本发明专利技术公开了用于从生物样品中提取实质上纯粹的RNA的溶液。用于从包含RNA并且至少还包含DNA的生物样品中提取RNA的溶液包含：(a)相对于溶液的总量超过50体积％的酚、(b)相对于溶液的总量为3～10体积％的多元醇、(c)相对于溶液的总量为0.5～2.0M浓度的胍盐、(d)相对于溶液的总量为0.1～0.5M浓度的硫氰酸盐、和(e)用于将溶液的pH值维持在4～6的缓冲剂。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于从生物样品提取实质上纯粹的RNA的溶液。
技术介绍
写在DNA中的遗传信息以多种多样的组合被转录成RNA，从而生物显示复杂的表型。已经明确RNA通过种类、表达量而对生物的表型起作用，为了进行基因表达分析，从各种生物材料提取纯度高的RNA是重要的。为了实现该目标，到目前为止开发了大量的RNA提取方法。频繁被使用的RNA的分离方法有酚提取、从离液盐(chaotropic salt)溶液的沉淀、和对二氧化硅膜的吸附等。专利文献I记载了用于RNA的提取的包含2 5M的胍和40 60%的酚的溶液。通过使用该溶液，可以将这以前使用超速离心机且需要2天以上的操作以3小时有效地进行RNA提取。该方法被称为单步法。专利文献2中作为上述专利文献I所记载的方法的进一步改良，公开了用于从包含RNA、DNA和蛋白质的样品中将这些各成分同时提取而分离的提取溶液。具体地，记载了使用包含0. 5 2M的胍的浓度30 50%的酚溶液将RNA提取至水层而分离。专利文献1和2所记载的溶液，其组成不同，但均可以使用各溶液以同样的操作提取RNA。即，可以通过在各溶液中将生物组织均质化，使用氯仿等疏水性有机溶剂，将该匀浆离心而进行层分离。离心分离后，回收含RNA的最上部的水层，使用醇使RNA沉淀，并洗涤，从而提取RNA。但是,使用专利文献1和2所记载的溶液和方法分离的RNA中,额外混入(残存)有能通过逆转录-聚合酶链反应分析(RT-PCR)检出的程度的量的基因组DNA，因此存在例如在RT-PCR的情况下丧失RNA的定量性等问题(专利文献3，例如0005段)。因此，为了除去混入的DNA必须将通过这些方法分离的RNA进一步纯化。用于除去在提取的RNA样品中作为杂质而混入的DNA的一种一般方法是，将RNA样品用脱氧核糖核酸酶(DNase)处理。但是，利用DNase的处理在液层进行的情况下，处理后为了除去DNase，必须再次进行酚/氯仿提取和/或蛋白质的变性。另外，在组合二氧化硅膜柱进行提取的情况下，必须反复进行柱的洗涤操作。通过该利用DNase的处理，DNA的混入减少，但这些劳动增加，而且存在产生RNA的损失，从而RNA的提取量减少这样的问题。专利文献3中作为不进行DNase处理而避免DNA向RNA样品中混入的方法，公开了在PH值小于4的条件下使用RNA提取试剂的方法。但是，一般已知核酸在酸性下脱嘌呤化而分解，实质上分离未分解的RNA是困难的。另外，酸性下DNA对水层/有机层的溶解平衡偏向于向有机层分配，因此通过在PH值小于4的条件下使用RNA提取试剂可以期待某种程度的抑制基因组DNA混入水相的效果，但完全抑制碱基数小的DNA片段的混入是不可能的。现有技术文献专利文献专利文献1:美国专利第4843155号专利文献2 :日本特开平5-344886号公报专利文献3 :日本特表2007-532140号公报
技术实现思路
专利技术要解决的课题如上，用于从生物样品提取RNA的现有溶液，在要求定量性的情况下，存在不能提取未混入DNA的实质上纯粹的RNA这样的课题。并且，为了除去混入的DNA，需要DNase处理等附加工序。本专利技术要解决这些课题，提供用于从生物样品提取实质上纯粹的RNA的溶液。用于解决课题的方法本专利技术者们此次对于现有的RNA提取用溶液的组成进行了研究，特别地发现了酚浓度与防止DNA的混入的效果相关，从而完成了本专利技术。SP，本专利技术提供以下[1] [9]。[1] 一种溶液，是用于从包含RNA并且至少还包含DNA的生物样品中提取RNA的溶液，其中，包含(a)相对于溶液的总量超过50体积％的酚、(b)相对于溶液的总量为3 10体积％的多元醇、(c)相对于溶液的总量为0. 5 2. 0M浓度的胍盐、(d)相对于溶液的总量为0.1 0. 5M浓度的硫氰酸盐、和(e)用于将溶液的pH值维持在4 6的缓冲剂。[2]根据[1]所述的溶液，其中，酚浓度相对于溶液的总量为55 65体积％。[3]根据[1]或[2]所述的溶液，其中，进一步包含用于分离水层的有机溶剂。[4]根据[1] [3]的任一项所述的溶液，其中，生物样品是培养细胞的培养液。[5]根据[1] [3]的任一项所述的溶液，其中，生物样品是生物的体液成分。[6]根据[1] [3]的任一项所述的溶液，其中，生物样品是生物的血液成分。