诱导调节性T细胞的增殖或积累的组合物制造技术

发现属于梭菌属的细菌在结肠中诱导调节性T细胞(Treg细胞)的积累。此外，本发明专利技术人发现由这些细菌诱导的调节性T细胞(Treg细胞)阻遏效应T细胞的增殖。根据这些发现，本发明专利技术人发现利用属于梭菌属的细菌或由其获得的生理活性物质使得可能诱导调节性T细胞(Treg细胞)的增殖或积累，并进一步阻遏免疫功能。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诱导调节性T细胞的增殖或积累的组合物本专利技术涉及具有诱导调节性T细胞的增殖或积累效应的组合物，且该组合物包含属于梭菌(Clostridium)属的细菌、由所述细菌获得的生理活性物质、细菌孢子等作为活性成分。本专利技术还涉及诱导调节性T细胞的增殖或积累的方法，以及抑制这种增殖或积累的方法。此外，本专利技术涉及含有至少一种属于梭菌属的细菌菌株或细菌孢子的疫苗组合物，以及通过向有相应需要的个体施用所述疫苗组合物来治疗或预防选自传染性疾病和自身免疫性疾病的至少一种疾病或病症的方法。本专利技术还涉及筛选促进调节性T细胞的增殖或积累的化合物的方法，以及该方法中使用的非人哺乳动物，且其中报告基因在IL-10基因表达的控制下表达。数百种共生微生物物种居住在哺乳动物的胃肠道内，并与宿主免疫系统密切相互作用。使用无菌(GF)动物的研究结果表明，共生微生物对粘膜免疫系统的形成发挥很大影响，粘膜免疫系统的形成诸如派尔集合淋巴结(peyer’ s patch) (PP)和单独的淋巴滤泡(ILF)的组织发生、抗微生物肽从上皮的分泌和粘膜组织中独特淋巴细胞的积累，独特淋巴细胞包括产生免疫球蛋白A的浆细胞、上皮内淋巴细胞、产生IL-17的⑶4阳性T细胞(Th17)和产生IL-22的NK样细胞(非专利文献I至7)。因此，肠道细菌的存在增强了粘膜的保护功能，为宿主提供了抵抗侵入机体的病原微生物的强大免疫反应。另一方面，粘膜免疫系统维持了对膳食抗原和无害微生物的无反应性(非专利文献3)。因此，共生细菌和免疫系统之间交叉效应(cross-talk)的调节异常(肠道生态失调)可能导致针对环境抗原的过度强大的免疫反应，从而引起炎性肠病(IBD)(非专利文献8至10)。最近的研究结果表明单独共生细菌控制粘膜免疫系统中其特异性免疫细胞的分化。例如，脆弱拟 杆菌(Bacteroides fragilis),其是人类的共生细菌,在小鼠中特异性诱导系统性Thl细胞应答和粘膜性产生IL-10的T细胞应答，并在保护宿主不患结肠炎方面起作用，而结肠炎另外由病原体引起(非专利文献3)。分节丝状菌，其是小鼠的肠道共生细菌，被表明诱导粘膜Thl7细胞应答并由此增强针对宿主胃肠道的病原体感染的抗性(非专利文献11至13)。另外，已知由几种共生细菌获得的短链脂肪酸阻遏肠道炎症(非专利文献14)。此外，推测一些物种的肠道微生物群的存在对调节性T细胞(下文称为”Treg细胞”)的分化发挥很大影响，这维持了免疫系统的稳态。同时，已被鉴定为阻遏免疫性的亚群的调节性T细胞是其中表达转录因子Foxp3的⑶4+T细胞，并已知其在维持免疫稳态中起重要作用(非专利文献8、9、15和16)。此外，已知表达Foxp3的细胞尤其是在结肠中大量存在，而仅有在结肠中局部存在的Treg细胞恒定地以高水平表达IL-10，IL-10是免疫阻遏性细胞因子(非专利文献17)。还已知具有从中特异地除去IL-10的CD4+FoXp3+细胞的动物发展炎性肠病(非专利文献18)。因此，如果阐明了在结肠中以高水平产生IL-10的Treg细胞的诱导机制，就可以增强免疫阻遏，这进而可用于治疗自身免疫性疾病诸如炎性肠病，以及用于器官移植。然而，还不清楚大量Treg细胞如何变得存在于结肠中和Treg细胞如何在结肠中以高水平产生IL-10的机制。此外，哪些构成肠道共生细菌菌丛的细菌物种对调节性T细胞的诱导发挥影响也仍然是不清楚的。[引用列表][非专利文献][NPLI]J.J.Cebra, ^Am J CLin Nutr”，May, 1999，69，1046S[NPL2]A.J.Macpherson, N.L.Harris, ^Nat Rev Immunol ”，June2004,4,478[NPL3] J.L.Round, S.K.Mazmanian, “Nat Rev Immunol ”，May2009,9, 313[NPL4]D.Bouskra 等，“Nature，，，November27, 2008,456, 507[NPL5]K.Atarashi 等，“Nature”，0ctober9, 2008,455,808[NPL6] Ivanov, II 等，“Cell Host Microbe”，0ctoberl6，2008，4，337[NPL7] S.L.Sanos 等，“Nat Immunol ”，January2009,10,83[NPL8]M.A.Curotto de Lafaille，J.J.Lafaille，“Immunity”，May2009，30，626[NPL9]M.J.Barnes, F.Powrie, “ Immunity，，，September 18, 2009, 31,401[NPL10]ff.S.Garrett 等，“Cell，，，0ctober5, 2007,131，33[NPL11] Ivanov, II 等，“Cell”，0ctober30, 2009,139,485.[NPL12] V.Gaboriau-Routhiau 等，“ Immunity”，0ctoberl6, 2009, 31,677[NPL13]N.H.Salzman 等，“Nat Immunol”，11, 76.