一种利用农杆菌介导的光皮桦转基因方法技术

本发明专利技术涉及一种利用农杆菌介导的光皮桦转基因方法，包括下列步骤：(1)以光皮桦种子为外植体培养得到组培苗；(2)选取幼嫩的组培苗叶片接入预培养基中，黑暗培养；(3)用MS培养基重悬培养基重悬离心收集的农杆菌菌体制得农杆菌菌液；(4)将预培养的叶片，投入农杆菌菌液中侵染一段时间后取出外植体，转入共培养基培养；(5)共培养后的材料转入筛选培养基中诱导不定芽的再生；(6)生根培养；(7)炼苗移栽。本发明专利技术建立了农杆菌介导的光皮桦遗传转化体系，为通过转基因技术深入研究并发掘光皮桦的最佳使用价值奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用农杆菌介导培养转基因光皮桦的方法。2.
技术介绍
光皮桦(Betula Iuminifera H. Wink.)为桦木科桦木属的落叶高大乔木,天然分布于我国秦岭、淮河流域以南的14个省区，是木材材质优良的阔叶珍贵用材树种，且具有耐贫瘠、速生、开花早等特性，现已成为中国南方地区杉木、松树地更新的最重要珍贵造林树种，也是良好的林木遗传学研究材料。该树种的育种工作已全面启动，在不同种源区选择了优良单株，并进行杂交创制新种质，建立其转基因技术平台对于开展光皮桦分子育种，创制抗虫、抗旱新种质以及验证已克隆基因的功能等均具有十分重要的作用。转基因技术指利用分子生物学技术，将某些抗逆、抗病虫等已知功能性状的基因， 通过现代科技手段移植到目标生物体中，从而对植物各种性状进行改良的方法。其常用的方法有农杆菌介导法；基因枪法；电击和聚乙二醇(PEG)法和花粉管通道法。迄今为止， 国内外已得到60种以上转基因植物，其中棉花、烟草和大豆等已大面积种植。通过转基因技术，可以改变光皮桦的遗传物质，提高其抗虫、抗旱和木材品质，从而降低生产成本，提高经济效益。CN200910113862. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用农杆菌介导的光皮桦转基因方法，其技术方案按如下步骤进行：(1)培养基配方预培养培养基配方：MS+TDZ0.4mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L(PH5.9)共培养培养基配方：MS+TDZ0.4mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+AS300μmol/L(PH5.5)选一培养基配方：MS+TDZ0.4mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L+Carb500mg/L+Hyg10mg/L??????????????????????????????????????????????????????????????...

【技术特征摘要】
1.ー种利用农杆菌介导的光皮桦转基因方法，其技术方案按如下步骤进行 (1)培养基配方 预培养培养基配方MS+TDZO. 4mg/L+NAA0. 05mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5. 5g/L(PH5. 9)共培养培养基配方MS+TDZO. 4mg/L+NAA0. 05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+AS300ymol/L (PH5. 5) 选ー培养基配方MS+TDZO. 4mg/L+NAA0. 05mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 5. 5g/L+Carb500mg/L+HyglOmg/L (PH5.9) 选 ニ、选三培养基配方MS+BA0. 5mg/L+TDZ0. lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 5. 5g/ L+Carb500mg/L+Hygl0mg/L (PH5.9) 生根培养培养基配方l/2MS+IBAlmg/L+蔗糖20g/L+琼脂5. 5g/L (PH5. 9) AS(こ酰丁香酮)、Carb (羧苄青霉素)和Hyg (潮霉素)都在培养基倒板前温度低于50°C时再加入，防止失效。(2)光皮桦组培苗的准备 A :种子消毒灭菌将收集的光皮桦种子放入50ml无菌离心管中，倒入70%酒精消毒1-2分钟；倒去酒精，加入40ml0. I %升汞溶液，浸泡5min ;倒去升汞溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍。B :小苗诱导与继代培养将灭好菌的种子放在无菌滤纸上吸干水分，置入MS培养基中；操作完毕后用封ロ膜(MicroporeTM Surgical Tape)封好培养皿，在25°C-28°C下光照培养2周；将发芽的小苗置入继代培养基1/2MS，每瓶3-4株，培养2-3个月(25°C -28°C下光照培养)。(3)预培养 选取长势较好的组培苗的叶片为外植体。选取其前3片较幼嫩的叶片，用剪刀...

【专利技术属性】
技术研发人员：童再康，李美飞，黄华宏，楼雄珍，姜小凤，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：