GEP抗体及其用途制造技术

公开了用于治疗肝部癌症的组合物，其包含颗粒素-上皮素前体（GEP）抗体。该组合物进一步包含化疗药物和药物转运蛋白特异性抗体。也公开了GEP抗体在制备用于治疗肝部癌症的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GEP抗体及其用途与相关申请的交叉参考本申请要求于2010年5月15日提交的，名称为“GEP AND DRUG TRANSPORTER RE⑶LATI0N，CANCER THERAPY AND PROGNOSIS” 的美国临时专利申请系列号 61/334，671 的优先权，其整体引入本文作为参考。
本公开内容一般涉及通过与化学疗法结合的靶向生长因子(颗粒素-上皮素前体 (GEP)和ATP依赖性结合盒(ABC)药物外排转运蛋白(ABCB5或ABCFl )，用于治疗显示出化学抗性的肝部癌症的方法。本公开内容进一步涉及在肝部癌症(hepatic cancer)的治疗中有用的组合物。背景肝癌是全世界的第三大癌症杀手，每年全球具有超过五十万个体濒死。在中国，肝癌是癌症死亡的第二大主因。以肝部分切除术或肝移植形式的手术切除是根治疗法的主要依据。然而，癌症复发在根治手术后仍是常见的。此外，肝癌经常在晚期时诊断，这排除根治疗法。对于大多数肝癌患者的治疗不存在有效的治疗选项。化学疗法广泛用于治疗不能切除的肝癌，但具有微小功效。存在阐明与临床表现中的复发和化学抗性有关的关键基因，且开发使肝癌细胞对化学治疗剂致敏的新治疗方法的迫切需要。多药抗性可以起因于不同机制，例如肿瘤细胞凋亡途径的肿瘤细胞周期检查点损害的改变，和肿瘤细胞中减少的药物蓄积。在这些中，降低的细胞内药物蓄积是癌症多药抗性的充分研究的机制，并且已显示部分起因于ATP依赖性结合盒(ABC)药物外排转运蛋白 ABCBl (也称为P-糖蛋白或MDR1)的肿瘤细胞表达。在人ABC超家族中，ABCBl和ABCCl (也称为MRPl)已显示介导多药抗性，各自具有不同但重叠的外排底物特异性和组织分布类型。多药抗性表型很久以前在肝致癌作用中得到报道。该表型通常通过ABC药物转运蛋白包括ABCBl和ABCCl的过表达介导。这些基因使得肝癌细胞能够外排广泛范围的化学上不同的化学治疗剂。然而，调节临床表现中的化学抗性的关键基因对于肝癌患者仍有待鉴定。致瘤干细胞对造血癌症的贡献已确定一定时间，并且具有干细胞性质的细胞已在几种实体瘤中描述。尽管化学治疗剂会杀死大多数肿瘤细胞，但它们被认为留下小群体的肿瘤干细胞，这可能是药物抗性的重要机制。例如，ABC药物转运蛋白已显示保护癌症干细胞不受化学治疗，例如成胶质细胞瘤中的ABCBl和黑素瘤中的ABCB5。颗粒素-上皮素前体(Granulin-epithelin precursor, GEP,也称为颗粒素前体、 前上皮素、颗粒蛋白或PC衍生的生长因子)是具有不同生物学作用的多小平面自分泌生长因子，包括癌症进展、鼠胎儿发育和组织修复。GEP的突变影响神经元存活且引起额颞痴呆。 GEP已由肝癌的总基因表达谱鉴定为治疗靶。GEP已显示在肝癌组织中是上调的，并且功能实验已证实GEP控制增殖、侵入和致肿瘤性。因此，GEP是用于靶向疗法的重要分子。然而， 单独在临床情况中的靶向疗法一般而言不足以根除实体瘤。概述下文呈现多个实施方案的简化概括，以便提供本文描述的一些方面的基础理解。这个概述不是所公开主题的广泛概述。它既不预期鉴定所公开主题的关键或至关重要的要素， 也不描绘主题实施方案的范围。它的唯一目的是以简化形式呈现所公开主题的一些概念作为以后呈现的更详细描述的序言。多个实施方案涉及治疗显示出多药抗性(在本文中也称为化学抗性)的肝癌。更具体而言，该实施方案涉及靶向和/或抑制生长因子和药物转运蛋白，以促进化学抗性肝癌的治疗。