用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，旨在提供一种用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒及应用。本发明专利技术针对病毒S区序列设计扩增引物和4条特异性探针：定量探针，对应A-H型的保守区，用来定量总DNA；C型探针，对应C型特有序列，用来检测HBV基因型C型；YVDD探针，对应YVDD（GTG）突变位点；YIDD探针，对应YIDD（ATT）突变位点。试剂盒反应体系包含由特异性引物和探针配制的检测混合液、Taq酶、阴性和阳性对照。本发明专利技术用于检测的整个过程小于3小时，效率高，成本低，灵敏度和准确度高，能有效监测乙肝患者病毒载量和服用核苷类药物的疗效。

【技术实现步骤摘要】

专利技术涉及生物
，具体涉及ー种こ型肝炎病毒核酸定量、分型和YMDD耐药突变四色荧光定量PCR检测试剂盒及其应用方法。
技术介绍
こ型肝炎病毒(Ifepatitis B virus, HBV)在全世界范围内的感染患者超过3亿5千万，是诱发慢性こ肝和肝癌的主要原因。我国更是病毒性肝炎的高发区，HBV感染率高达57.63%，其中，大约80%肝癌由こ肝引起，严重威胁着我国公众的生命健康，所以对肝炎的诊断产品的研究具有重要的社会意义。对人血清样本中HBV总DNA的定量检测，可用于こ型肝炎的临床辅助诊断，确定是否有HBV感染以及病毒载量；并可通过监测患者血清HBV DNA水平的变化，对抗病毒药物的疗效进行辅助观察和判断。HBV根据基因组序列可分为A-H共8种基因型，其中中国较常见的是B型和C型。在长江以南地区，以基因型B型为主，占55%，长江以北C型为主，占81.6%。由于Orito等发现HBV基本核心启动子(BCP)双突变在C型中明显比B型多见，也有研究认为C型HBV患者中DNA阳性率明显高于B型，且C型病毒感染者病毒低度也高于B型，B型感染者早与C型感染者10年发生HBeAg血清转本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有两种引物及四种探针，各引物或探针的名称、DNA序列和荧光标记分别为：上游引物：5’?GCACTTGTATTCCCATCCCATCAT?3’；nt645?662,?18bp；下游引物：5’?AGCAAAGCCCAAAAGACCCACAAT?3’；nt982?1005,?24bp,?antisense；定量探针5’?ROX?TCTGTACAACATCTTGAGTCCCTT?BHQ2?3’；nt768?791,?24bp；C型探针5’?CY5?TRAACCCTAATAAAACCAAACGTTGG?BHQ2?3’；nt836?86...

【技术特征摘要】
1.关于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有两种引物及四种探针，各引物或探针的名称、DNA序列和荧光标记分别为:上游引物:5’ -GCACTTGTATTCCCATCCCATCAT-3’ ；nt645-662, 18bp ； 下游引物:5，-AGCAAAGCCCAAAAGACCCACAAT-3，；nt982-1005, 24bp, antisense ；定量探针 5’ -R0X-TCTGTACAACATCTTGAGTCCCTT-BHQ2-3’ ；nt768-791, 24bp ；C 型探针 5’ -CY5-TRAACCCTAATAAAACCAAACGTTGG-BHQ2-3’ ；nt836-861, 26bp ；YVDD 探针 5，-VIC- CATCATCCACATARC-MGB-3，；nt751-765, 15bp, antisense ；YIDD 探针 5，-NED-CCACATCATCAATATA-MGB-3’ ；nt754-769, 16bp, antisense。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述各引物、探针与buffer、MgCl2、含dUTP的dNTPs装于一个容器内构成PCR检测混合液mix ;该试剂盒还包括Taq酶、UDG酶、阴性对照样品和阳性对照样品，其中阴性对照为确认HBV DNA阴性血清，阳性对照为含1.0E+06 IU/ml HBV DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈智，符芳芳，朱海红，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：