糖苷水解酶的变体制造技术

本发明专利技术涉及糖苷水解酶的变体，具体地涉及亲代糖苷水解酶的变体，其在对应于SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至513的位置21、94、157、205、206、247、337、350、373、383、438、455、467和486的一个或多个位置包含取代，并任选地进一步在对应于SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至513的位置8、22、41、49、57、113、193、196、226、227、246、251、255、259、301、356、371、411和462的一个或多个位置包含取代，在对应于SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至513的位置8、22、41、49、57、113、193、196、226、227、246、251、255、259、301、356、371、411和462的一个或多个位置包含取代，其中所述的变体具有糖苷水解酶活性。本发明专利技术也涉及编码所述变体糖苷水解酶的核苷酸序列并涉及包含所述核苷酸序列的核酸构建体、载体和宿主细胞。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及糖苷水解酶的变体，其相对于它的亲代酶具有一种或多种改进的性质，编码所述变体的核酸，产生所述变体的方法和应用所述变体的方法。
技术介绍
纤维素是单糖葡萄糖通过beta-Ι，4_键共价连接的聚合物。许多微生物产生水解beta-连接的葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶(endoglucanase)、纤维素二糖水解酶(cellobiohydrolase)和糖苷水解酶。内切葡聚糖酶在随机的位点消化纤维素聚合物，打开它以被纤维素二糖水解酶攻击。纤维素二糖水解酶随后从纤维素聚合物的末端依次释放纤维二糖的分子。纤维二糖是葡萄糖的水溶性beta-1，4-连接的二聚体。糖苷水解酶将纤维二糖水解为葡萄糖。 纤维素的原料到乙醇的转化具有大量原料的简便的可用性、避免燃烧或填埋原料的需要性和乙醇燃料的清洁度的优点。将木材、农业残余物(agricultural residue)、草本作物(herbaceous crop)和城市固体废物(municipalsolid waste)作为乙醇生产的原料。这些材料主要由纤维素、半纤维素(hemicellulose)和木质素(Iignin)。一旦纤维素转化为本文档来自技高网...

【技术保护点】
亲代糖苷水解酶的分离的变体，其在对应于SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至513的位置21、94、157、205、206、247、337、350、373、383、438、455、467和486的一个或多个位置包含取代，并任选地进一步在对应于SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至513的位置8、22、41、49、57、113、193、196、226、227、246、251、255、259、301、356、371、411和462的一个或多个位置包含取代，其中所述的变体具有糖苷水解酶活性。

【技术特征摘要】
2003.08.25 US 60/497,8091.代糖苷水解酶的分离的变体，其在对应于SEQID NO:2的氨基酸I至513的位置21、94、157、205、206、247、337、350、373、383、438、455、467 和 486 的一个或多个位置包含取代，并任选地进一步在对应于SEQ ID N0:2的氨基酸I至513的位置8、22、41、49、57、113、193、196、226、227、246、251、255、259、301、356、371、411 和 462 的一个或多个位置包含取代，其中所述的变体具有糖苷水解酶活性。2.权利要求1的变体，其中所述亲代糖苷水解酶是(a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2的氨基酸I至513具有至少70%的同一性；或(b)由核苷酸序列编码的多肽，所述核苷酸序列在低严紧性条件下与SEQ ID NO:1的核苷酸52至1539或其互补链杂交。3.权利要求1-2中任一项的变体，其中所述亲代糖苷水解酶包含氨基酸序列，其与SEQID NO:2的氨基酸I至513具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的同一'I生。4.权利要求1-3中任一项的变体，其中所述亲代糖苷水解酶包含SEQID NO:2的氨基酸I至513 ;或由SEQ ID NO: 2的氨基酸I至513，或其具有糖苷水解酶活性的片段组成。5.权利要求1-4中任一项的变体，其中所述亲代糖苷水解酶由核苷酸序列编码，所述的核苷酸序列在低、中、中-高、高严紧性条件下与SEQ ID NO:1的核苷酸52至1539杂交。6.权利要求1的变体，其中所述亲代糖苷水解酶是野生型糖苷水解酶，具体为枝顶孢霉属、伞菌属、链格孢属、曲霉属、Botryospaeria、Chaetomidium、麦角属、旋孢腔菌属、Copr inopsi s、Coptotermes、Cryphonectr ia、黑耳属、键抱属、赤霉属、Holomast igotoides、腐质霉属、IE 菌属、Lentinula、Leptospaeria、Melanocarpus、脉抱菌属、青霉属、Phanerochaete、Poitrasia、Pseudotrichonympha、柱顶抱属、踩节菌属、嗜热子囊菌属、Thielavia、木霉属、长毛盘菌属、轮枝孢属、Volvariella或Xylaria糖苷水解酶；特别是里氏木霉(Trichoderma reesei)糖苷水解酶。7.权利要求1的变体，其在对应于SEQID NO:2的氨基酸I至513的选自下组的一个或多个位置的位置包含取代:21、94、157、205、206、247、337、350、373、383、438、455、467、`486、513、22、41、49、57、113、193、196、226、227、246、251、255、259、301、356、371、411、462 和`486。8.权利要求1的变体，其包含选自SEQID勵:2的氨基酸1至513的52卟、6945、694八、G94R、G94Q、K157R、E193K、S196P、S196F、G205R、H206Y、P227L、P227G、T2461、Y247C、D259N、R251K、...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨拉泰特，乔尔彻里，科尼沃德，保罗哈里斯，奥布里琼斯，琼伊，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，
类型：发明
国别省市：