靶向的具体生长因子可以是颗粒素-上皮素前体(GEP)、其在肝癌细胞中过表达且调节增殖、侵入和致肿瘤性。GEP的抑制可以增强通过化学治疗剂诱导的细胞凋亡效应，而 GEP的上调显示相反趋势。GEP已显示调节在化学抗性中起作用的ATP依赖性结合盒(ABC) 药物外排转运蛋白家族的药物转运蛋白，例如ABCB5和ABCF1。相应地，靶向的药物转运蛋白可以是ABCB5或ABCFl。这些方法可以进一步包括应用与靶向生长因子和药物转运蛋白组合的化学疗法。与化学疗法组合的靶向生长因子和药物转运蛋白可以提供可以根除侵略性肝癌细胞的治疗模式。根据一个实施方案，描述了用于处理细胞上的生长因子(例如GEP)和药物转运蛋白(例如ABCB5或ABCF1)的方法，以及相关产品。在进一步的实施方案中，描述的是使用生长因子(例如GEP)和药物转运蛋白(例如ABCB5或ABCF1)结合分子以及生长因子和药物转运蛋白分子的抑制，用于处理癌细胞的方法。本文进一步描述的是其表达模式可以用于区分不同临床状况的标记组例如高或低水平的生长因子(例如GEP)和药物转运蛋白(例如 ABCB5或ABCF1)。基于不同临床状况，可以测定癌症复发的可能性、药物敏感性和预后。本文还描述的是基于预后分类且治疗患者的方法。根据本公开内容的一些实施方案,提供了包含GEP抗体和化疗药物(chemodrug) 的在肝癌的治疗中有用的组合物。根据本公开内容的其他实施方案，提供了包含GEP抗体、 药物转运蛋白-特异性抗体化疗药物的在肝癌的治疗中有用的组合物。下述详述和附图详细阐述所公开主题的特定举例说明性方面。然而，这些方面仅指示其中可以采用多个实施方案的原理的少数不同方法。所公开的主题预期包括所有此类方面及其等价方面。当与附图结合考虑时，所公开的主题的其他优点和不同特征由于多个实施方案的下述详述将变得显而易见。附图简述图I显示GEP水平调节的化学抗性。6^Hep3B细胞就GEP水平进行调节GEP抑制(-) 和GEP过表达(+ )。转染子就GEP mRNA和蛋白质水平调节(平均荧光强度，MFI)进行验证。 (B)在GEP水平和化学抗性之间的正相关。GEP抑制证实增加的细胞凋亡群体并且因此细胞对化学治疗剂更敏感。GEP过表达导致降低的细胞凋亡群体且因此细胞对化学治疗剂更具抗性。GEP赋予对于化学治疗剂包括多柔比星和顺钼的化学抗性。rOGEP调节的ABCB5 水平。就GEP水平调节的肝癌细胞检查ABCB5表达。GEP水平的变化对ABCB5 mRNA水平的调节赋予中等作用，但对ABCB5蛋白质水平的调节赋予显著作用。对于流动覆盖图，GEP / ABCB5的蛋白质水平(实线)显示为在扣除相应同种型对照(虚线)后的平均荧光强度(MFI)。图2显示化学抗性细胞中增加的ABCB5。(A)化学抗性细胞证实对于化学治疗剂的抗性中的10 - 16倍增加。选择肝癌细胞且在不同化学治疗剂下扩增。具有“获得抗性”的这些细胞被称为化学抗性群体。就对于多柔比星的抗性选择的细胞被称为多柔比星抗性细胞。类似地，在顺钼下选择的细胞被称为顺钼抗性细胞。药物IC50值通过MTT测定进行测定。多柔比星抗性细胞证实与其亲本细胞相比较，对于多柔比星的抗性中超过16倍的增加(IC50值分别为I. 78和O. 11 Pg/ml)。顺钼抗性细胞证实与其亲本细胞相比较，对于顺钼的抗性中超过10倍的增加(IC50值分别为8. 53和O. 84 Pg/ml)。(B)在化学抗性细胞中观察到ABCB5上调。图3显示ABCB5抑制增强多柔比星摄取和细胞凋亡。CV细胞通过siRNA方法抑制ABCB5表达。所有细胞都显示对于siABCB5降低的ABCB5 m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兆恬，范上达，
申请(专利权)人：香港大学，
类型：
国别省市：