[7]从生物样品中提取RNA的方法，所述生物样品包含RNA并且至少还包含DNA，该方法包括以下工序将所述生物样品与包含下述(a) (e)的溶液一起进行均质化的工序，(a)相对于溶液的总量超过50体积％的酚、(b)相对于溶液的总量为3 10体积％的多元醇、(c)相对于溶液的总量为0. 5 2. 0M浓度的胍盐、(d)相对于溶液的总量为0.1 0. 5M浓度的硫氰酸盐、和(e)用于将溶液的pH值维持在4 6的缓冲剂；将所得的匀浆与用于分离水层的有机溶剂混合的工序；将所得的混合物进行离心分离的工序；以及回收离心分离所生成的、含RNA的水层的工序。[8]从生物样品中提取RNA的方法，所述生物样品包含RNA并且至少还包含DNA，该方法包括以下工序将所述生物样品与包含下述(a) (f)的溶液一起进行均质化的工序，(a)相对于溶液的总量超过50体积％的酚、(b)相对于溶液的总量为3 10体积％的多元醇、(c)相对于溶液的总量为0. 5 2. OM浓度的胍盐、(d)相对于溶液的总量为0.1 0. 5M浓度的硫氰酸盐、和(e)用于将溶液的pH值维持在4 6的缓冲剂、(f)用于分离水层的有机溶剂；将所得的匀浆进行离心分离的工序；以及回收离心分离所生成的、含RNA的水层的工序。[9]根据权利要求7或8所述的方法，其中，酚浓度相对于(a) (e)的溶液的总量为55 65体积。专利技术的效果通过使用本专利技术的溶液，可以从生物样品中简便地提取没有混入DNA的实质上纯粹的RNA。另外，根据本专利技术，不需要可造 成回收损失的DNase处理等附加处理，就可以获得在要求定量性的用途中也能够直接使用的纯度的RNA。特别是生物样品中，即使在包含非常多的RNA分解酶和/或其他夹杂物的血液等体液中，也可以高纯度地提取目的RNA。附图说明图1是在实施例1中使用本专利技术的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图2是在比较例I中使用专利文献2所记载的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图3是在比较例2中使用专利文献I所记载的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图4是在实施例2 5中使用本专利技术的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图5是在实施例6 12中使用本专利技术的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图6是在实施例13、比较例3中使用本专利技术的溶液、专利文献3所记载的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图7是在实施例14中使用本专利技术的溶液从培养细胞提取的核酸的电泳图。图8是在实施例15、16中使用本专利技术的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图9是在比较例4中使用专利文献3所记载的溶液从血清提取的核酸的电泳图。图10是在实施例17、18中使用本专利技术的溶液从血清提取的核酸的电泳图。具体实施例方式本专利技术涉及用于从生物样品中提取RNA的溶液，其中，包含以下的(a) (e)作为其成分，(a)相对于溶液的总量超过50体积0A的酚、(b)相对于溶液的总量为3 10体积％ (3体积％以上本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.18 JP 183280/20101.一种溶液，是用于从包含RNA并且至少还包含DNA的生物样品中提取RNA的溶液，其中，包含 (a)相对于溶液的总量超过50体积％的酚、 (b)相对于溶液的总量为3 10体积％的多元醇、 (c)相对于溶液的总量为0.5 2. OM浓度的胍盐、 (d)相对于溶液的总量为0.1 0. 5M浓度的硫氰酸盐、和 (e)用于将溶液的pH值维持在4 6的缓冲剂。2.根据权利要求1所述的溶液，其中，酚浓度相对于溶液的总量为55 65体积％。3.根据权利要求1或2所述的溶液，其中，进一步包含用于分离水层的有机溶剂。4.根据权利要求1 3的任一项所述的溶液，其中，生物样品是培养细胞的培养液。5.根据权利要求1 3的任一项所述的溶液，其中，生物样品是生物的体液成分。6.根据权利要求1 3的任一项所述的溶液，其中，生物样品是生物的血液成分。7.从生物样品中提取RNA的方法，所述生物样品包含RNA并且至少还包含DNA，该方法包括以下工序 将所述生物样品与包含下述(a) (e)的溶液一起进行均质化的工序， (a)相对于溶液的总量超过...
【专利技术属性】
技术研发人员：吉本真纪子，秋山英雄，信正均，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。