本发明专利技术属于微生物菌剂的制作，特别是指解淀粉芽孢杆菌及其在麻山药根腐病防治中的应用。是将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12821接种于含有碳源、氮源、及必要营养元素的无菌发酵培养基，进行通气发酵制成含有上述活菌的液态微生物菌剂。本发明专利技术填补了目前尚无解淀粉芽孢杆菌用于麻山药根腐病防治的技术空白，具有所制备的解淀粉芽孢杆菌菌剂的各项技术指标符合GB20287‑2006的要求，对麻山药根腐病防治效果及增产效果好且麻山药条型顺直、粗大、颜色白、畸形率低等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物菌剂的制作，特别是指解淀粉芽孢杆菌及其在麻山药根腐病防治中的应用。
技术介绍
麻山药(DicscoreaoppositeThunb)属薯蓣科多年生草质藤本植物，根茎营养丰富，兼有食、药功能，具有健脾、补肺、益精等功效。现代研究表明，麻山药中的多糖具有降低血糖、提高及调节免疫、防止高血脂、调整胃肠、防止衰老的功能，麻山药中含有的尿囊素有抗刺激物、麻醉镇静、促进上皮生长、消炎抑菌等作用。因此麻山药日益受到国内外消费者的欢迎。近年来我国麻山药出口创汇的态势很好，国内市场的价格也稳步提升，栽培山药的经济效益是种植小麦、玉米的8-l0倍，栽培面积逐年扩大，仅河北省沿潴龙河两岸有近万公顷的栽培面积，已走上产业化发展道路，成为当地农民的主要经济收入来源。但随着种植面积的扩大和不平衡施肥现象日益严重，化肥的过量使用，使土壤状况持续下降，土壤微生物环境遭到破坏，在种植过程中出现大量问题，病虫害时有发生，重茬现象严重，经常会造成减产或绝收。根腐病是麻山药重茬病的一种，是危害麻山药生产最严重的病害之一。目前生产上通常采用轮作和化学杀菌剂消毒种薯的方法减少根腐病的发生，但由于土传病害病原菌的寄主范围广，有时轮作难以奏效。而农药使用不仅可造成对人体健康的直接损害，也造成对环境的污染，长期使用后病原菌容易产生抗药性，增加防治难度，形成恶性循环。随着生物技术的发展，人们开始认识到施用微生物菌剂是改善土壤环境，从根本上解决作物重茬问题的有效措施。解淀粉芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，其与枯草芽孢杆菌亲缘性很高，在其自身的生长过程中可以产生一系列的代谢产物。这些代谢产物使得解淀粉芽孢杆菌可广泛的抑制真菌和细菌的活性。一般生长速度快，是植物根际土壤和植物体表体内的重要微生物，抑菌谱广，对于很多植物病菌均有较好的抑菌作用。申请人检索到的背景文献包括：1、《北方园艺》2011(01):159-160中公开了10亿芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂”对麻山药根腐病的有效剂量为15kg/hm2,平均防治效果70.34％,显著高于对照药剂敌克松的防效(20.26％),说明其对麻山药吸收根具有显著刺激生长作用，田间相对防效最高可达88.65％。2、公开号为CN102382810A的专利文献中公开了预防大棚黄瓜重茬病益生菌菌剂的制备方法，其主要技术解决方案是将益生菌剂的生产菌种接种于含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中进行发酵，发酵过程是在温度为30-37℃、pH值7.2-7.6的条件下进行的好氧发酵，生产菌种选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、贝雷丝孢酵母、淡紫拟青霉、细黄链霉菌、多粘芽孢杆菌和金龟子绿僵菌的等质量混合物，对发酵终产物吸附、固定化于草炭上制成益生菌菌剂。可有效的预防黄瓜霉菌病、烂根病和黄萎病。3、公开号为CN105907683A的专利文献中公开了解淀粉芽孢杆菌cd5bc对辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄黑星病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病、蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病的病原菌的抑菌率均高达70％以上，对蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病病原菌的抑菌率高达100％。申请人认为，不同作物易染病菌不一样，且不同菌株对同一种病菌的防治效果也存在较大区别。目前将解淀粉芽孢杆菌用于麻山药根腐病防治未见相关文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供解淀粉芽孢杆菌及其在麻山药根腐病防治中的应用。本专利技术的整体技术构思是：一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)CGMCCNo.12821。本专利技术中的菌种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)CGMCCNo.12821系申请人从河北省保定市定兴县麻山药根际土壤中分离取得，申请人已于2016年8月8日提交位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，该保藏单位简称CGMCC。该菌种的形态特征及生理生化特征如下：本专利技术中的菌种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)CGMCCNo.12821为革兰氏阳性，圆形光滑菌落，湿润，边缘整齐，呈微黄色,芽孢中生，不膨胀，椭圆，在葡萄糖培养基上产酸、产气V.P反应阳性，能水解淀粉，厌氧条件下和3℃不生长，在7％氯化钠中生长，G+C含量为43.5-44.9％。菌体大小为0.7-0.8×2-3μm。上述菌种具有高效的解磷、解钾能力，用四苯硼钠法和钼锑抗比色法测定解钾、解磷能力，结果分别是解钾能力为6.13mg/L、解有机磷能力为7.95mg/L、解无机磷能力为82.79mg/L；接种麻山药根部30天后，经测定，解淀粉芽孢杆菌数量有10-100倍的增加，说明该菌株有良好的定植能力。解淀粉芽孢杆菌在麻山药根腐病防治中的应用，是将解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.12821接种于含有碳源、氮源、及必要营养元素的无菌发酵培养基，进行通气发酵制成含有上述活菌的液态微生物菌剂。本专利技术中的具体
