【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及草莓潜隐环斑病毒的检测技术，具体涉及草莓潜隐环斑病毒的RT-LAMP检测方法。
技术介绍
草莓潜隐环斑病毒virus,SLRSV)隶属于紅豆花叶病毒科线虫传多面体病毒属[1]，是蔷薇科果实类作物上的重要病害之一，也是国家质检总局发布的重要检疫性有害生物。SLRSV能侵染种子、种球、块茎和苗木等，病毒侵染植株后，主要表现为叶片褪绿、畸形、植株矮化、产量下降以及品质下降等现象，严重时可引起毁灭性灾害。目前SLRSV的检测方法主要有指示植物小叶嫁接法、血清学检测和分子生物学检测等。SLRSV的症状表现比较复杂，同种病毒在不同的指示植物上，症状变化比较大，而上述方法对于病毒种类的鉴定检测耗时长，灵敏度较低。环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermal amplification, LAMP)作为一种新颖的核酸扩增方法，同样具有检测速度快、操作简单和灵敏度高等优点；该技术依赖于能够识别靶序列上6个特异区域的引物和一种具解旋功能且呈瀑布式扩增的Bst DNA聚合酶，在等温条件下可高效、快速和特异地扩增靶序列。由于LAMP呈瀑布式扩增，因此...
【技术保护点】
草莓潜隐环斑病毒的RT?LAMP检测方法，其特征在于步骤如下：a、总RNA提取：检测样品经液氮处理后研碎成粉末状，用Trizol核酸提取试剂提取总RNA，得到样品总RNA；具体提取方法依Trizol核酸提取试剂的说明书进行；b、RT?LAMP扩增：20μL?RT?LAMP扩增反应体系为2×反应缓冲液10μL，浓度5?U/μL?的Bst?DNA聚合酶1.5μL，浓度5?U/μL?的AMV?RNA聚合酶1μL，样品总RNA1μL，引物F3、B3、Loop1、Loop2、FIP和BIP，余量为ddH2O，该扩增反应体系中，引物F3和B3的终浓度各为0.2μM，引物Loop1和Lo...
【技术特征摘要】
1.莓潜隐环斑病毒的RT-LAMP检测方法，其特征在于步骤如下: a、总RNA提取:检测样品经液氮处理后研碎成粉末状，用Trizol核酸提取试剂提取总RNA，得到样品总RNA ;具体提取方法依Trizol核酸提取试剂的说明书进行； b、RT-LAMP扩增:20μ L RT-LAMP扩增反应体系为2 X反应缓冲液10 μ L，浓度5 U/ μ L的Bst DNA聚合酶1.5 μ L，浓度5 U/μ L的AMV RNA聚合酶I μ L，样品总RNAl μ L，引物F3、Β3、LoopU Loop2、FIP和BIP，余量为ddH20，该扩增反应体系中，引物F3和B3的终浓度各为0.2 μ M，引物Loopl和Loop2的终浓度各为0.8 μ M，引物FIP和BIP的终浓度各为1.6 μ Μ,其中引物F3的核苷酸序列为gagaatcacc ...
【专利技术属性】
技术研发人员：张吉红，陈先锋，余澍琼，闻伟刚，
申请(专利权)人：宁波检验检疫科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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