一种消化巨噬细胞的组合物及其方法技术

本发明专利技术涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种消化巨噬细胞的组合物及其方法。该消化巨噬细胞的组合物包括水飞蓟宾、甘草多糖、海带硫酸多糖、胰酶和EDTA。本发明专利技术消化巨噬细胞的组合物可有效保护细胞，减少巨噬细胞在消化中的细胞损伤；可有效修复巨噬细胞在消化中的细胞损伤；可缩短细胞的消化时间，可有效提高巨噬细胞的消化率，并能够提高消化后细胞的活率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及细胞培养
，特别设及一种消化巨隧细胞的组合物及其方法。
技术介绍
巨隧细胞（Macrophages)是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细 胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨隧细胞和单核细胞皆为吞隧细胞，在脊椎动物体内参与 非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫），属免疫细胞。巨隧细胞是人类天 然免疫系统的重要组成部分，巨隧细胞在组织修复及重塑、应激反应中起重要作用，是机体 抵抗病原微生物的第一道防线。 巨隧细胞起源于骨髓前体细胞，根据所在组织及免疫微环境获得不同的形态及功 能。巨隧细胞有多种功能，分布于体内的各个器官、结缔组织、浆膜腔等，根据功能可将其分 为经典活化型巨隧细胞（Ml型）和替代活化型巨隧细胞（M2型），Ml型巨隧细胞主要在清 除微生物、介导化1免疫应答反应上发挥重要作用，M2型巨隧细胞主要参与化2相关的免 疫应答反应，并且发挥免疫调节作用。根据M2型巨隧细胞的基因表达和趋化因子进一步将 其分为M2a、M化和M2c巨隧细胞，Μ化巨隧细胞在免疫调节和化2细胞分化方面发挥作用， 所W也被称为"调节性巨隧细胞"，运些不同亚型的巨隧细胞所表达的特异性表面标志还没 有一个确切的定论，因为巨隧细胞的生物特征具有很大可塑性，不同微环境可明显改变其 生物学功能，并分化为不同功能亚群。 巨隧细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨隧细胞属不繁殖细胞群，在条件 适宜下可生活2 -3周，多用做原代培养，难W长期生存。由于机体天然免疫的存在，巨隧 细胞表面的病原识别受体可W识别微生物的结构和表面分子，从而可对病原体进行特异性 的识别和吞隧。其主要功能就是W固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行隧 菌作用（即吞隧W及消化），并激活淋己球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。其多 功能性是研究细胞吞隧、细胞免疫和分子免疫学的重要对象，很多疾病是由严重的炎症反 应引起的，如风湿性关节炎、肠炎等，需要用抗炎药物，巨隧细胞可在很多炎性疾病中促进 致病性炎症反应，是很多抗炎药物的祀细胞。肿瘤相关巨隧细胞（ΤΑΜ)是肿瘤相关慢性炎 症中的关键细胞，是炎症微环境的重要组成部分，一旦被激活，ΤΑΜ就成为肿瘤微环境中的 细胞因子、生长因子和蛋白酶的主要来源。肿瘤相关巨隧细胞促进肿瘤生长、增殖、血管生 成、侵袭、转移及化疗抵抗。巨隧细胞的表型及功能随着肿瘤进展的不同阶段而变化，针对 巨隧细胞的抗肿瘤药物治疗，应取决于肿瘤所处的阶段，因此巨隧细胞在抗炎、抗肿瘤药物 研发方面作为祀细胞起到重要的作用。 目前还没有文献具体研究关于巨隧细胞的消化方法，只是对贴壁细胞如干细胞的 消化方法，常用的有酶消化法、离子馨合剂、物理法及冷冻法。酶消化法常采用膜酶消化法， 离子馨合剂法常采用邸ΤΑ消化法。常规的膜酶消化法在时间上不容易控制，如果消化时间 不够，细胞消化不充分；如果消化过度，容易损伤细胞；并且巨隧细胞单纯用膜酶消化很难 消化下来，而且所需时间长。而邸ΤΑ消化法会损害细胞，邸ΤΑ可W与细胞膜上很多大分子 蛋白上的中金属成分发生馨合，致使蛋白变性影响蛋白质的生物活性而发生损伤。因此，急 需提供一种能有效减少巨隧细胞在消化过程中受损伤的快速消化方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种消化巨隧细胞的组合物及其方法。