本发明专利技术提供了一种生物相容性聚合物，该生物相容性聚合物通过一个或多个半胱氨酸残基与FVIIa缀合，适当地通过FVIIa中还原的二硫键间的连接基与FVIIa缀合，本发明专利技术还提供了一种药物组合物，该药物组合物含有这种缀合形式的FVIIa。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种缀合形式的人凝血因子Vila。
技术介绍
凝血因子VII (本文中称作FVII)是一种分子量为53000道尔顿(Da)、被糖基化的维生素K依赖性的单链酶原，凝血因子VII含有12个天然的二硫键(O’Hara et al.，Proc.Nat’ IAcad. Sci.美国，84:5158-5162 (1987)))。蛋白质主要是在肝脏中产生。FVII参与外源性凝血级联反应(图I)。所述蛋白质由四个离散的结构域组成一个N-末端Y-羧基谷氨酸(Gla)结构域，两个类表皮生长因子(EGF)结构域和一个C-末端丝氨酸蛋白酶结构 域。当缺乏存在于血管内皮下膜中的FVII的辅因子组织因子(TF)时，血液循环中的酶原仅表现出很低的蛋白酶活性。血管损伤后，FVII以高亲和力与TF结合，并通过精氨酸152和异亮氨酸153之间肽键的特异性裂解，变成有活性的双链酶FVIIa。FVIIa轻链由N-末端Gla结构域和类EGF结构域构成，重链由丝氨酸蛋白酶结构域构成。重链和轻链通过半胱氨酸135和半胱氨酸262之间的单一二硫键连接在一起。一旦被活化，FVIIa会快速地催化FX转化为FXa并催化FIX转化为FIXa。然后，FXa与FVa形成一种复合物，以使凝血酶原裂解，这会产生少量的凝血酶(Aitken，M. G. EMA, 16:446-455 (2004))。这种凝血酶的产生会使血小板和血小板表面上的辅因子V，VIII和XI活化。这样的活化会导致凝血酶的大量形成，所述凝血酶的大量形成能够引起纤维蛋白聚合反应和止血栓塞的形成。诺和诺德公司已经研发出了人重组FVIIa并已将其商品化，其商品名为NovoSeven (活化形式的 ^tacog alfa，ATC 编码 B02BD08)。NovoSeven 被批准用于治疗血友病A或B患者的出血发作(bleeding episodes),所述患者分别能够产生FVIII或 IX 的抑制性抗体(Jurlander et al. , Seminars inThrombosis and Hemostasis, 27:373-383(2001) ; Roberts et al.，Blood, 15:3858-3864 (2004))。自 1996 年开始使用时起，已经证明这样的治疗是安全和有效的。然而，由于蛋白质在体内半衰期相对较短(2. 3小时；以批准的NovoSeven 为基础的概要，FDA的序列号为96-0597)，为了达到止血的目的，在一次出血发作过程中随着时间的推移，需要多次输入高剂量的产品(90iig kg—1)。所述产品较短的半衰期和达到理想的治疗效果所需要的高剂量阻碍了 NovoSeven 与抑制剂共同使用在预防性治疗血友病患者中的用途。因此，很明显需要开发一种半衰期更长的FVIIa分子，以便在药物动力学(PK)和药效动力学(PD)方面都有所改进。以前，人们就已经成功的将生物药品与生物相容性聚合物相缀合以用于提高产品的物理化学特性。通过缀合被改进的治疗性蛋白的特性包括PK、ro和免疫原性。化学基团与蛋白质的连接能够显著地增加蛋白质的循环半衰期(Jevsevar et al. , Biotechnol.J.，5:113-128(2010))。对于分子量低于肾小球过滤限制的分子种类来说，大分子量基团的缀合阻碍了产品的肾清除。而且，在药剂制品上附加化学基团能够通过空间位阻来阻碍受体介导的分子清除。已在许多市售的生物药品制品中使用的生物相容性聚合物的实例是聚乙二醇(本文中称作PEG)。