应用实时荧光定量PCR技术对猪瘟兔化弱毒疫苗株进行定量检测的方法技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，涉及一种应用实时荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行定量检测的方法。本发明专利技术通过从含有猪瘟病毒的组织或细胞培养液中提取RNA核酸，应用自行设计的引物和探针特异性检测并定量猪瘟病毒。本发明专利技术包括设计的特异性引物序列和荧光探针序列，以及与之配套的定量PCR反应体系和反应程序，及检测样品的结果判定方法。本发明专利技术并解决了传统检测猪瘟兔化弱毒疫苗株使用的活兔体定型热方法存在的各种不足，可以快速对猪瘟病毒进行检测和定量，用于猪瘟疫苗质量监控及合理化配苗等领域，并可为猪瘟病毒的早期快速诊断提供有力的工具，具有快速，准确、特异性好、灵敏度高的优点，可以进行定性、定量检测，具有很强的推广性和实用性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检验
，具体是一种应用实时荧光定量PCR技术对猪瘟兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus, HCLV)疫苗株进行定量检测的方法。
技术介绍
I猪瘟病毒(CSFV)的实验室检验技术国内对CSFV的传统诊断方法包括:免疫荧光试验、细胞分离培养试验、动物接种试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、血清学方法等。这些方法都存在自身明显的不足之处，很难对猪瘟病毒进行快速、灵敏的检测。2猪瘟病毒的疫苗生产过程中所用检验方法现况疫苗效价的高低是疫苗合格与否的关键指标，对HCLV疫苗的效价测定一直沿用兔体定型热反应法(兔热法)。但该法存在的突出不足是:不能准确定量；测毒结果易受兔体个体差异和天气条件影响；实验周期长、费时费力。由于不能准确的定量病毒，所以不能准确科学的进行疫苗成品的配制，结果就是疫苗产品质量不稳定，有效病毒含量高的批次浪费抗原，有效病毒含量低的批次起不到良好的疫苗保护效果。
技术实现思路
为了实现对猪瘟兔化弱毒疫苗株进行快速准确的定量检测，本专利技术提供了应用实时荧光定量PCR技术对猪瘟 兔化弱毒疫苗株进行定量检测的方法。本专利技术提供的本文档来自技高网...

【技术保护点】
应用实时荧光定量PCR技术对猪瘟兔化弱毒疫苗株进行定量检测的方法，其特征在于，采用Taqman探针法实时荧光定量PCR进行定量检测，上游引物序列如SEQ?ID?NO:1所示，下游引物序列如SEQ?ID?NO:2所示，Taqman荧光探针序列如SEQ?ID?NO:3所示。

【技术特征摘要】
1.用实时荧光定量PCR技术对猪瘟兔化弱毒疫苗株进行定量检测的方法，其特征在于，采用Taqman探针法实时荧光定量PCR进行定量检测，上游引物序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物序列如SEQ ID NO:2所示，Taqman突光探针序列如SEQ ID N0:3所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，Taqman荧光探针序列5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记为TAMRA。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)提取待测样品的RNA核酸； (2)配置定量PCR反应液； (3)将待测样品的核酸加入步骤(2)配置的反应液中，制得到反应体系； (4)配制标准品PCR反应液，将标准品按梯度稀释，每个稀释梯度液取液加入步骤(2)配置的反应液中，制得反应体系； (5)将配置的反应液置于定量PCR仪中，运行定量PCR检测反应程序； (6)扩增反应结束后，结合PCR所给出标准曲线计算待测样品中RNA模板拷...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐师军，张贵刚，刘国英，张领月，郭伟，范秀丽，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：