金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒制造技术
Total protein fluorescence detection kit for gold nanoclusters
The invention discloses a gold nanoclusters for total protein fluorescence detection kit probe, which is based on the 6 aza 2 thymine thio gold nanoclusters for total protein fluorescence detection kit probe, which is characterized in that a gold nanoclusters probe solution and bovine serum albumin solution kit. By using the specific adsorption of protein and gold cluster probe, the fluorescence of the gold cluster probe was enhanced. Gold nanoclusters fluorescence intensity and protein concentration showed a good linear relationship in the 10~400 g/ml range, the detection limit is 0.88 g/mL. The invention has the advantages of high sensitivity and good reproducibility, and can be used for the determination of total protein in biological samples, food and life systems.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及以6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶-金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒，属于分析化学及纳米
技术介绍
各种精确的蛋白质定量方法对许多基础研究抑或是某些前沿领域的科学研究都是不可或缺的。蛋白质定量涉及了细胞生物学、生物化学、发育生物学、分子生物学、食品安全等领域的研究课题，不同的检测样品类型依据不同的条件选择相应的蛋白质定量方法。总蛋白定量分析的传统方法有：测量在280nm的紫外吸光值；二喹啉酸（BCA）和Bradford检测法；以及其他替代方法，例如Lowry检测法等。然而，目前这些已知的方法都有其适用条件，并且都存在一定的缺点：它们既不是蛋白质特异的（存在干扰），也不是对所有的蛋白质都同样准确和兼容。因此，发展一种抗干扰能力强、定量准确快速的新方法仍具有一定的意义。金纳米簇（goldnanoclusters,AuNCs）是一种新型的荧光纳米材料，其具有尺寸小、无毒、水溶性好、光稳定性好、Stokes位移大、比表面积大、制备条件温和、表面易于修饰以及荧光性质随尺寸可调等突出优点，是近年来的研究热点，其已被广泛应用于催化、传感检测、纳米标记、医学成像和光电子学等领域。本专利技术以6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶-金纳米簇作为荧光探针，基于蛋白质与金纳米团簇的特异性吸附作用，增强金纳米簇的荧光，用于总蛋白的检测，提供了一种简便、灵敏的总蛋白检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种以6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶-金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒。试剂盒中包括提供金纳米簇探针溶液（a液），牛血清白蛋白溶液（标准液）。为了实现上述目的，本...
【技术保护点】
一种金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒，其特征是试剂盒中有金纳米簇探针溶液和牛血清白蛋白溶液，所述的金纳米簇探针为6‑氮杂‑2‑硫代胸腺嘧啶‑金纳米簇，金纳米簇探针溶液作为a液，牛血清白蛋白溶液为标准贮备液。
【技术特征摘要】
1.一种金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒，其特征是试剂盒中有金纳米簇探针溶液和牛血清白蛋白溶液，所述的金纳米簇探针为6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶-金纳米簇，金纳米簇探针溶液作为a液，牛血清白蛋白溶液为标准贮备液。2.根据权利要求1所述的金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒，其特征是所使用的金纳米簇探针由下述方法制备的：取含0.2mol/L氢氧化钠，浓度为80mmol/L的6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶溶液与浓度为10mg/mL的氯金酸溶液按1:1比例混合均匀，室温下磁力搅拌1小时，用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行纯化，冷冻干燥后得到6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶-金纳米簇粉末。3.根据权利要求1或2所述的金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒，其特征是利用金纳米簇探针在535nm处的荧光强度值以判断总蛋白含量，所使用的激发波长为472nm。4.根据权利要求1或2或3所述的金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒，其特征是测定的线性范围为10~400μg/mL，检测限为0.88μg/ml。5.一种金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒测定人血清总蛋白的方法，其特征是将牛血清白蛋白溶液作为标准贮备液用双蒸水稀释为0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mg/mL的系列标准溶液，在20μL系列标准溶液中分别加入180μL用双蒸水配制的盐酸调节pH为5的浓度为0.5mg/mL的金纳米簇探针溶液，充分混匀后置于30°C水浴反应30分钟，以472nm为激发波长，测定在535nm处的荧光强度值，绘制总蛋白标准曲线或计算回归方程，取人血清样品，用双蒸水稀释50倍，在20μL人血清稀释液中加入180μL用双蒸水配制的盐酸调节pH为5的浓度为0.5mg/mL的金纳米簇探针溶液，充分混匀后置于30°C水浴反应30分钟，以472nm为激发波长，测定在535nm处的荧光强度值，根据标准曲线或回归方程进行定量，获得血清样品中的总蛋白含量。6.一种金纳米簇为探针的总蛋白荧光检测试剂盒测定人血浆总蛋白的方法，其特征是将牛血清白蛋白溶液作为标准贮备液用双蒸水稀释为0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mg/mL的系列标准溶液，在20μL系列标准溶液中分别加入180μL用双蒸水配制的盐酸调节pH为5的浓度为0.5mg/mL的金纳米簇探针溶液，充分混匀后置于30°C水浴反应30分钟，以472nm为激发波长，测定在535nm处的荧光强度值，绘制总蛋白标准曲线或计算回归方程，取人血浆样品，用双蒸水稀释50倍，在20μL人血浆...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，施小琼，吴钢伟，邓豪华，黄开源，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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