鉴别和定量口蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的一种方法技术

本发明专利技术提供了鉴别和定量口蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的一种方法，通过样品处理提取疫苗破乳后水相中口蹄疫病毒RNA，应用荧光定量PCR检测方法来扩增样品中不同血清型的口蹄疫病毒RNA，进行鉴别和定量检测，其中，O型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ?ID?NO：1~3所示，AsiaI型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ?ID?NO：4~6所示，A型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ?ID?NO：7~9所示。本发明专利技术的方法具有灵敏性高、稳定性高、特异性好、可以分别准确定量样品中不同型的抗原等特点；具有检测范围广的特点，在100～1010拷贝范围内具有良好的线性关系，检测范围可以达到10个数量级。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检验
，具体是ー种鉴别和定量ロ蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的检测方法。
技术介绍
ロ蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由ロ蹄疫病毒(FMDV)引起的一种严重危害偶蹄动物的疫病，被OIE列为A类传染病之首。ロ蹄疫病毒培养物中可以分离出不同密度的粒子，主要有四种:完全病毒(146S)、空衣壳(75S)、12S蛋白质亚单位(12S)、病毒感染相关成分(VIA抗原4.5S)。在动物免疫中，刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞有关的主要是完全病毒颗粒146S抗原,该抗原含有ロ蹄疫病毒所有的中和位点，是ロ蹄疫病毒的有效抗原成分,能刺激机体产生坚强的体液免疫和细胞免疫。ロ蹄疫疫苗中146S抗原的含量直接决定了疫苗的质量，因此在国外ロ蹄疫疫苗生产厂家中，ロ蹄疫146S抗原的检测是重要的一个环节，这些厂家一般通过层析的方法提纯ロ蹄疫病毒，并使用超速离心对146S抗原进行定量，根据定量的结果对病毒液稀释后做成146S的抗原含量为1 U g/mL 10 ii g/mL成品疫苗，该疫苗可产生良好的免疫效果。用蔗糖密度梯度离心測量法 对146S抗原定量是ー种标本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴别和定量口蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的一种方法，其特征在于，通过样品处理提取疫苗破乳后水相中口蹄疫病毒RNA，应用荧光定量PCR检测方法来扩增样品中不同血清型的口蹄疫病毒RNA，进行鉴别和定量检测，其中，O型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ?ID?NO：1~3所示，AsiaI型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ?ID?NO：4~6所示，A型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ?ID?NO：7~9所示。

【技术特征摘要】
1.别和定量ロ蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的ー种方法，其特征在于，通过样品处理提取疫苗破乳后水相中ロ蹄疫病毒RNA，应用荧光定量PCR检测方法来扩增样品中不同血清型的ロ蹄疫病毒RNA，进行鉴别和定量检测，其中，O型ロ蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID NO:r3所示，AsiaI型ロ蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQID NO:4 6所示，A型ロ蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID N0:7 9所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所有探针5’端标记的荧光基团都为FAM，3’端淬灭基团都为TAMAR。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在干，实时荧光定量PCR检测方法为:以所述ロ蹄疫病毒RNA为模版，在3个PCR反应管中分别加入不同型特异性引物和探针，进行RT-PCR扩增。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，使用TAKARA公司的ー步法RT-PCR试剂盒进行扩増。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，提取所述ロ蹄疫病毒RNA包括以下步骤: (1)取100体积份ISA206佐剂乳化的ロ蹄疫疫苗，放入分液漏斗中，加入10 12体积份分析纯正戊醇，充分振荡I分钟以上混匀； (2)将分液漏斗放入4°C冰箱，静置30分钟以上，可见油、水分离；分离出下层水相，其中含有ロ蹄疫抗原； (3)取水相，使用Invitrogen公司的TRIzol...

【专利技术属性】
技术研发人员：张翀宇，郭伟，刘国英，范秀丽，张贵刚，赵丽霞，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：