本发明专利技术提供了一种解淀粉芽孢杆菌及其在玉米大斑病生防中的应用。所述解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA含有如SEQ I D NO:1所示的序列。一种优选的解淀粉芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11488。本发明专利技术提供的应用为利用所述的解淀粉芽孢杆菌抑制玉米大斑病菌。所述解淀粉芽孢杆菌为玉米大斑病的生防提供了具有强拮抗作用并易于定植的新型微生物。所述解淀粉芽孢杆菌在玉米大斑病生防中的应用，提供了一种高效稳定的玉米大斑病生防方法，其利用了所述解淀粉芽孢杆菌在玉米叶片上易于定植且对玉米大斑病菌具有强拮抗作用的特点，能够更好地满足农业生产中防治玉米大斑病的要求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其应用，尤其涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其在 玉米大斑病生防中的应用。
技术介绍
玉米大斑病是大斑刚毛座腔菌（Setosphaeriaturcica)侵染引起的一种严重的 叶枯性病害，造成玉米叶片大面积坏死，影响光合作用，导致玉米减产。近几年来，由于生产 中缺乏相应的抗大斑病种质资源，且大斑病菌生理小种的变异速度较快，因此，玉米大斑病 在我国东北春玉米区和黄淮海夏玉米区呈明显加重趋势。目前，针对玉米大斑病主要采用 种植抗病品种、化学防治等方法。然而，由于玉米大斑病菌的抗药性以及化学防治对环境污 染严重等问题，开展玉米大斑病的生物防治研究具有重大意义。 目前，已经筛选到一些对玉米大斑病菌具有生防作用的微生物。 中国专利申请CN101698828A公开了 一种铜绿假单胞菌D10，Pseudomonas aeruginosaD10,保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M209104。在牛肉 膏蛋白胨培养基上菌落呈棕色，圆形，有光泽，湿润，边缘整齐，菌落直径〇. 2~0. 5cm，菌体 成短杆状，无芽孢。所述铜绿假单胞菌D10抑菌谱广，可抑制玉米大、小斑病，对玉米大斑病 菌、玉米小斑病菌、玉米弯孢叶斑病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌和香蕉 枯萎病菌也均有较强的拮抗作用。 中国专利申请CN101698829A公开了一种枯草芽抱杆菌A16，Bacillussubtilis A16,保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M209105。该枯草芽孢杆菌A16 在牛肉膏蛋白胨培养基上菌落呈乳白色，形状不规则，无光泽，不湿润，边缘不整齐，菌落直 径0. 5~lcm，表面有皱褶，菌体成直杆状，芽孢呈椭圆形。该枯草芽孢杆菌A16抑菌谱广，可 抑制玉米大、小斑病，对玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、玉米弯孢叶斑病菌、棉花黄萎病菌、 小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌和香蕉枯萎病菌也均有较强的拮抗作用。 尽管已经筛选到一些对玉米大斑病菌具有生防作用的微生物，但还远远不够。一 方面，生防中拮抗微生物的多样化使用有利于防止病菌产生抗性，所以对病菌具有拮抗作 用的微生物的种类多多益善；另一方面，现有的能够抑制玉米大斑病菌的微生物的拮抗作 用还不够理想，需要筛选定植能力和拮抗作用更强的微生物，以使生物防治方法能够更好 地满足农业生产中防治玉米大斑病的要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型微生物，其对玉米大斑病具有强拮抗作用并易于定 植。 本专利技术的另一个目的是提供上述微生物在玉米大斑病生防中的应用，以显著提升 玉米大斑病生防效果。 本专利技术的再一个目的是提供一种生防制剂，其制备工艺简单，且可以显著提升玉 米大斑病生防效果。 本专利技术提供的一种解淀粉芽孢杆菌的16SrDNA含有如SEQIDNO: 1所示的序列。 根据本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌，优选地，所述解淀粉芽孢杆菌保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo. 11488。 本专利技术提供的一种解淀粉芽孢杆菌在玉米大斑病生防中的应用为，利用以上所述 的解淀粉芽孢杆菌抑制玉米大斑病菌。 根据本专利技术提供的所述应用，优选地，将含有所述解淀粉芽孢杆菌的菌剂施于玉 米叶片上，使所述解淀粉芽孢杆菌在玉米叶片上定植，抑制玉米大斑病菌。 