本公开内容涉及核酸化学领域，具体地涉及5-位修饰的尿苷及其亚磷酰胺和三磷酸酯衍生物。本公开内容还涉及其制备和使用方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开内容涉及核酸化学领域，具体地涉及5-位修饰的尿苷及其亚磷酰胺和三磷酸酯衍生物。本公开内容还涉及其制备和使用方法。本公开内容包括修饰的核苷作为寡核苷酸或适体的一部分的用途。
技术介绍
下面的描述提供了与本公开内容有关的信息的总结，且不是承认在本文中提供的任何信息或引用的任何出版物是本公开内容的现有技术。已经非常关注开发修饰的核苷作为治疗剂、诊断剂和用于掺入寡核苷酸中。例如，修饰的核苷(诸如AZT、ddl、d4T等)已经被用于治疗AIDS。5-三氟甲基_2’ -脱氧尿苷对疱疹性角膜炎是有效的，5-碘-1-(2-脱氧-2-氟-b-D-阿拉伯呋喃糖基)胞嘧啶具有抗CMV、VZV、HSV-1、HSV_2 和 EBV 的活性(A Textbook of Drug Design and Development, PovlKrogsgaard-Larsen^PHans Bundgaard 编，Harwood Academic Publishers, 1991,第 15章)。修饰的核苷已经在诊断用途中表现出实用性。在这些用途中，将所述核苷掺入DNA中的可检测的位置，并使用各种诊断方法来检测修饰的核苷的位置。这些方法包括放射性标记、荧光标记、生物素化和链裂解。链裂解的一个实例包括使所述核苷与肼反应，以产生脲核苷，然后使所述脲核苷与哌唳反应，以造成链裂解(Maxam-Gilbert方法)。还已经将修饰的核苷掺入寡核苷酸中。存在几种可以将寡核苷酸用作治疗剂的方法。反义寡核苷酸可以结合生物体中的某些遗传编码区，以阻止蛋白的表达，或阻断各种细胞功能。此外，称作SELEX方法或指数富集的配体系统进化的方法使本领域技术人员能够 鉴别和制备选择性地结合靶分子的寡核苷酸(称作“适体”)。所述SELEX方法描述在美国专利5，270，163中，其内容通过援引加入本文。所述SELEX方法包括从候选物的混合物中选择寡核苷酸，以实现基本上任意的希望的结合亲和力和选择性标准。从寡核苷酸的随机混合物开始，所述方法包括在有利于结合(或相互作用)的条件下使所述混合物接触靶，将未结合的寡核苷酸和已经与靶分子结合(或相互作用)的寡核苷酸分开，解离寡核苷酸-靶对，扩增从所述寡核苷酸-靶对解离出的寡核苷酸，以产生配体富集的寡核苷酸混合物，然后通过如所希望的多个循环，重复所述结合、分开、解离和扩增的步骤。可以将修饰的核苷掺入在SELEX方法中使用的或由SELEX方法鉴别出的反义寡核苷酸、核酶和寡核苷酸中。这些核苷可以赋予所述寡核苷酸对内切核酸酶和外切核酸酶的体内和体外稳定性，改变所述分子的电荷、亲水性或亲脂性，和/或提供三维结构的差异。以前已经描述的核苷的修饰包括2’ -位糖修饰、5-位嘧啶修饰、8-位嘌呤修饰、在环外胺处的修饰、4-硫代尿苷的取代、5-溴或5-碘-尿嘧啶的取代、主链修饰和甲基化。修饰还包括3’和5’修饰诸如加帽。PCT WO 91/14696 (通过援引加入本文)描述了化学修饰反义寡核苷酸以增强向细胞中的进入的方法。美国专利5，428，149,5, 591，843,5, 633，361,5, 719，273 和 5，945，527 (它们通过援引整体加入本文)描述了通过钯偶联反应来修饰嘧啶核苷。在有些实施方案中，使亲核试剂和一氧化碳与嘧啶核苷偶联(所述嘧啶核苷含有在嘧啶环的5-位上的离去基)，优选地形成酯和酰胺衍生物。已经使用多种方法来提供抗外切核酸酶降解的寡核苷酸。PCT W090/15065描述了制备外切核酸酶抗性的寡核苷酸的方法，其中将2个或更多个亚磷酰胺、单硫代磷酯和/或二硫代磷酯键掺入在寡核苷酸的5’和/或3’末端处。PCT WO 91/06629公开了在相邻核苷之间具有一个或多个磷酸二酯键的寡核苷酸，所述磷酸二酯键通过形成能够结合RNA或DNA的缩醛/缩酮型键而被替代。有利的是，提供用于治疗和诊断用途并用于包含在寡核苷酸中的新核苷。当掺入寡核苷酸中时，有利的是，提供这样的新寡核苷酸其表现出与靶分子结合的不同的高亲和力，和/或表现出与从天然存在的核苷制备的寡核苷酸相比增加的对外切核酸酶和内切核酸酶的抗性。还有用的是，提供具有修饰的核苷酸，所述修饰会赋予不同于内切核酸酶和外切核酸酶抗性或除此之外额外的生物活性。