该消化巨隧细胞 的组合物可有效保护细胞，减少巨隧细胞在消化中的细胞损伤；可有效修复巨隧细胞在消 化中的细胞损伤；可缩短细胞的消化时间，可有效提高巨隧细胞的消化率，并能够提高消化 后细胞的活率。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供W下技术方案： 本专利技术提供了一种消化巨隧细胞的组合物，包括水飞劑宾、甘草多糖、海带硫酸多 糖、膜酶和邸TA。 水飞劑宾为菊科药用植物水飞劑种子的种皮中提取所得的一种黄酬化合物。药 理、毒理试验结果表明，本品有明显的保护及稳定肝细胞膜的作用；对四氯化碳、硫代乙酷 胺、毒葦碱、鬼笔碱、猪尿豆碱等肝脏毒物引起的各种类型肝损伤具有不同程度的保护和治 疗作用，并对四氯化碳所引起的丙氨酸氨基转移酶的升高有一定的阻止作用。适用于慢性 迁延性肝炎、慢性活动性肝炎，初期肝硬化、肝中毒等病的治疗。临床试用于急、慢性肝炎患 者，症状、体征、肝功能均有明显改善。 甘草（Glycyrrhiza)属多年生草本植物，主要产于新疆、内蒙、山西、甘肃等地，具 有补脾益气，润肺止咳，缓急止痛，缓和药性，泻火解毒之功效，其有效成分主要为黄酬、Ξ 祗和多糖类化合物。甘草多糖（Glyeyrrhizapolysaccharide,GP巧是从甘草中提取出的 一类a-D-化喃多糖。甘草多糖的药理作用主要包括免疫调节作用、抗肿瘤作用、抗病毒作 用。 海带化aminariajaponica)是食药两用的褐藻类植物，其药用价值在本草纲目和 嘉佑本草等古医书中已有记载。Ξ十多年来，国内外对海带开发主要集中在食品加工、制舰 业、制甘露醇及褐藻酸等产业。近年来，对海带多糖活性物质的分离纯化研究也逐步展开。 海带硫酸多糖(Xaminariapolysaccha;ridesulfate，LP巧是含有多种单糖和硫酸基的水溶 性杂多糖，海带中LPS的含量随其种类、产地、季节和植物体不同部位而变化，其生物学功 能主要集中在抗肿瘤、免疫调节、血脂及血糖调节等方面。 本专利技术在巨隧细胞消化前加入中药成分水飞劑宾、甘草多糖、海带硫酸多糖，可起 到在消化过程中消化液对巨隧细胞的损伤，在消化后加入中药成分水飞劑宾、甘草多糖、海 带硫酸多糖可修复由于消化而造成的细胞损伤。本专利技术联合膜酶和邸TA对巨隧细胞进行 消化可有效提高巨隧细胞的消化率。[001引作为优选，Wμg/μg/μg/mg/mg计，水飞劑宾、甘草多糖、海带硫酸多糖、膜酶与EDTA的用量比为：（1 ~3) : 1 ~0. 5) : 2 ~1. 0) : (1. 25 ~2. 5) : 1 ~0. 2)。 在本专利技术提供的一些实施例中，Wμg/μg/μg/mg/mg计，水飞劑宾、甘草多糖、 海带硫酸多糖、膜酶与邸TA的用量比为：1:0. 1:0. 2 :1. 25 :0. 2。[001引在本专利技术提供的另一些实施例中，Wμg/μg/μg/mg/mg计，水飞劑宾、甘草多 糖、海带硫酸多糖、膜酶与邸TA的用量比为：3:0. 5:1. 0 :1. 875 :0. 2。 在本专利技术提供的另一些实施例中，Wμg/μg/μg/mg/mg计，水飞劑宾、甘草多 糖、海带硫酸多糖、膜酶与邸ΤΑ的用量比为：1. 5:0. 25:0. 5 :2. 5 :0. 2。 本专利技术还提供了一种消化巨隧细胞的方法，包括如下步骤：[001引将含贴壁巨隧细胞的培养基中加入水飞劑宾、甘草多糖、海带硫酸多糖，静置，洗 涂，加入膜酶-邸TA消化液进行消化，终止消化。 作为优选，本专利技术方法中水飞劑宾、甘草多糖、海带硫酸多糖、膜酶和邸TA的用量 为： 永飞药宾 ]~3,ug/mL 甘草多糖 0.1~0.5yg/mL 海带疏酸.多牆 0.2.O.iig/mL 跋酶 15mg/mL EDTA 0.i~0.2mg/mL。 在本专利技术提供的一些实施例中，本专利技术方法中水飞劑宾、甘草多糖、海带硫酸多 糖、膜酶和邸TA的用量为： 水飞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种消化巨噬细胞的组合物，其特征在于，包括水飞蓟宾、甘草多糖、海带硫酸多糖、胰酶和EDTA。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，王一飞，葛啸虎，李丽娟，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44