[NPL14]K.M.Maslowski 等，“Nature”，0ctober29，2009，461，1282[NPL15] L.F.Lu, A.Rudensky, “Genes Dev”，June I, 2009, 23,1270[NPL16] S.Sakaguchi, T.Yamaguchi, T.Nomura, M.0no,“Cell”, May30, 2008,133，775[NPL17]C.L.Maynard 等，“Nat Immunol”，September2007,8,931[NPL18] Y.P.Rubtsov 等，“Immunity”，April2008, 28, 546[专利技术概述][技术问题]本专利技术是鉴于传统技术中的上述问题而进行的。因此，本专利技术的一个目的是鉴定诱导调节性T细胞的增殖或积累的肠道共生细菌。本专利技术的另一个目的是提供包含所鉴定的肠道共生细菌或由其获得的生理活性物质，并因此诱导调节性T细胞(Treg细胞)的增殖或积累的组合物等。[问题的解决方案]本专利技术人进行了认真的研究以解决上述问题。结果，本专利技术人发现获自哺乳动物的粪便样品的氯仿处理的级分和孢子形成级分诱导结肠中调节性T细胞(Treg细胞)的积累。此外，本专利技术人已 发现属于梭菌属的细菌诱导结肠中调节性T细胞的增殖或积累。本专利技术人还发现由这些细菌诱导的调节性T细胞阻遏效应T细胞的增殖。而且，本专利技术人还发现属于梭菌属的细菌的定殖和所造成的Treg细胞的增殖或积累调节局部和全身免疫反应。根据这些发现，本专利技术人已发现利用属于梭菌属的细菌、其孢子或由其获得的生理活性物质使得可能诱导调节性T细胞(Treg细胞)的增殖或积累，并进一步阻遏免疫功倉泛。更具体地，本专利技术具有以下方面:(I) 一种诱导调节性T细胞的增殖或积累的组合物，所述组合物包含选自由以下(a)至(C)组成的组的至少一种物质作为活性成分:(a)属于梭菌属的细菌或由所述细菌获得的生理活性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.04 JP 2010-129134;2010.12.03 JP PCT/JP20101.一种诱导调节性T细胞的增殖或积累的组合物，所述组合物包含选自由以下(a)至(C)组成的组的至少一种物质作为活性成分: (a)属于梭菌属的细菌或由所述细菌获得的生理活性物质； (b)获自哺乳动物的粪便样品的孢子形成级分或所述级分的培养上清液；和 (C)获自哺乳动物的粪便样品的氯仿处理级分或所述级分的培养上清液。2.根据权利要求1所述的组合物，其中 所述调节性T细胞是转 录因子Foxp3阳性的调节性T细胞或产生IL-1O的调节性T细胞。3.根据权利要求1和2中任一项所述的组合物，其中 所述组合物具有免疫阻遏效应。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中 所述组合物是药物组合物。5.一种在个体中诱导调节性T细胞的增殖或积累的方法，所述方法包括向所述个体施用选自由以下(a)至(C)组成的组的至少一种物质的步骤: (a)属于梭菌属的细菌或由所述细菌获得的生理活性物质； (b)获自哺乳动物的粪便样品的孢子形成级分或所述级分的培养上清液；和 (C)获自哺乳动物的粪便样品的氯仿处理级分或所述级分的培养上清液。6.一种在个体中诱导调节性T细胞的增殖或积累的方法，所述方法包括向所述个体施用针对革兰氏阴性细菌的抗生素的步骤。7.一种在个体中诱导调节性T细胞的增殖或积累的方法，所述方法包括向所述个体施用选自由以下组成的组的至少一种物质的步骤:扁桃仁皮、菊糖、低聚果糖、棉子糖、乳果糖、果胶、半纤维素、支链淀粉、乙酰辅酶A、生物素、甜菜糖蜜、酵母提取物和抗性淀粉。8.根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中 还向所述个体施用治疗组合物。9.根据权利要求8所述的方法，其中 所述治疗组合物是选自由以下组成的组的至少一种组合物:皮质类固醇、美沙拉嗪、氨水杨酸、柳氮磺吡啶、柳氮磺吡啶衍生物、免疫阻遏药物、环孢菌素A、巯嘌呤、硫唑嘌呤、泼尼松、甲氨蝶呤、抗组胺剂、糖皮质激素、肾上腺素、茶碱、色甘酸钠、抗白三烯剂、抗胆碱能鼻炎药物、抗胆碱能减充血剂、肥大细胞稳定剂、单克隆抗-1gE抗体、疫苗和其组合。10.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其中 选自由IL-10表达的增加、CTLA4表达的增加、IDO表达的增加和IL-4表达的阻遏组成的组的一种测量用作所述个体中诱导调节性T细胞的增殖或积累的指标。11.一种在个体中抑制调节性T细胞的增殖或积累的方法，所述方法包括向所述个体施用针对革兰氏阳性细菌的抗生素的步骤。12.根据权利要求5至11中任一项所述的组合物，其中 所述调节性T细胞是转录因子Foxp3阳性的调节性T细胞或产生IL-10的调节性T细胞。13.一种疫苗组合物，包含选自由以下(a)至(C)组成的组的至少一种物质: (a)属于梭菌属的细菌；(b)获自哺乳动物的粪便样品的孢子形成级分中的细菌孢子；和 (C)获自哺乳动物的粪便样品的氯仿处理级分中的细菌。14.一种在个体中治疗、辅助治疗、降低其严重度或预...

【专利技术属性】
技术研发人员：本田贤也，新幸二，伊藤喜久治，田上大，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，
类型：
国别省市：