将PEG分子共价附着到另一个分子的过程称作聚乙二醇化。迄今为止，有九种聚乙二醇化的制品已经获得FDA的上市许可，其中有四种是非常畅销的药品Peglntron (Schering-Plough)、Pegasys (Hoffman-La Roche)、Neulasta (Amgen)和Micera (Hoffman-LaRoche)。已经有许多不同的化学方法用于将蛋白治疗剂与活化的PEG分子相缀合。随机的聚乙二醇化已经成功地被用于通过蛋白质上的氨基将PEG基团与蛋白共价连接。这种连接位点通常是但不仅仅限于赖氨酸残基侧链上的e-氨基。这种随机的反应可能产生非常复杂的缀合物的混合物，其中的PEG部分附着位点和数目都不尽相同。即使在随机缀合反应后进行纯化，也还会存在位置异构体，而这些异构体均具有不同的物理化学性质和药物学性质。目前已经研发了多种位点特异性的聚乙二醇化技术，并且现在已经试图将这些技术用于生产成分更确定的生物药品。进行位点特异性聚乙二醇化所采取的方法包括靶标于N-末端、半胱氨酸、聚糖、二硫化物和聚组氨酸的聚乙二醇化。重组FVIIa的聚乙二醇化的现有技术在不同的专利和专利申请中均有记载 WO 98/32466文献提到FVII可以被聚乙二醇化，但是没有给出更多关于这方面的信息。US 2008/0200651提到在野生型FVII多肽上通过人为引入的半胱氨酸残基而缀合PEG分子，能够表现出延长的体内半衰期或者具有增强的活性。US 2008/0221032记载了 FVIIa-聚唾液酸缀合物，所得的分子具有显著延长的体内半衰期。US 2009/0176967教导可以使用酶在FVII多肽的C-末端引入特定的官能团，FVII多肽可以在该处与生物相容性聚合物如PEG偶联。US2009/0227504记载了 FVIIa (或类FVIIa分子)的制备，其中一个或多个天冬酰胺连接的和/或丝氨酸连接的低聚糖链被至少一个表现出改进的血清半衰期的聚合基团共价修饰。US 2010/0028939记载了如何采用半乳糖氧化酶修饰天然的糖蛋白，从而在聚糖末端产生具有反应活性的醛官能团。然后，所述具有反应活性的醛基可以用来将聚合部分与蛋白缀合，以产生具有改善的药理学的产品。US 2010/0056428提到通过聚合部分例如PEG的肟在糖蛋白的糖基位置进行衍生化，可以实现FVIIa药学动力学特性的改进。US 2010/0093934教导聚合基团与凝血因子的靶向缀合可以通过首先将凝血因子与单克隆抗体或抗体结合，在与活化的聚合物反应前，所述单克隆抗体或抗体对蛋白有亲和力。US 2010/0099616记载了如何制备缀合有少量(1-9个)水溶性聚合物的血液因子(包括FVIIa)。然而，作者并没有用实例说明通过这种方法制得的聚乙二醇化的FVIIa的药理学特性。另一种蛋白质聚乙二醇化的方法已由PolyTherics公司开发，并被称为TheraPEG ,其中，通过蛋白质中的一对半胱氨酸残基的还原型二硫键,PEG聚合物与目的蛋白相连接(W0 2005/007197)。这一技术已被用于制备无因子FIXa污染的经聚乙二醇化的因子 IX 变体(W0 2009/130602)。然而，对于使用同样的技术制备聚乙二醇化的FVIIa而言，则被认为是重要的或者非常规的。虽然在止血方面，血凝系统中的各种蛋白可能有共同的目标，但是它们发挥作用的机理不同，因此，断言TheraPEG 技术能够为改进所有凝血蛋白的半衰期和免疫原性提供显而易见的方法是不合理的。区别总结如下从活性角度来看，FVIIa与FIX存在某些关键的区别，这就意味着这种蛋白质和生物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：W·亨利，
申请(专利权)人：剑桥生物制药专利有限公司，保利提瑞斯有限公司，
类型：
国别省市：
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