番茄环斑病毒的RT-LAMP检测方法技术

本发明专利技术公开了番茄环斑病毒的RT-LAMP检测方法，通过样品RNA提取，RT-LAMP扩增，就可以得到检测结果，整个检测反应只需1h～2.5h，又由于LAMP呈瀑布式扩增，因此其扩增效率非常高，灵敏度是RT-PCR检测的100倍，且无需复杂的检测仪器和检测过程，操作简单，可现场实时检测，因此本发明专利技术是一种检测速度快、操作简单、检测结果判断容易和灵敏度高的番茄环斑病毒的RT-LAMP检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及番茄环斑病毒的检测技术，具体涉及番茄环斑病毒的RT-LAMP检测方法。
技术介绍
番爺环斑病毒(Jomato ring spot virus, ToRSV)属于5[豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的RNA病毒，为我国对外公布的禁止进境检疫性有害生物，其寄主范围广，据报道可侵染35科105属157种以上的植物。它是侵染百合、葡萄、苹果、玫瑰、唐菖蒲、水仙、大丽花、兰花番茄、菜豆、黄瓜和烟草等经济作物的重要致病病原。目前，国内外针对ToRSV的检测方法，包括鉴别寄主反应(生物学方法)、电镜观察、血清学试验和核酸杂交以及PCR检测等分子生物学手段，PCR检测复杂，检测慢至少要3.5 h，灵敏度较低，检测结果判断较难。由于番茄环斑病毒的症状变化多样，常有隐症现象，均给常 规诊断带来困难，甚至出现漏检，需要更加准确和灵敏的检测方法。环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermal amplification, LAMP)作为一种新颖的核酸扩增方法，同样具有检测速度快、操作简单和灵敏度高等优点；该技术依赖于能够识别靶本文档来自技高网...

【技术保护点】
番茄环斑病毒的RT?LAMP检测方法，其特征在于步骤如下：a、总RNA提取：检测样品经液氮处理后研碎成粉末状，用Trizol核酸提取试剂提取总RNA，得到样品总RNA，具体提取方法依Trizol核酸提取试剂的说明书进行；b、RT?LAMP扩增：20μL的RT?LAMP扩增反应体系为2×反应缓冲液10μL，浓度5?U/μL?的Bst?DNA聚合酶1.5μL，浓度5?U/μL?的AMV?RNA聚合酶1μL，样品总RNA1?μL，引物F3、B3、Loop1、Loop2、FIP和BIP，余量为ddH2O，该扩增反应体系中，引物F3和B3的终浓度各为0.2μM，引物Loop1和Loop2的终浓度各为0....

【技术特征摘要】
1.茄环斑病毒的RT-LAMP检测方法，其特征在于步骤如下: a、总RNA提取:检测样品经液氮处理后研碎成粉末状，用Trizol核酸提取试剂提取总RNA，得到样品总RNA，具体提取方法依Trizol核酸提取试剂的说明书进行； b、RT-LAMP扩增:20μ L的RT-LAMP扩增反应体系为2 X反应缓冲液10 μ L，浓度5 U/μ L的Bst DNA聚合酶1.5 μ L，浓度5 U/μ L的AMV RNA聚合酶I μ L，样品总RNAl μ L，弓丨物F3、Β3、LoopU Loop2、FIP和BIP，余量为ddH20，该扩增反应体系中，引物F3和B3的终浓度各为0.2 μ M，引物Loopl和Loop2的终浓度各为0.8 μ M，引物FIP和BIP的终浓度各为1.6μΜ,其中引物F3的核苷酸序列为cagggctcga...

【专利技术属性】
技术研发人员：张吉红，顾建锋，余澍琼，闻伟刚，
申请(专利权)人：宁波检验检疫科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：