因缺陷型小鼠却表现出T细胞活化受损和分化成Th2细胞的增加(D，Acquisto et al.，Eur.J.1mmunol.37:3131-3142，2007)。W02005/027965记载了凋亡中性粒细胞将抗炎信号传递到树突细胞的机制的发现过程，并识别了干扰该过程的抗体。
技术实现思路
本专利技术人已经识别出一种在T细胞活化的特异性抑制方面性能良好且没有任何不利的细胞毒性效应的单克 隆抗体。该抗体可用于治疗T细胞介导的疾病，例如风湿性关节炎或多发性硬化症。因此，本专利技术提供一种针对具有图2A所示的氨基酸序列的人类Anx-Al蛋白而产生的特异性结合分子。定义本文中使用的“特异性结合分子”是一对彼此具有结合特异性的分子中的成员。特异性结合对中的成员可以是天然来源的或其整个或部分是合成产生的。成对分子中的一个成员的表面具有一个能与成对分子中的另一成员的特定空间和极性结构特异性结合从而互补的区域，该区域可以为突起或凹陷。因此，每对成员具有彼此特异性结合的特性。各种类型的特异性结合对的实例为抗原-抗体、生物素-亲和素、激素-激素受体、受体-配体、酶-基质。本专利技术主要考虑抗原-抗体类型的反应。本专利技术的特异性结合分子与Anx-Al的结合亲和力大于与其它分子的结合亲和力，即该特异性结合分子与Anx-Al特异性结合。与Anx-Al结合的特异性结合分子包括抗Anx-Al抗体和适体。本专利技术的特异性结合分子通常为抗体。本专利技术的抗Anx-Al抗体通过阻止T细胞活化而发挥功能，因此，当被给药时，该抗体可以用于治疗T细胞介导的疾病，该疾病通常是由异常的T细胞活化引起的。本文中使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有抗原结合位点的分子，该抗原结合位点特异性结合抗原，无论该抗原是天然的还是部分或全部合成产生的。该术语还包括任何具有结合结构域的多肽或蛋白质，该结合结构域为抗体结合结构域或与抗体结合结构域同源的结构域。这些可以从天然来源得到，它们还可以部分或全部通过合成得到。抗体是通常含有两条相同重链和两条相同轻链的多肽，所述轻链小于所述重链。哺乳动物的抗体有两种称作λ和K的轻链。每条重链和每条轻链都由可变区和恒定区组成。重链可变区被称作Vh区，轻链可变区被称作'区。对于K轻链来说，'区也可以被称作Vk区。重链和轻链的每个可变区都包括3个互补决定区(CDRs)，CDR1、CDR2 和 CDR3。将这些分别称作 VLCDRl、VLCDR2、VLCDR3、VHCDRl、VHCDR2 和VHCDR3。抗体的实例有免疫球蛋白亚型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)和它们的亚型子类；包含抗原结合结构域的片段如Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、dAb、Fd ;和双体抗体。所述抗体可以为多克隆抗体或单克隆抗体。本文中，单克隆抗体可以被称作“mAb”。具体实施例方式膜联蛋白是一类结合钙和磷脂的细胞蛋白，也被称作脂皮质蛋白。膜联蛋白家族有13个成员，包括膜联蛋白Al、膜联蛋白A2和膜联蛋白A5。膜联蛋白Al也被称作膜联蛋白-1，在本文中被称作“Anx-Al”。膜联蛋白-1 (Anx-Al)是一种分子量为37kDa的蛋白，并且最初被认为是糖皮质激素活动的介导物。在过去的几年中，已经有证据表明Anx-Al通过调节T细胞受体(TCR)信号的强度在适应性免疫系统，特别是在T细胞中发挥着自我平衡的作用。Anx-Al在体内固有免疫系统的细胞中发挥着炎症内源性下调物的作用。附图说明图1A是显示Anx-Al三维结构的带状图。人类有8个编码Anx-Al的核苷酸序列。其中，仅有四个被翻译，因此有四种Anx-Al的亚型，所述四个 亚型被命名为ANXA1-002、ANXA1-003、ANXA1-004和ANXA1-006。这些序列可以从数据库网站(www.ensembl.0rg)中得到，且被命名为 0TTHUMT00000052664(ANXAl-002)、 0TTHUMT00000052665(ANXA1-003)、0TTHUMT00000052666 (ANXA1-004)和 0TTHUMT00000052668 (ANXA1-006)。