本发明专利技术涉及一种真菌发酵生产海藻糖酶的培养基及方法。所述培养基的原料含有可溶性淀粉0.25-2w%，酸水解酪蛋白胨0.25-2w%，K+0.0002-0.0016mol/L，VB20.005-0.04w%，培养基初始pH=5.0-6.5。该方法通过将发酵种子液接种于所述培养基，250mL的三角瓶装液量为50mL，接种量15mL，于26℃，转速160r/min下培养。本发明专利技术的发酵方法具有发酵周期短；条件温和，易于控制；提供的用于扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基，具有海藻糖酶产率高，海藻糖酶活力高等优点，可广泛应用于化工、医药等领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及真菌的发酵培养基及工艺。更具体地涉及一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基及方法。
技术介绍
海藻糖由两个葡萄糖残基通过半缩醛羟基通过糖苷键结合而成，所以它是一 种非常稳定的非还原性双糖。海藻糖酶是一种催化海藻糖水解的酶，在工业和医学方面有重要作用。海藻糖是双糖，其比葡萄糖的分子量大，扩散的速度就比葡萄糖慢，因此，在海藻糖通过细胞膜进入细胞前，在血淋巴中保持较高的浓度。与葡萄糖相比，相同浓度的海藻糖更利于通过扩散作用分布到昆虫的所有细胞中。昆虫选择海藻糖而不是葡萄糖还有另外的一个原因是有利于释放肠道从食物中吸收的葡萄糖。因为葡萄糖从肠道的吸收主要依 靠于被动运输，如果血淋巴中葡萄糖的水平比较高，就会干扰葡萄糖的吸收。保持血淋巴中较低的葡萄糖浓度，有利于肠壁对葡萄糖的吸收。一旦血淋巴中的葡萄糖在脂肪体中被转变成海藻糖，其他细胞就可以很快水解海藻糖成为葡萄糖用于氧化分解提供能量。由此可见，昆虫选择海藻糖作为其血糖较葡萄糖和蔗糖具有更大的生理优势。扁座壳抱(Aschersoniaplacenta)是子囊菌门(Ascomycota)幾菌纲{Sordaro-mycetes)肉座菌目 Qfypocreales)麦角菌科 ijOlsvicipitscGse)座壳抱属(Aschersonia')的一个种，主要寄生在粉虱和介壳上，在南亚和东南亚等地方都有分布。扁座壳孢作为虫生真菌具有安全性好、效费比高、能够发挥持续控制效果种类多，代谢类型复杂，显著的流行潜力，容易大量生产等优点，而且没有化学杀虫剂的残留毒害，也不像Bt类农药必须经过口腔进入昆虫的肠道才能够发挥作用，是环境友好型生物农药发展的理想选择之一。通过对扁座壳孢发酵产物的研究具有重要的价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基及方法。本专利技术首先提供了一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基，所述培养基的原料含有可溶性淀粉0.25-2w%，酸水解酪蛋白胨0.25-2 w%，K+ 0. 0002-0. 0016mol/L,VB2O. 005-0. 04 w %，培养基初始 pH=5. 0-6. 5。更优选地，所述培养基的原料按重量分数计，含有可溶性淀粉0. 25w%,酸水解酪蛋白胨 0. 5 w%, K+ 0. 0004 mol/L, VB2O. 005 w %，培养基初始 pH=5. 5。其次，本专利技术还提供了一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的方法，所述方法包含以下步骤 Ca)将扁座壳孢接种种子培养基，制得发酵种子液； (b)将步骤(a)中制得的发酵种子液接种于所述的培养基中250mL的三角瓶装液量为50mL，接种量15mL，于26°C，转速160 r/min下培养。所述种子培养基的原料含有200g/L 土豆,葡萄糖20g/L,自然pH。本专利技术采用的座壳孢为扁座壳孢(何学友等，油茶黑胶粉虱及扁座壳孢对其自然控制作用，中国森林病虫，2011年7月)。采用本专利技术优化后的培养基，菌龄7d，发酵周期3d，发酵结果为扁座壳孢生产的海藻糖酶的酶活性在29U/mL以上。本专利技术的发酵方法有发酵周期短；条件温和，易于控制；提供的用于扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基，具有海藻糖酶产率高，海藻糖酶活力高等优点。附图说明 图1为葡萄糖标准曲线； 图2为不同碳源对产酶活性的影响； 图3为不同氮源对产酶活性的影响； 图4为不同维生素对产酶活性的影响； 图5为不同金属离子对产酶活性的影响； 图6为不同pH对产酶活性的影响。具体实施例方式本专利技术用下列实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术的保护范围并不限于下列实施例。