技术实现思路
还有：所述的发酵培养基由如下质量百分数的组分组成：淀粉0.3％-1.5％；豆饼粉0.03％-0.1％；碳酸钙0.05％-0.2％；蔗糖0.08％-0.5％；硫酸铵0.01％-0.08％；三水合磷酸氢二钾0.08％-0.5％；七水合硫酸镁0.08％-0.5％；六水合三氯化铁0.008％-0.05％；酵母膏0.03％-0.15％；氢氧化钾0.01％-0.1％；泡敌0.005％-0.02％；余量为自来水；pH＝7.2-7.4；通气发酵的工艺条件如下：发酵罐容积10吨，装量60％-80％。按照体积比为10％-15％的接种量接种，发酵过程中温度为25-32℃，压力为0.03-0.05MPa；发酵过程中通风量为：0-4小时为200-250M3/hr，4-8小时为320-360M3/hr，8-12小时为420-470M3/hr，12-20小时为520-560M3/hr，20小时后为600-630M3/hr；发酵4-8小时后搅拌，当发酵液中不低于95％的营养体形成芽孢且有效活菌不低于80亿/mL时，作为发酵终点,质检后包装入库。为缩短发酵周期，优选且较为常见的技术方案是，所述的解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.12821在接入发酵培养基前经过扩大培养。更为优选的技术方案是，所述的扩大培养包括试管斜面菌种的制备、克氏瓶斜面菌种的制备及种子液的制备。所述的斜面菌种的制备是将解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.12821中接种于无菌的试管斜面菌种培养基经培养制成试管斜面菌种；试管斜面菌种的培养基由如下质量的原料组成：蔗糖5-15克；三水合磷酸氢二钾0.2-1.0克；七水合硫酸镁0.1-0.5克；氯化钠0.1-0.5克；碳酸钙0.5-3克；酵母膏0.1-1.0克；琼脂15-22克；水1000毫升；pH＝7.2；试管斜面菌种的培养条件是：温度为25-32℃，培养周期2-3天。所述的克氏瓶斜面菌种的制备是将试管斜面菌种接种于无菌的克氏瓶斜面菌种培养基经培养制成克氏瓶斜面菌种，克氏瓶斜面菌种培养基由如下质量的原料组成：葡萄糖0.5-2克；蛋白胨0.5-2克；三水合磷酸氢二钾0.5-2克；硫酸铵0.1-0.5克；酵母膏0.3-1.5克；七水合硫酸镁0.1-0.5克；琼脂15-22克；水1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.12821。
【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)CGMCCNo.12821。2.解淀粉芽孢杆菌在麻山药根腐病防治中的应用，其特征在于是将解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.12821接种于含有碳源、氮源、及必要营养元素的无菌发酵培养基，进行通气发酵制成含有上述活菌的液态微生物菌剂。3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌在麻山药根腐病防治中的应用，其特征在于所述的发酵培养基由如下质量百分数的组分组成：淀粉0.3％-1.5％；豆饼粉0.03％-0.1％；碳酸钙0.05％-0.2％；蔗糖0.08％-0.5％；硫酸铵0.01％-0.08％；三水合磷酸氢二钾0.08％-0.5％；七水合硫酸镁0.08％-0.5％；六水合三氯化铁0.008％-0.05％；酵母膏0.03％-0.15％；氢氧化钾0.01％-0.1％；泡敌0.005％-0.02％；余量为自来水；pH＝7.2-7.4；通气发酵的工艺条件如下：发酵罐容积10吨，装量60％-80％，按照体积比为10％-15％的接种量接种，发酵过程中温度为25-32℃，压力为0.03-0.05MPa；发酵过程中通风量为：0-4小时为200-250M3/hr，4-8小时为320-360M3/hr，8-12小时为420-470M3/hr，12-20小时为520-560M3/hr，20小时后为600-630M3/hr；发酵4-8小时后搅拌，当发酵液中不低于95％的营养体形成芽孢且有效活菌不低于80亿/mL时，作为发酵终点。4.根据权利要求2或3中任一项所述的解淀粉芽孢杆菌在麻山药根腐病防治中的应用，其特征在于所述的解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.12821在接入发酵培养基前经过扩大培养。5.根据权利要求4所述的解淀粉芽孢杆菌在麻山药根腐病防治中的应用，其特征在于所述的扩大培养包括试管斜面菌种的制备、克氏瓶斜面菌种的制备及种子液的制备。6.根据权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌在麻山药根腐病防治中的应用，其特征在于所述的斜面菌种的制备是将解淀粉芽孢杆菌CGMCCNo.12821中接种于无菌的试管斜面菌种培养基经培养制成试管斜面菌种；试管斜面菌种的培养基由如下质量的原料组...
【专利技术属性】
技术研发人员：章淑艳，李军，韩韬，康捷，
申请(专利权)人：河北省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：河北;13
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