对马铃薯Y病毒属具有抗性的南瓜属植物制造技术

本发明专利技术涉及一种南瓜属植物，特别是一种南瓜植物，该植物对马铃薯Y病毒属，如小西葫芦黄化花叶病毒（ZYMV）、西瓜花叶病毒（WMV）、番木瓜环斑病毒（PRSV）以及摩洛哥西瓜花叶病毒（MWMV）具有广谱抗性。还提供了通过标记辅助育种来选择一种具有广谱马铃薯Y病毒属抗性的南瓜植物的多种方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对马铃薯Y病毒属具有抗性的南瓜属植物本专利技术涉及对马铃薯Y病毒属具有抗性的新颖植物和所述植物的种子。本专利技术还涉及了制造这些植物和用于产生它们的种子的方法。本专利技术进一步涉及标记和它们在标记辅助育种中的用途。马铃薯Y病毒组（它的原型成员称为马铃薯Y病毒（PVY））是当前已识别的34个植物病毒组和家族中最大的（沃德和舒克拉，1991；国际病毒学32,269-296（Ward&Shukla,1991;Intervirology32,269-296））。这个组包含至少180个确定的和可能的成员（占所有已知的植物病毒的30%），这些成员在农业、畜牧业、园艺以及观赏作物中造成重大损失（沃德和舒克拉，1991；国际病毒学32,269-296）。南瓜栽培中的一个主要问题是出现了损害植物和果实的马铃薯Y病毒属。有至少四种最经常感染南瓜的马铃薯Y病毒属，即小西葫芦黄化花叶病毒（ZYMV）、西瓜花叶病毒（WMV）、番木瓜环斑病毒（PRSV）、摩洛哥西瓜花叶病毒（MWMV）。南瓜中的马铃薯Y病毒属疾病的症状包括花叶病、黄化、细长形叶子、发育迟缓以及果实和种子畸形。稳定的马铃薯Y病毒属抗性是南瓜育种者的关键驱动因素，因为多种病毒倾向于突变并且战胜现存的抗性基因。南瓜中迄今已知的唯一的稳定抗性已通过遗传修饰方法实现。在欧洲，南瓜种植者在这些“抗性”品种中日益看到马铃薯Y病毒属感染。因而，对方便并且经济上可持续的防止南瓜植物被马铃薯Y病毒属感染的策略的需要未被满足。本专利技术通过提供对总体上影响南瓜的不同的马铃薯Y病毒属具有稳定并且广泛的抗性的南瓜植物来解决这个需要。这种抗性是由已通过经典种间杂交和胚挽救引入到南瓜植物中的至少3个隐性遗传决定子提供。
技术实现思路
本专利技术涉及一种栽培的南瓜属植物，包含至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属，优选地对MWMV、PRSV、WMV以及ZYMV中的1个或多个的抗性的遗传决定子。在一个实施例中，所述遗传决定子是从中国南瓜（Cucurbitamoschata），优选地从中国南瓜尼日利亚变种（C.moschatavar.Nigeria）可获得的。在另一实施例中，根据任何前述实施例的植物包含所述至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属感染的抗性的遗传决定子。在另一实施例中，根据任何前述实施例的植物包含至少两个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属感染的抗性的遗传决定子。在另一实施例中，根据任何前述实施例的植物包含至少三个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属感染，优选地对ZYMV和MWMV感染的抗性的遗传决定子。在另一实施例中，本专利技术涉及一种根据任何前述实施例的植物，其中这些遗传决定子中的至少一个与西葫芦栽培品种（C.pepocv.）268NiW中所存在的相应遗传决定子互补，该西葫芦栽培品种268NiW的代表性种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，所述相应遗传决定子与标记位点ZN遗传连锁，该标记位点与马铃薯Y病毒属抗性性状，优选地与ZYMV和PRSV抗性性状共分离，并且可以在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段将其鉴定：正向引物SEQIDNO:1（5'AGGTTTCATGGGCTTTTAATGG3'）和反向引物SEQIDNO:2（5'CGTGAGCCTAAAACGGTTAATG3'），随后用抗性等位基因特异性探针：FAM-CACTTCCCAGCCCAAAT-MGB-NFQ（SEQIDNO:7）和/或易感等位基因特异性探针：VIC-CACTTTCCAGCCCAAAT-MGB-NFQ（SEQIDNO:8）进行检测；和/或这些遗传决定子中的至少两个与西葫芦栽培品种268NiW中所存在的相应遗传决定子互补，该西葫芦栽培品种268NiW的代表性种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，所述相应遗传决定子与标记位点W2遗传连锁，该标记位点与马铃薯Y病毒属抗性性状，优选地与一种MWMV抗性性状共分离，并且可以在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段将其鉴定：正向引物SEQIDNO:3（5'GGGCAAAGAAGATCTTGTCTAGAAAG3'）和反向引物SEQIDNO:4（5'GTTTTTGTGCAGTGTGCATCTGT3'），随后用抗性等位基因特异性探针：FAM-TCATTGCACCCAACATG-MGB-NFQ（SEQIDNO:9）和/或易感等位基因特异性探针：VIC-TCATTGCACTCAACATGG-MGB-NFQ（SEQIDNO:10）进行检测；和/或正向引物SEQIDNO:5（5'TTGTGTTTATATGTATGTGTGCGAG3'）和反向引物SEQIDNO:6（5'TTTCTAGATCTCAGTGTAAGAGAACACA3'），随后用抗性等位基因特异性探针：FAM-TTTGTTTGCTTGAGCTGG-MGB-NFQ（SEQIDNO:11）和/或易感等位基因特异性探针：VIC-TTTGTTCGATTGAGCTGG-MGB-NFQ（SEQIDNO:12）进行检测；和/或这些遗传决定子中的至少一个与西葫芦栽培品种268NiW中所存在的相应遗传决定子互补，该西葫芦栽培品种268NiW的代表性种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，所述相应遗传决定子与标记位点Ni+遗传连锁，该标记位点与马铃薯Y病毒属抗性性状，优选地与一种ZYMV抗性性状，更优选地与一种ZYMV病毒株Nivir抗性性状共分离，并且可以在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段将其鉴定：正向引物SEQIDNO:13（5'TTGCATGTTCCTTGGATGGGT3'）和反向引物SEQIDNO:14（5'GGCAACCTCTGTCCAATTTCTTTC3'），随后用抗性等位基因特异性探针：FAM-AGTTGCGACTTTCCA-MGB-NFQ（SEQIDNO:15）和/或易感等位基因特异性探针：TET-AGTTGCGACTTTTCATT-MGB-NFQ（SEQIDNO:16）进行检测。