白斑综合征病毒检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种白斑综合征病毒检测试剂盒及检测方法。本发明专利技术的试剂盒结合了核酸快速提取、LAMP等温扩增以及核酸免疫层析试纸条检测各自的优势，使得整个检测过程无需昂贵的仪器设备；同时由于采用核酸免疫层析试纸条方法进行结果检测，提高了检测可靠性和结果易判断性。本试剂盒检测成本低、使用方便，对人和环境安全，可替代已有的相关检测方法。本发明专利技术的试剂盒可在野外生产现场和各级实验室使用，对加强白斑综合征病毒监测，及时发现并控制病毒传播、尽早发现并预防疫病大规模暴发流行等，具有推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测水产养殖中相关病毒的检测试剂盒及检测方法，尤其涉及检测白斑综合征病毒的检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
对虫下白斑综合征病毒(WSSV, white Spot Syndrome Virus)已成为养殖对虫下的主要病原，也是目前发现的基因组最大的动物病毒(基因组约290kD，双链环状)(Yang2001 ；VanHulten 2001a)。该病毒首先在台湾发现，然后迅速蔓延到东南亚其他国家，随后到了北美。它不仅能感染对虾，还能感染其他淡水及海水甲壳类，如螃蟹、螯虾等。养殖对虾被感染后，3 IOd内累积死亡率可达100%，给对虾养殖业造成了巨大的损失(黄健等1995a ；VanHuten 2001a)。WSSV是1993年中国对虾暴发性流行病的主要病毒病原，是国家法定报告的一类动物疫病。目前WSSV的主要检测手段包括:1.电镜检测法；2.TE染色法；3.病理切片法；4.抗体检测法；5.核酸探针杂交法；以及6.PCR检测法。电镜检测法可以直接观察到病毒的颗粒，但是检测过 程时间长，操作复杂，准确性低；TE染色和病理切片法都是在显微镜下对处理过的组织样本进行观察，灵敏度低，人为主观因素对检测结果有较大影响；抗体检测法直接检测病毒特异蛋白，核酸探针法可以直接检测病毒核酸，但这两种方法灵敏度不够理想，通常无法检测未发生病症的潜在病毒携带虾；PCR检测法是目前使用比较广泛的检测手段，但其需要专业的实验设备和专业的操作人员，无法实现WSSV的相对快速、准确检测，更无法实现病毒的现场快速检测，大大限制了 PCR检测方法在生产中的推广应用。有鉴于此，建立简单、快速、高灵敏的白斑综合征病毒检测方法，开发适于现场应用的白斑综合征病毒检测试剂盒就显得更为重要和紧迫。
技术实现思路
鉴于上述现有技术中存在的问题，本专利技术目的是提供一种用于检测白斑综合征病毒的快速检测方法及与其配套的检测试剂盒，以弥补现有技术的不足，使之适用于生产现场快速、准确、高灵敏度的检测白斑综合征病毒。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为:白斑综合征病毒检测试剂盒，其包括含有I至2对扩增引物的扩增反应液；扩增引物选自下组:IFIP:gcaagggctctacatcacatcataaatattcctagacaacacgtcttgSEQ ID NO:3IBIP:ccgtgcctcaatatatacccctaaatctttctactaagatttccaaccSEQ ID NO:42FIP:tgaggggtatatattgaggcacgaaaacacgtcttgtctgtacgSEQ ID NO:72BIP:gtagaccttgataatcacggttgcaaattatcctgacttgttccattgSEQ ID NO:83FIP:aggggtatatattgaggcacggaaatcttgtctgtacgattagtcgSEQ ID NO:113BIP:gtagaccttgataatcacggttgcaaattatcctgacttgttccattgSEQ ID NO:124FIP:tgacttgttccattggttctttctaaaattgataatcacggttgccaSEQ ID NO: 154BIP:atacagtataagcttttggggaacaaaatcttgtacttctaatgttagcgSEQ ID NO: 165FIP:tgaatgttgttccccaaaagcttataaaggaaatcttagtagaaagaaccaa SEQ ID NO:195BIP:ttgtcatagcgctaacattagaagtaaattgaacaaaatgagctggatSEQ ID NO:20 优选扩增反应液还含有选自下组的增效引物作: 1F3:gttattaggattcagtagttctgtSEQ ID NO:1 1B3:cctgacttgttccattggtSEQ ID NO:2 2F3:tcagtagttctgttattcctagaSEQ ID NO:5 