【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于重编程细胞的包含纯化的经修饰的RNA的RNA制剂本申请要求于2009年12月7日提交的美国临时申请序列No.61/267,312(将其通过引用整体并入本文)的优先权。本申请还要求于2009年3月27日提交的美国申请序列No.11/990,646号(所述申请为于2006年8月21日提交的进入美国国家阶段的PCT/US06/32372,PCT/US06/32372要求于2005年8月23日提交的美国临时申请No.60/710,164的优先权)的优先权,将所有所述申请通过引用整体并入本文。专利
本专利技术涉及通过将细胞与纯化的RNA制剂接触来改变或重编程真核细胞(包括人或其它动物细胞)的分化状态的组合物和方法,所述RNA制剂包含由一种或多种不同的各自编码重编程因子(例如,iPS细胞诱导因子)的单链mRNA分子或由所述单链mRNA分子组成。纯化的单链mRNA分子优选包含至少一个经修饰的核苷(例如,选自假尿苷(缩写为希腊字母“psi”或“Ψ”)、5-甲基胞嘧啶(m5C)、5-甲基尿苷(m5U)、2′-O-甲基尿苷(Um或m2’-OU)、2-硫尿苷(s2U)和N6-甲基腺苷(m6A)),其替代相应的未修饰的经典核苷的至少一部分(例如,替代大体上所有相应的未修饰的A、C、G或T经典核苷)。此外,单链mRNA分子优选纯化为大体上不含在细胞中激活不期望的反应、减少单链mRNA的表达和/或激活RNA传感器的RNA污染分子。在某些实施方案中,纯化的RNA制剂大体上不含比全长单链mRNA分子短或长的、为双链RNA和/或未加帽的RNA的RNA污染分子。背景2006年,(Ta ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.07 US 61/267,3121.一种用于将展示第一分化状态或表型的、选自哺乳动物成纤维细胞、角质形成细胞和内皮细胞的人或动物体细胞重编程为展示第二分化状态或表型的重编程诱导多能干细胞(iPS细胞)的方法,包括:a)提供纯化的RNA制剂,所述纯化的RNA制剂包含体外合成的经修饰mRNA分子,所述经修饰mRNA分子包含至少一种经修饰的核苷替代至少一部分相应的未修饰的典型尿苷核苷,并且编码至少一种选自OCT4、SOX2、KLF4、LIN28、NANOG、MYC和c-MYC的蛋白重编程因子,所述经修饰的核苷由未进一步修饰的假尿苷(Ψ)组成;其中所述纯化的RNA制剂采用包括以下的纯化过程产生:1)用核糖核酸酶III(RNA酶III)处理体外合成的mRNA分子,使得产生短的RNA酶III消化产物,和从所述mRNA分子中纯化出所述短的RNA酶III消化产物;和/或2)对所述体外合成的mRNA分子进行HPLC柱纯化;由此所述纯化过程除去污染物,所述污染物通过激活RNA传感器、诱导先天性免疫反应,诱导RNA干扰或直接或间接减少细胞中体外合成的mRNA的翻译而对细胞具有毒性;其中所述纯化的RNA制剂:i)不含RNA污染分子,所述RNA污染分子包括双链RNA分子,其将激活足以阻止细胞存活和重编程细胞产生的免疫反应;和ii)可重复引入或递送而不引发足以消除所述至少一种蛋白重编程因子的可检测表达的免疫反应;和b)将所述纯化的RNA制剂引入或递送到所述细胞,和在使得所述细胞存活且产生展示第二分化状态或表型的iPS细胞的条件下培养所述细胞和重复所述引入或递送。2.权利要求1所述的方法,其中存在所述未进一步修饰的假尿苷(Ψ)替代所有或大体上所有相应的未修饰的尿苷核苷。3.权利要求1所述的方法,其中至少一种所述修饰的mRNA分子还包含至少一个5-甲基胞苷(m5C)核苷。4.一种用于将展示第一分化状态或表型的、选自哺乳动物成纤维细胞、角质形成细胞和内皮细胞的人或动物体细胞重编程为展示第二分化状态或表型的诱导多能干细胞(iPS细胞)的方法,包括:a)提供纯化的RNA制剂,所述纯化的RNA制剂包含体外合成的经修饰mRNA分子,所述经修饰mRNA分子包含至少一种选自1-甲基假尿苷(m1Ψ)和2-硫尿苷(s2U)的经修饰的核苷替代至少一部分相应的未修饰的典型尿苷核苷并包含5-甲基胞苷(m5C)替代至少一部分相应的未修饰的典型胞苷核苷,并且所述经修饰mRNA分子编码至少一种选自OCT4、SOX2、KLF4、LIN28、NANOG、MYC和c-MYC的蛋白重编程因子;其中所述纯化的RNA制剂采用包括以下的纯化过程产生:1)用核糖核酸酶III(RNA酶III)处理体外合成的mRNA分子,使得产生短的RNA酶III消化产物,和从所述mRNA分子中纯化出所述短的RNA酶III消化产物;和/或2)对所述体外合成的mRNA分子进行HPLC柱纯化;由此所述纯化过程除去污染物,所述污染物通过激活RNA传感器、诱导先天性免疫反应,诱导RNA干扰或直接或间接减少细胞中体外合成的mRNA的翻译而对细胞具有毒性;其中所述纯化的RNA制剂:(i)不含RNA污染分子,所述RNA污染分子包括双链RNA分子,其将激活足以阻止细胞存活和重编程细胞产生的免疫反应;和(ii)可重复引入或递送而不引发足以消除所述至...
【专利技术属性】
技术研发人员:凯塔林·卡里科,德鲁·韦斯曼,加里·达尔,安东尼·珀森,朱迪思·迈斯,杰罗姆·詹德里萨克,
申请(专利权)人:宾夕法尼亚州大学信托人,
类型:
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