在另一实施例中，本专利技术涉及一种根据任何前述实施例的植物，其中该遗传决定子与西葫芦栽培品种268NiW中所存在的相应遗传决定子互补，该西葫芦栽培品种268NiW的代表性种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，所述相应遗传决定子与标记位点ZN遗传连锁，该标记位点与马铃薯Y病毒属抗性性状，优选地与一种ZYMV和PRSV抗性性状共分离，并且可以在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段在西葫芦栽培品种268NiW基因组中将其鉴定：正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测；和/或这些遗传决定子与西葫芦栽培品种268NiW中所存在的相应遗传决定子互补，该西葫芦栽培品种268NiW的代表性种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，所述相应遗传决定子与标记位点W1和W2遗传连锁，该标记位点与马铃薯Y病毒属抗性性状，优选地与一种MWMV抗性性状共分离，并且可以在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段在西葫芦栽培品种268NiW基因组中将其鉴定：正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.20 EP 11163208.91.一种用于检测在南瓜植物中能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子的试剂盒，其中所述试剂盒包括能够扩增与该遗传决定子连锁的DNA标记的PCR寡核苷酸引物对，并且其中所述DNA标记在PCR中用选自以下的所述PCR寡核苷酸引物对进行扩增：a)正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测；和/或b)正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10进行检测；和/或c)正向引物SEQIDNO:5和反向引物SEQIDNO:6，随后用SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12进行检测；和/或d)正向引物SEQIDNO:13和反向引物SEQIDNO:14，随后用SEQIDNO:15和/或SEQIDNO:16进行检测。2.一种DNA标记，其与能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子连锁并且在PCR中用选自以下的PCR寡核苷酸引物对进行扩增：a)正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测；和/或b)正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10进行检测；和/或c)正向引物SEQIDNO:5和反向引物SEQIDNO:6，随后用SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12进行检测；和/或d)正向引物SEQIDNO:13和反向引物SEQIDNO:14，随后用SEQIDNO:15和/或SEQIDNO:16进行检测。3.根据权利要求2的DNA标记中的任何一种的用途，所述用途为用于诊断性选择在南瓜中能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子。4.根据权利要求2的DNA标记中的任何一种的用途，所述用途为用于鉴定在植物中能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子的存在，和/或用于监测在南瓜中能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子的基因渗入。5.一种多核苷酸，其是在PCR中通过用选自以下的PCR寡核苷酸引物对扩增DNA片段而可获得的：a)正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测；和/或b)正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10进行检测；和/或c)正向引物SEQIDNO:5和反向引物SEQIDNO:6，随后用SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12进行检测；和/或d)正向引物SEQIDNO:13和反向引物SEQIDNO:14，随后用SEQIDNO:15和/或SEQIDNO:16进行检测，所述多核苷酸包含与能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子在统计上相关并因而在遗传上连锁的DNA标记，并且其中所述多核苷酸相应于在PCR中用相同的引物对从西葫芦栽培品种268NiW可获得的扩增产物，该西葫芦栽培品种268NiW的种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，条件是，对应的标记基因座仍存在于所述西葫芦栽培品种268NiW植物中，和/或被视为其等位基因。6.