2B3:tccccaaaagcttatactgtaSEQ ID NO:6 3F3:ctgttattcctagacaacacgSEQ ID NO:9 3B3:tccccaaaagcttatactgtaSEQ ID NO:10 4F3:aatatatacccctcagtagaccSEQ ID NO:13 4B3:ggatgcagaatcacctgtSEQ ID NO:14 5F3:tgccaaacaacaacggttSEQ ID NO:17 5B3:cccctgcaaatgaagtggSEQ ID NO:18 扩增反应液还含有选自下组的检测探针: IBD:BIOTIN-ctcgactaatcgtacagaSEQ ID NO:21 IFD:FITC-ccttgataatcacggttgccSEQ ID NO:22 2&3BD:BIOTIN-ggcaagggctctacatcacaSEQ ID NO:23 2&3FD:FITC-caaacaacaacggttggaaaSEQ ID NO:24 4BD:BIOTIN-gatttccaaccgttgttgttSEQ ID NO:25 4FD:FITC-acattcatttattgtcatagSEQ ID NO:26 5BD:BIOTIN-actgtatattattatcctgaSEQ ID NO:27 5FD:FITC-acaagaacaggtgattctgcSEQ ID NO:28 更优选还含有阳性对照品；阳性对照品的核苷酸序列为:acagttggct gctgctgctgctgttccttg attgactcca tttttagaat attgggttat taggattcagtagttctgtt attcctagacaacacgtctt gtctgtacga ttagtcgaga tgatgtgatg tagagcccttgcccgtgcct caatatatacccctcagtag accttgataa tcacggttgc caaacaacaa cggttggaaatcttagtaga aagaaccaatggaacaagtc aggataataa tatacagtat aagcttttgg ggaacaacattcatttattg tcatagcgctaacattagaa gtacaagaac aggtgattct gcatccagct cattttgttcaacccacttc atttgcaggggacaacactc ttctttcttg aaaaatatgg atgaagacac ttggaattcttcaataggcc ctggggcgttgctggaggag gacgcagaag aagaagaaga acagctgccg ttgaacgagtttatagtttc cagaagacaacataatttag ctgtaattgg acgaggagac ttcttgtaat gagagaaccacaaaattctt cttcccgtcttttctggtat本文档来自技高网...

【技术保护点】
白斑综合征病毒检测试剂盒，其特征是：包括含有扩增引物的扩增反应液；所述的扩增引物选自下组：1FIP：gcaagggctctacatcacatcataaatattcctagacaacacgtcttg?????????????SEQ?ID?NO:3，1BIP：ccgtgcctcaatatatacccctaaatctttctactaagatttccaacc?????????????SEQ?ID?NO:4；2FIP：tgaggggtatatattgaggcacgaaaacacgtcttgtctgtacg?????????????SEQ?ID?NO:7，2BIP：gtagaccttgataatcacggttgcaaattatcctgacttgttccattg?????????????SEQ?ID?NO:8；3FIP：aggggtatatattgaggcacggaaatcttgtctgtacgattagtcg???????????SEQ?ID?NO:11，3BIP：gtagaccttgataatcacggttgcaaattatcctgacttgttccattg?????????????SEQ?ID?NO:12；4FIP：tgacttgttccattggttctttctaaaattgataatcacggttgcca??????????????SEQ?ID?NO:15，4BIP：atacagtataagcttttggggaacaaaatcttgtacttctaatgttagcg???????????SEQ?ID?NO:16；5FIP?：tgaatgttgttccccaaaagcttataaaggaaatcttagtagaaagaaccaa????SEQ?ID?NO:19，5BIP：ttgtcatagcgctaacattagaagtaaattgaacaaaatgagctggat?????????SEQ?ID?NO:20。...