图 2A 显示了一种人类膜联蛋白-1 (Anx-Al)的ANXA1-003亚型的氨基酸和核苷酸序列。图2B、2C和2D分别显示了亚型ANXA1-002、ANXA1-004和ANXA1-006的氨基酸序列。从图2可以看出，亚型ANXA1-002.ANXA1-004和ANXA1-006是ANXA1-003的短剪接变体或是少量氨基酸发生改变的ANXA1-003的变体。许多研究已经表明，被称作Ac.2-26的Anx-Al的N-末端肽作为整个蛋白质的生物活性代表物(surrogate)(参见例如Lim et al., Proc Natl Acad SciUSA95, 14535-9，1998)。图1B是膜联蛋白重复序列和该生物活性序列位点的示意图。肽Ac.2-26是一种乙酰化的肽，该肽具有图2所示的Anx-Al的全长氨基酸序列的氨基酸残基2-26的序列。图1C显示了肽Ac.2-26的序列，该序列如下所述:ch3co-amvseflkqawfieneeqeyvqtvkAnx-Al及其N-末端衍生的生物活性肽通过甲酰肽受体(FPR)家族的成员介导它们的生物效应。Anx-Al通过直接结合和活化该家族中的成员类甲酰肽受体-1 (FPRL-1)在中性粒细胞溢出和固有免疫中起到反向调节作用。先前，本专利技术的专利技术人就已经发现，在存在hrAnx-Al的情形下，通过刺激FPRL-1来刺激T细胞可提高T细胞的活化作用(DJ Acquisto et al.，Bloodl09:1095-1102，2007)。本专利技术的特异性结合分子可与膜联蛋白-1 (Anx-Al)结合。特异性结合分子结合的Anx-Al是具有图2A所示的多肽序列的人类Αηχ-Α1。在第一方面中，本专利技术提供一种针对具有图2Α所示的氨基酸序列的人类Anx-Al蛋白而产生的特异性结合分子。本专利技术的这个方面还涉及一种包括本专利技术的第一方面的特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.09 GB 1009675.8;2010.07.15 GB 1011943.61.种特异性结合分子，该特异性结合分子针对具有图2A所示的氨基酸序列的人类Anx-Al蛋白而产生。2.种特异性结合分子，所述特异性结合分子具有如权利要求1所述的特异性结合分子的互补决定区(CDRs) VLCDRl、VLCDR2、VLCDR3、VHCDRl、VHCDR2 和 VHCDR3，或与每个各自的⑶Rs至少有70%同一性的氨基酸序列。3.据权利要求2所述的特异性结合分子，所述特异性结合分子具有互补决定区(CDRs) VLCDRl、VLCDR2、VLCDR3、VHCDRl、VHCDR2 和 VHCDR3，每个互补决定区各自具有如下所述的氨基酸序列，其中VLCDRl 为 KASENVVTYVSVLCDR2 为 GASNRYTVLCDR3 为 GQGYSYPYTVHCDRl 为 GYTFTNYWIGVHCDR2 为 DIYPG⑶YTNYNEKFKG VHCDR3 为 WGLGYYFDY 或与它们具有至少70%同一性的氨基酸序列。4.据权利要求1-3中任意一项所述的特异性结合分子，其中，所述特异性结合分子是抗体或该抗体的片段。5.据权利要求4所述的特异性结合分子，其中，所述抗体是单克隆抗体。6.据权利要求5所述的特异性结合分子，其中，所述单克隆抗体是人源化的。7.据权利要求4所述的特异性结合分子，其中，所述片段为Fab、F(ab’)2或Fv片段或scFv分子。8.据权利要求1-5和7中任意一项所述的特异性结合分子，所述特异性结合分子包括具有图11和/或图13所示的氨基酸序列的多肽。9.据权利要求1-5中任意一项所述的特异性结合分子，所述特异性结合分子是由2010年6月3日保藏于欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)，登记号为N0.10060301的杂交瘤细胞系产生的。10.种杂交瘤细胞系，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·达奎斯托，M·佩雷蒂，
申请(专利权)人：伦敦大学玛丽皇后和威斯特弗尔德学院，
类型：
国别省市：