一种用于将至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子引入到缺乏所述遗传决定子的南瓜植物中的方法，所述方法包括：a)获得第一南瓜植物，所述第一南瓜植物包含至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子；b)使所述第一南瓜植物与第二南瓜植物杂交，其中所述第二南瓜植物缺乏所述等位基因；c)鉴定由该杂交产生的、展现出增加的对马铃薯Y病毒属的抗性并且包含至少一个与所述马铃薯Y病毒属抗性共分离的DNA标记的植物；d)任选地，分离所述植物；e)任选地，使所述植物与该第一或第二南瓜植物回交；其中i.该遗传决定子与标记基因座ZN在遗传上连锁，所述标记基因座ZN与ZYMV马铃薯Y病毒属抗性性状共分离，并且在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段而在所述植物的基因组中鉴定出来：正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测；和/或ii.该遗传决定子与标记基因座W1和/或W2在遗传上连锁，所述标记基因座W1和/或W2与MWMV马铃薯Y病毒属抗性性状共分离，并且在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段而在所述植物的基因组中鉴定出来：正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10进行检测；和/或正向引物SEQIDNO:5和反向引物SEQIDNO:6，随后用SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12进行检测；和/或iii.该遗传决定子与标记基因座Ni+在遗传上连锁，所述标记基因座Ni+与ZYMV马铃薯Y病毒属抗性性状共分离，并且在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段而在所述植物的基因组中鉴定出来：正向引物SEQIDNO:13和反向引物SEQIDNO:14，随后用SEQIDNO:15和/或SEQIDNO:16进行检测。7.根据权利要求6的方法，其中所述第一南瓜植物的所述至少一个遗传决定子是从中国南瓜的基因组可获得的。8.根据权利要求7的方法，其中所述第一南瓜植物的所述至少一个遗传决定子是从中国南瓜尼日利亚变种的基因组可获得的。9.一种用于获得包含至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子的南瓜植物的种子的方法，所述方法包括以下步骤：a)获得第一南瓜植物，所述第一南瓜植物包含至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子；b)使所述第一南瓜植物与第二南瓜植物杂交，其中所述第二南瓜植物缺乏所述遗传决定子；c)鉴定由该杂交产生的、展现出增加的对马铃薯Y病毒属的抗性并且包含至少一个与所述马铃薯Y病毒属抗性共分离的DNA标记的植物；和d)从所述杂交收获包含至少一个与所述马铃薯Y病毒属抗性共分离的DNA标记的后代种子；其中i.该遗传决定子与标记基因座ZN在遗传上连锁，所述标记基因座ZN与ZYMV马铃薯Y病毒属抗性性状共分离，并且在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段而在所述植物的基因组中鉴定出来：正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测；和/或ii.该遗传决定子与标记基因座W1和/或W2在遗传上连锁，所述标记基因座W1和/或W2与MWMV马铃薯Y病毒属抗性性状共分离，并且在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段而在所述植物的基因组中鉴定出来：正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10进行检测；和/或正向引物SEQIDNO:5和反向引物SEQIDNO:6，随后用SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12进行检测；和/或iii.该遗传决定子与标记基因座Ni+在遗传上连锁，所述标记基因座Ni+与ZYMV马铃薯Y病毒属抗性性状共分离，并且在PCR中通过用以下寡核苷酸引物对扩增DNA片段而在所述植物的基因组中鉴定出来：正向引物SEQIDNO:13和反向引物SEQIDNO:14，随后用SEQIDNO:15和/或SEQIDNO:16进行检测。10.根据权利要求9的方法，其中所述第一南瓜植物的所述至少一个遗传决定子是从中国南瓜的基因组可获得的。11.根据权利要求10的方法，其中所述第一南瓜植物的所述至少一个遗传决定子是从中国南瓜尼日利亚变种的基因组可获得的。12.一种用于产生展现出对马铃薯Y病毒属的抗性的南瓜植物的方法，所述方法包括以下步骤：a)选择包含至少一个能够指导或控制对马铃薯Y病毒属的抗性的遗传决定子的南瓜植物，其中所述遗传决定子是从西葫芦栽培品种268NiW的基因组中可获得的并且与至少一个标记基因座在遗传上连锁，所述西葫芦栽培品种268NiW的种子以登录号NCIMB41727保存在NCIMB，所述至少一个标记基因座与对马铃薯Y病毒属的抗性共分离，并且在PCR中通过包括以下的至少一个PCR寡核苷酸引物对鉴定出来：i.正向引物SEQIDNO:1和反向引物SEQIDNO:2，随后用SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:8进行检测，如果该标记基因座为ZN；和/或ii.正向引物SEQIDNO:3和反向引物SEQIDNO:4，随后用SEQIDNO:9和/或SEQIDNO:10进行检测，如果该标记基因座为W1；和/或iii.正向引物SEQIDNO:5和反向引物SEQIDNO:6，随后用SEQIDNO:11和/或SEQIDNO:12进行检测，如果该标记基因座为W2；和/或iv.正向引物SEQIDNO:13和反向引物SEQIDNO:14，随后用SEQIDNO:15和/或SEQIDNO:16进行检测，如...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·尼克拉斯，JL·尼科莱特，M·奥利弗，S·达南，
申请(专利权)人：先正达参股股份有限公司，
类型：
国别省市：