【技术特征摘要】
1.斑综合征病毒检测试剂盒，其特征是:包括含有扩增引物的扩增反应液；所述的扩增引物选自下组: IFIP:gcaagggctctacatcacatcataaatattcctagacaacacgtcttgSEQ ID NO:3， IBIP:ccgtgcctcaatatatacccctaaatctttctactaagatttccaaccSEQ ID NO:4 ； 2FIP:tgaggggtatatattgaggcacgaaaacacgtcttgtctgtacgSEQ ID NO:7, 2BIP:gtagaccttgataatcacggttgcaaattatcctgacttgttccattgSEQ ID NO:8 ； 3FIP:aggggtatatattgaggcacggaaatcttgtctgtacgattagtcgSEQ ID NO:11， 3BIP:gtagaccttgataatcacggttgcaaattatcctgacttgttccattgSEQ ID NO:12; 4FIP:tgacttgttccattggttctttctaaaattgataatcacggttgccaSEQ ID NO:15，4BIP:atacagtataagcttttggggaacaaaatcttgtacttctaatgttagcgSEQ ID NO:16;5FIP:tgaatgttgttccccaaaagcttataaaggaaatcttagtagaaagaaccaa SEQ ID NO:19， 5BIP:ttgtcatagcgctaacattagaagtaaattgaacaaaatgagctggatSEQ ID NO:20。2.据权利要求1所述的白斑综合征病毒检测试剂盒，其特征是:所述的扩增反应液还含有选自下组的检测探针: IBD:BIOTIN-ctcgactaatcgtacagaSEQ ID NO:21， IFD:FITC-ccttgataatcacggttgccSEQ ID NO:22 ； 2&3BD:BIOTIN-ggcaagggctctacatcacaSEQ ID NO:23， 2&3FD:FITC-caaacaacaacggttggaaaSEQ ID NO:24 ； 4BD:BIOTIN-gatttccaaccgttgttgttSEQ ID NO:25， 4FD:FITC-acattcatttattgtcatagSEQ ID NO:26 ； 5BD:BIOTIN-actgtatattattatcctgaSEQ ID NO:27， 5FD:FITC-acaagaacaggtgattctgcSEQ ID NO:28。3.据权利要求1所述的白斑综合征病毒检测试剂盒，其特征是:所述的扩增反应液还含有选自下组的增效引物: 1F3:gttattaggattcagtagttctgtSEQ ID NO:1, 1B3:cctgacttgttccattggtSEQ ID NO:2 ； 2F3:tcagtagttctgttattcctagaSEQ ID NO:5, 2B3:tccccaaaagcttatactgtaSEQ ID NO:6 ； 3F3:ctgttattcctagacaacacgSEQ ID NO:9， 3B3:tccccaaaagcttatactgtaSEQ ID NO:10 ； 4F3:aatatatacccctcagtagaccSEQ ID NO:13， 4B3:ggatgcagaatcacctgtSEQ ID NO:14 ； 5F3:tgccaaacaacaacggttSEQ ID NO:17， 5B3:cccctgcaaatgaagtggSEQ ID NO:18。4.据权利要求1至3任一权利要求所述的白斑综合征病毒检测试剂盒，其特征是:还含有阳性对照品；所述的阳性对照品的核苷酸序列为:acagttggct gctgctgctgctgttccttg attgactcca tttttagaat attgggttat taggattcagtagttctgtt attcctagacaacacgtctt gtctgtacga ttagt...

【专利技术属性】
技术研发人员：石坚，钱冬，徐锦余，
申请(专利权)人：杭州三合创新科技有限公司，宁波大学，
类型：发明
国别省市：