实施例1 单因素实验确定培养基最优成分 (I)种子培养基配制 种子培养基土豆200g,葡萄糖20g,蒸懼水定容至IOOOmL,自然pH,分装于250mL的三角瓶，每个三角瓶含150mL。1.011\0^，灭菌20111111。(2)发酵种子的制作将扁座壳孢接种于土豆琼脂培养基上，于26°C下培养5d，待其产生孢子，即活化；将活化后的菌株用接种针将孢子粉接种至种子培养基上，26°C，转速160 r/min下培养24h，即为发酵液。(3)酶液的制备取步骤(2)中的发酵液在4°C下，5000 r/min离心，15min，得上清液即为粗酶液，待用。按酶活性测定在波长550nm处测定吸光值。换算成酶活单位U/mL。(4)海藻糖酶酶活测定0. 4mL发酵上清液加入0. 4mL海藻糖，37°C水浴30min，加A ImL DNS (浓度为0. 025 mol/L，下同)试剂终止反应，沸水浴5min后冷却，定容至5mL，在波长550nm下测其紫外吸光度，计算出产生的葡萄糖的含量。对照组则取0. 4mL发酵上清液，加入ImL DNS试剂、0. 4mL海藻糖直接沸水浴5min。酶活力(U/g或U/mL)=AXKXVXn/(tXm) (A为样品的吸光度；K为吸光常数；V为反应试剂的总体积；n为酶液的稀释倍数；t为反应时间；m为酶液质量或体积，g或mL)。(5)标准曲线的制作配制葡萄糖标准溶液(Sigma) 10. 00mg/L ;吸取葡萄糖标准溶液，0.1 mL、0. 2 mL、0. 3 mL、0. 4 mL、0. 5 mL、0. 6 mL、0. 7 mL用蒸懼水定容至 10 mL,配成0.1(T0. 70 mg/L葡萄糖标准溶液；取不同溶度的葡萄糖标准溶液0. 4 mL，加入0. 4 mL蒸馏水和I mLDNS试剂,振荡,沸水浴加热5min,冷却至室温,用蒸懼水定容至5 mL,于波长550nm下读取OD值，蒸馏水做空白对照。以吸光值为纵坐标，标准溶液为横坐标，绘制标准曲线，结果见图1。(6)不同碳源、氮源、维生素、金属离子、pH对产海藻糖酶的影响 (a)碳源对酶产量的影响，为了确定不同碳源对扁座壳孢产生海藻糖酶的影响，在含有Ig/L KC1,1 g/L KH2PO4,0.5 g/LMgS04，5g/L 蛋白胨，5g/L 酵母浸粉，pH6. 0 的培养基中分别添加1%葡萄糖、鹿糖、麦芽糖、果糖、L-阿拉伯糖、L-山梨糖、可溶性淀粉，0.1MPa^菌20min (下同),接入3mL的扁座壳孢菌液,在26°C、160r/min的摇床中培养,第3天检测发酵液中海藻糖酶活性，以不加碳源的为对照。结果见图2。 (b)氮源对产酶的影响，为了确定不同氮源对扁座壳孢产生海藻糖酶的影响，在含有I g/L KC1,1 g/L KH2PO4,0.5 g/LMgS04，10g/L可溶性淀粉，pH6. 0的培养基中分别添加1%酵母浸膏、酵母浸粉、胰蛋白胨、NaN03、(NH4)2HPO4, (NH4)2SO4、酸水解酪蛋白胨、KNO3,灭菌，接入3mL的扁座壳孢菌液，在26°C、160r/min的摇床中培养，第3天检测发酵液中海藻糖酶活，不加氮源的为对照。结果见图3。(C)维生素对酶产量的影响，为了确定不同维生素对扁座壳孢产生海藻糖酶的影响，在含有 I g/L KC1,1 g/L KH2PO4,0.5 g/LMgS04，5g/L 蛋白胨，5g/L 酵母浸粉，10g/L可溶性淀粉，pH6. 0的培养基中分别添加0. 01% VB1JB2JBpVe，灭菌，接入3mL的扁本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基，其特征在于，所述培养基的原料含有可溶性淀粉0.25?2w%，酸水解酪蛋白胨0.25?2?w%，K+?0.0002?0.0016mol/L，VB20.005?0.04?w?%，培养基初始pH=5.0?6.5。
【技术特征摘要】
1.一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基，其特征在于，所述培养基的原料含有可溶性淀粉 O. 25-2w%，酸水解酪蛋白胨 O. 25-2 w%, K. O. 0002-0. 0016mol/L, VB2O. 005-0. 04 w %，培养基初始pH=5. 0-6. 5。2.根据权利要求1所述的一种扁座壳孢发酵生产海藻糖酶的培养基，其特征在于， 所述培养基的原料按重量分数计，含有可溶性淀粉O. 25w%,酸水解酪蛋白胨O. 5 w%, K+O.0004 mol/L, ...
【专利技术属性】
技术研发人员：邱君志，苏礼超，李小霞，涂洁，宋飞飞，邱云锋，郭庆丰，何肖云，毛丽慧，张伟，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：
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