技术实现思路
本公开内容提供具有以下通式的5-位修饰的尿苷权利要求1.选自具有以下结构的化合物的化合物或其盐O O2.权利要求I的化合物，其具有以下结构3.权利要求I的化合物或其盐，所述化合物具有以下结构4.具有以下结构的化合物5.权利要求I或4的化合物，其被掺入成为寡核苷酸的一部分。6.权利要求5的化合物，其中所述寡核苷酸选自核糖核酸或脱氧核糖核酸。7.权利要求6的化合物，其中所述寡核苷酸另外包括至少一种化学修饰，所述化学修饰包括在独立地选自核糖位置、脱氧核糖位置、磷酸酯位置和碱基位置的一个或多个位置处的化学取代。8.权利要求7的化合物，其中所述化学修饰独立地选自2’_位糖修饰、2’-氨基(2，-NH2)、2’ -氣(2，_F)、2’ _0_ 甲基(2，-OMe)、2’ _0_ 乙基(2，_0Et)、2’ _0_ 丙基(2，-OPr)和 2，-O-CH2CH2OCH309.权利要求I或4的化合物，其被掺入成为适体的一部分。10.权利要求9的化合物，其中所述适体选自核糖核酸或脱氧核糖核酸。11.权利要求10的化合物，其中所述适体另外包括至少一种化学修饰，所述化学修饰包括在独立地选自核糖位置、脱氧核糖位置、磷酸酯位置和碱基位置的一个或多个位置处的化学取代。12.权利要求11的化合物,其中所述化学修饰独立地选自2’_位糖修饰、2’-氨基(2，-NH2)、2’ -氣(2，_F)、2’ _0_ 甲基(2，-OMe)、2’ _0_ 乙基(2，_0Et)、2’ _0_ 丙基(2，-OPr)和 2，-O-CH2CH2OCH3013.寡核苷酸，其包含至少一个具有以下结构的修饰的核苷酸14.权利要求13的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸选自核糖核酸或脱氧核糖核酸。15.权利要求14的寡核苷酸,其中所述寡核苷酸另外包括至少一种化学修饰,所述化学修饰包括在独立地选自核糖位置、脱氧核糖位置、磷酸酯位置和碱基位置的一个或多个位置处的化学取代。16.权利要求15的寡核苷酸,其中所述化学修饰独立地选自2’-位糖修饰、2’-氨基(2，-NH2)、2’ _ 氣(2，_F)、2’ _0_ 甲基(2，-OMe)、2’ _0_ 乙基(2，_0Et)、2’ ~0~ 丙某(2，-OPr)、2’-0-CH2CH20CH3、5-位嘧啶修饰、主链修饰、甲基化、3’加帽和5’加帽。17.寡核苷酸，其包含至少一个独立地选自以下结构的修饰的核苷酸18.权利要求17的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸选自核糖核酸或脱氧核糖核酸。19.权利要求18的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸另外包括至少一种化学修饰，所述化学修饰包括在独立地选自核糖位置、脱氧核糖位置、磷酸酯位置和碱基位置的一个或多个位置处的化学取代。20.权利要求19的寡核苷酸，其中所述化学修饰独立地选自2’_位糖修饰、2’-氨基(2，-NH2)、2’ _ 氣(2，_F)、2’ _0_ 甲基(2，_0Me)、2’ _0_ 乙基(2，_本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·罗洛夫，N·亚尼奇，J·D·卡特，C·福勒，
申请(专利权)人：私募蛋白质体公司，
类型：
国别省市：
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