从小体积的外周血产生诱导性多潜能干细胞制造技术

公开了涉及生产诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)的方法和组合物。例如，可以使用游离重编程和不含饲养物或不含异种物质的条件从外周血细胞如人血液祖细胞产生诱导性多潜能干细胞。在某些实施方案中，本发明专利技术提供了以低数量的血液祖细胞提高整个重编程效率的新方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从小体积的外周血产生诱导性多潜能干细胞专利技术背景本申请要求2010年6月15日提交的美国专利申请No.61/355,046和2010年10月1日提交的美国专利申请No.61/388,949的优先权，它们的全部公开内容在不弃权的情况下通过引用以其整体明确地并入本文。本申请还与2009年6月5日提交的美国专利申请No.61/184,546、2009年9月4日提交的美国专利申请No.61/240,116，以及2010年6月4日提交的PCT申请PCT/US10/37376相关，它们的全部公开内容在不弃权的情况下通过引用以其整体明确地并入本文。1.专利
本专利技术一般地涉及分子生物学和干细胞领域。更具体地，本专利技术涉及体细胞，尤其造血祖细胞的重编程。2.相关领域的描述一般而言，干细胞是未分化细胞，其能够产生成熟的功能细胞的演替。例如，造血干细胞可以产生任意的不同类型的末端分化的血细胞。胚胎干(ES)细胞来源于胚胎并且是多潜能的，因而具有发育成任何器官或组织类型或者至少潜在地发育成完整胚胎的能力。诱导性多潜能干细胞，通常简写为iPS细胞或iPSC，是一类人工地从非多潜能细胞，通常成年体细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.15 US 61/355,046;2010.10.01 US 61/388,9491.一种从造血祖细胞生产人iPS细胞的体外方法，所述方法包括以下步骤：a)提供包含造血祖细胞的未动员的人外周血细胞的细胞群体；b)在用于促进所述造血祖细胞扩展的扩展条件下培养所述造血祖细胞；c)将表达iPS重编程因子的染色体外复制的游离型载体导入所述扩展的造血祖细胞中；以及d)将所述扩展的造血祖细胞在不含异种物质的限定的非饲养物依赖性培养物中进行培养，由此从所述造血祖细胞产生人iPS细胞，其中所述扩展条件包含含有一种或多种细胞因子的扩展培养基，所述细胞因子包括干细胞因子(SCF)、Flt-3配体(Flt3L)、血小板生成素(TPO)、白细胞介素3(IL-3)或白细胞介素6(IL-6)，并且其中所述重编程因子为Sox、Oct、Nanog、Lin-28、Klf4、C-myc或L-myc、SV40大T抗原或它们的组合。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞群体是来自一个或多个其细胞没有用从外部施加的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)动员的受试者。3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述细胞群体包含在约10ml体积的血液样品中。4.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述扩展条件不包含Notch-1配体。5.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在步骤b)中的扩展条件包含限定的细胞外基质。6.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在步骤b)中的扩展条件不包含基质。7.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在步骤b)中的条件或在步骤d)中的培养物具有最高7％的氧分压。8.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述染色体外复制的游离型载体为EBV元件。9.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述步骤c)在所述扩展步骤b)的第3、4、5或6天进行。10.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在所述步骤c)中所述扩展的造血祖细胞的起始数量为104至105个。11.根据权利要求1至2中任一项所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿曼达·麦克，
申请(专利权)人：细胞动力学国际有限公司，
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