南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括2×反应缓冲液、BstDNA聚合酶液、内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物、外侧下游引物、钙黄绿素荧光染料，检测方法通过样品总RNA提取，RT-LAMP扩增，就可以得到检测结果，整个检测反应1.5h内即可完成，通过4条引物识别靶基因6段不同的序列，提高了检测的特异性，25μL体系中总RNA含量为2pg也能灵敏检测，其灵敏度比普通RT-PCR检测高10倍，且无需复杂的检测仪器和检测过程，反应结束后在自然光照条件下裸眼观察颜色变化，判定结果，不需进行后处理，避免了开盖污染，操作简单，可现场实时快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及南方菜豆花叶病毒的检测技术，具体涉及南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
南方菜豆花叶病毒(5bwiA<9_/7 bean mosaic virus, SBMV)是南方菜豆花叶病毒属(5b66 ota>W5.)的典型成员，主要分布在美洲和非洲的温热带地区,法国和亚洲的印度也有报道，该病毒主要通过豆科作物的种子进行远距离传播。目前检测南方菜豆花叶病毒的方法主要包括血清学检测、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和实时荧光RT-PCR检测技术等。血清学方法需要制备血清，较为繁琐，且检测周期长，并因南方菜豆花叶病毒存在不同株系易导致漏检现象。RT-PCR技术需对PCR产物进行开盖处理，易发生交叉污染，造成假阳性现象。实时荧光RT-PCR技术需要昂贵的检测设备，检测成本较高，不适合基层和小型实验室推广使用。环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermal amplification, LAMP)作为一种新颖的核酸扩增方法，同样具有检测速度快、操作简单和灵敏度高等优点；该技术依赖于能够识别靶序列上6个特异区域的引本文档来自技高网...

【技术保护点】
南方菜豆花叶病毒的RT?LAMP检测试剂盒，该检测试剂盒包括2×反应缓冲液，浓度8U/μL的Bst?DNA聚合酶液，浓度为20μM的内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物和外侧下游引物，钙黄绿素荧光染料，所述2×反应缓冲液与Bst?DNA聚合酶液、内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物、外侧下游引物、钙黄绿素荧光染料的体积比为12.5：1：2：2：0.25：0.25：1，其特征在于所述内侧上游引物的核苷酸序列为CGCCAACAGC?CGTTGTGAAA?TCGTTGGACA?GCTTGGCAAG?A，所述内侧下游引物的核苷酸序列为TGGTCCCGGC?GAGGCTTATA?AGCGTCCA...

【技术特征摘要】
1.方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测试剂盒，该检测试剂盒包括2X反应缓冲液，浓度8U/ μ L的Bst DNA聚合酶液，浓度为20 μ M的内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物和外侧下游引物，钙黄绿素荧光染料，所述2Χ反应缓冲液与ifei DNA聚合酶液、内侧上游引物、内侧下游引物、外侧上游引物、外侧下游引物、钙黄绿素荧光染料的体积比为12.5:1:2:2:0.25:0.25:1，其特征在于所述内侧上游引物的核苷酸序列为CGCCAACAGCCGTTGTGAAA TCGTTGGACA GCTTGGCAAG A，所述内侧下游引物的核苷酸序列为TGGTCCCGGCGAGGCTTATA AGCGTCCAGT ACTCACAGC,所述外侧上游引物的核苷酸序列为ACGGCCAATGCTATCACG，所述外侧下游引物的核苷酸序列为GCAGTGGGCT CTATCAGTTG。2.用权利要求1所述的南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭立新，段维军，徐颖，吴薇，陈先锋，
申请(专利权)人：宁波检验检疫科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：