使用光的核酸的扩增抑制方法和高灵敏度的选择性核酸扩增方法技术

本发明专利技术提供在核酸样品中，检测野生型核酸组中微量混杂的突变型核酸时，快速而简便、且兼具高特异性和灵敏度的方法。在本发明专利技术方法中，使具有靶位点的核酸、与包含具有与靶位点互补的序列的光连接性核酸类的发夹探针共存，通过光照射使该具有靶位点的核酸与该发夹探针进行光连接，抑制由核酸扩增法引起的包含靶位点的检测区的扩增。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用包含光连接性核酸类的发夹探针(clamp probe)选择性地检测例如野生型核酸中混杂的突变型核酸的方法和试剂盒、以及具有350 380nm范围的波长的光照射功能的核酸扩增装置。
技术介绍
人基因组序列解读完毕后，将所解读的基因信息有效用于诊断等医疗领域的活动进行活跃。解读基因组序列之后，接下来所关注的是基因表达模式分析或基因中的单碱基替换(一塩基置換)(SNPs)的分析等。研究在各种条件下表达的基因的表达量或基因突变，由此基因的功能或基因与疾病或药物感受性的关联日益明朗，因此与所累积的基因有关的信息不仅被用于疾病的诊断，还被用于治疗方法的选择。其中，单核苷酸多态性(一塩基多型)或突变成为疾病诊断或风险判定等基因检查中的重要目标，在涉及糖尿病、风湿病、恶性肿瘤、精神疾病、心脏病等多个方面的领域应用。作为该单碱基替换的检测方法，迄今为止开发了各种方法。具体而言，作为快速且高通量地进行分析的方法，可以列举:Invader法、SniPer法、TaqMan PCR法、杂交探针法、SNPIT法、焦磷酸微测序法(Pyrominisequencing法)、变性高效液相色谱(DH本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.10 JP 2010-2030541.使具有靶位点的核酸、与包含具有与靶位点互补的序列的光连接性核酸类的发夹探针共存，通过光照射使该具有靶位点的核酸与该发夹探针进行光连接，抑制由核酸扩增法引起的包含靶位点的检测区的扩增的方法。2.突变型核酸的检测方法，该方法是通过选择性地扩增包含突变型核酸的靶位点的检测区，来检测是否存在该突变型核酸，该方法包括下述步骤: 步骤(a):使包含光连接性核酸类的发夹探针与核酸样品共存，使发夹探针与具有靶位点的野生型核酸分子特异性地形成杂交体，所述光连接性核酸类具有与具有野生型核酸序列的靶位点互补的序列； 步骤(b):对已形成杂交体的发夹探针和靶核酸分子进行光照射，使之进行光连接； 步骤(C):将上述步骤(a)、(b)的反应产物供给核酸扩增反应； 步骤(d):分析上述扩增产物。3.突变型核酸检测方法，该方法是通过选择性地扩增包含突变型核酸的靶位点的检测区，来检测是否存在该突变型核酸，该方法包括下述步骤: 步骤(a):使包含光连接性核酸类的发夹探针与核酸样品共存，使发夹探针与具有靶位点的野生型核酸分子特异性地形成杂交体，所述光连接性核酸类具有与具有野生型核酸序列的靶位点互补的序列； 步骤(b):对已形成杂交体的发夹探针和靶核酸分子进行光照射，使之进行光连接； 步骤(C):在核酸扩增反应中进行上述步骤(a)、(b)； 步骤(d):分析上述扩 增产物。4.权利要求1 3中任一项所述的方法，其中，上述核酸扩增法为PCR法。5.权利要求1 3中任一项所述的方法，其中，上述核酸扩增法为实时PCR法。6.权利要求1 3中任一项所述的方法，其中，上述发夹探针具有与靶核酸分子的有义链和/或反义链互补的序列。7.权利要求1 6中任一项所述的方法，其中，上述发夹探针的链长为7 30。8.权利要求1 7中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：寺崎浩司，今野玄理，岛津光伸，藤本健造，坂本隆，
申请(专利权)人：三菱化学美迪恩斯株式会社，
类型：
国别省市：