根据本专利技术的所述应用，优选地，将含有所述解淀粉芽孢杆菌的菌剂施于玉米植 株上的时期为六叶期以后。 根据本专利技术的所述应用，优选地，所述菌剂为所述解淀粉芽孢杆菌与含有助悬剂 的无菌水配成的悬浮液。 根据本专利技术的所述应用，优选地，所述无菌水中的助悬剂的质量浓度为0.02~ 0. 1%，所述悬浮液中的解淀粉芽孢杆菌的浓度为1〇8~10 个/毫升。 根据本专利技术的所述应用，优选地，将含有所述解淀粉芽孢杆菌的菌剂施于玉米植 株上的方法为，将含有所述解淀粉芽孢杆菌的菌剂制成解淀粉芽孢杆菌的浓度为1〇 7~109 个/毫升的喷液进行喷雾。 根据本专利技术的所述应用，优选地，所述喷液的喷施量为5~10升/亩。 本专利技术还涉及一种生防制剂，即为本专利技术的上述应用中的所述悬浮液。 本专利技术的解淀粉芽孢杆菌对玉米大斑病菌具有强拮抗作用并易于定植。本专利技术利 用解淀粉芽孢杆菌对玉米大斑病进行生防，是一种高效稳定的玉米大斑病生防方法，其利 用了所述解淀粉芽孢杆菌在玉米叶片上易于定植且对玉米大斑病菌具有强拮抗作用的特 点，能够更好地满足农业生产中防治玉米大斑病的要求。【附图说明】 图1-U1-2和1-3分别为所述解淀粉芽孢杆菌的菌落以及油镜和电镜下的菌体形 态； 图2为解淀粉芽孢杆菌D3的16SrDNA片段的琼脂糖凝胶电泳图； 图3为解淀粉芽孢杆菌D3的16SrDNA系统发育树； 图4为玉米大斑病菌和解淀粉芽孢杆菌D3对峙培养结果； 图5为用于检验解淀粉芽孢杆菌D3对玉米大斑病生防作用的试验中对照和处理 条件下玉米大斑病菌菌落形态。【具体实施方式】 下面结合附图以及具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护范围并 不限于此。 本专利技术所述的"生防"是植物保护领域的常用术语，S卩，"生物防治"的简称。 本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌在没有特别说明的情况下，可以为营养体，也可以 为芽孢。 本专利技术提及的"D3"为本专利技术的解淀粉芽孢杆菌在研发过程的代号，为了表述方 便，本专利技术继续沿用。 〈解淀粉芽孢杆菌〉 本专利技术提供的一种解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA含有如SEQ I D N0:1所示的序列。 本专利技术提供的一种解淀粉芽孢杆菌，是从河南新乡的玉米大斑病发生田的玉米叶 片表面分离、筛选和培养而得的菌株，其对于玉米大斑病具有稳定而显著的拮抗效果，经微 生物学形态分类与分子鉴定，属于解淀粉芽孢杆菌。 所述解淀粉芽孢杆菌在LB培养基平板上，30°C，培养24小时。菌落呈淡黄色不透 明，表面粗糙，有隆起，边缘不规则。显微观察菌体呈杆状，两端钝圆，大小为长1. 5-1. 7μm， 宽0.4-0. 6μm。图1-1、1-2和1-3分别为所述解淀粉芽孢杆菌的菌落以及油镜和电镜下的 菌体形态。 所述解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA的扩增方法为：挑取少量单菌落，置于PCR管中， 加入20 μ L去离子水，95°C处理10分钟，冷却后作为PCR模板，进行PCR扩增。 扩增所用引物为细菌16SrDNA序列通用引物27F和1492R。正向引物为如SEQID NO: 2所示的引物（27F)，反向引物为如SEQIDNO: 3所示的引物（1492R)。 PCR扩增体系为20μL:模板1μL，正向引物和反向引物各1μL，Taq酶(λ3μL， Buffer2yL，dNTP1.2yL，其余用dd水补足。扩增条件：94°C3min，94°C30s，55°C30s， 72°C90s，30 循环，72°C5min。 PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像参见附图2所示。经序列分析扩增 所得的16SrDNA序列长度约为1500bp。将所述16SrDNA序列进行测序并进行BLAST比 对分析，结果显示所述16SrDNA与Bacillusamyloliquefaciens的相似度最高，达到了 99%〇 将所述16SrDNA序列在NCBI数据本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的16S rDNA含有如SEQ I D NO:1所示的序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘文德，田雪亮，王国良，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，河南科技学院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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