AAV衣壳和含有AAV衣壳的组合物制造技术

提供了新型AAV衣壳和包括所述新型AAV衣壳的重组AAV载体。壳的重组AAV载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】AAV衣壳和含有AAV衣壳的组合物

技术介绍

[0001]腺相关病毒(AAV)载体在人基因疗法中具有广阔的前景，并且由于其提供长期基因表达的能力和缺乏致病性，已在各种研究中广泛用于靶向肝脏、肌肉、心脏、脑、眼睛、肾脏和其它组织。AAV属于细小病毒家族，并且含有侧接有两个反向末端重复序列的单链DNA基因组。已经报告了数十种天然存在的AAV衣壳；所述天然存在的AAV衣壳的独特的衣壳结构使其能够识别和转导不同的细胞类型和器官。
[0002]自1981年开始的第一次试验以来，在基于AAV载体的基因疗法的临床试验中没有任何载体相关毒性的报告。与已证明的功效组合的AAV载体在临床试验中不断积累的安全记录表明AAV是有吸引力的平台。特别是，AAV容易被操纵，因为所述病毒具有单链DNA病毒，其具有相对较小的基因组(约4.7kb)和简单的遗传组分——反向末端重复序列(ITR)、Rep和Cap基因。AAV载体仅需要ITR和AAV衣壳蛋白，其中ITR作为用于载体产生的复制和包装信号，并且衣壳蛋白通过形成衣壳以容纳载体基因组DNA和决定组织嗜性发挥核心作用。
[0003]由于AAV的低免疫原性和非致病性，AAV是基因疗法最有效的候选载体之一。然而，尽管允许有效的基因转移，但目前在临床中使用的AAV载体可能会受到对病毒的预先存在的免疫力和限制的组织嗜性的阻碍。因此，需要另外的AAV载体。

技术实现思路

[0004]一方面，本文提供了一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包括衣壳和载体基因组，所述载体基因组包括AAV 5'反向末端重复序列(ITR)、包括可操作地连接到表达控制序列的编码基因产物的核酸序列的表达盒和AAV 3'ITR，其中所述衣壳是：(a)AAVrh75衣壳，所述AAVrh75衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:40的核酸序列或与其至少99％相同的基于SEQ ID NO:40的编号在位置24处具有Asn(N)氨基酸残基的序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:40的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:39的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVrh75 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白至少在SEQ ID NO:40的N57、N262、N384和/或N512位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(b)AAVhu71/74衣壳，所述AAVhu71/74衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:4的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:4的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:3的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVrh71/74vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:4的至少4个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(c)AAVhu79衣壳，所述AAVhu79衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:6的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:6的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:5的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu79 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:6的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(d)AAVhu80衣壳，所述AAVhu80衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:8的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:8的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:7的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu80 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混
NO:28的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:28的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:27的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu82 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:28的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(o)AAVhu84衣壳，所述AAVhu84衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:30的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:30的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:29的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu84 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:30的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(p)AAVhu86衣壳，所述AAVhu86衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:32的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:32的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:31的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu86 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:32的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(q)AAVhu87衣壳，所述AAVhu87衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:34的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:34的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:33的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu87 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:34的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(r)AAVhu88/78衣壳，所述AAVhu88/78衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:36的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:36的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:35的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu88/78vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:36的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(s)AAVhu69衣壳，所述AAVhu69衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:38的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:38的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:37的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu69 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:38的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(t)AAVrh76衣壳，所述AAVrh76衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:42的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:42的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:41的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu69 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包括衣壳和载体基因组，所述载体基因组包括AAV 5'反向末端重复序列(ITR)、包括可操作地连接到表达控制序列的编码基因产物的核酸序列的表达盒和AAV 3'ITR，其中所述衣壳是：(a)AAVrh75衣壳，所述AAVrh75衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:40的核酸序列或与其至少99％相同的基于SEQ ID NO:40的编号在位置24处具有Asn(N)氨基酸残基的序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:40的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:39的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVrh75 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白至少在SEQ ID NO:40的N57、N262、N384和/或N512位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(b)AAVhu71/74衣壳，所述AAVhu71/74衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:4的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:4的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:3的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVrh71/74vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:4的至少4个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(c)AAVhu79衣壳，所述AAVhu79衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:6的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:6的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:5的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu79 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:6的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(d)AAVhu80衣壳，所述AAVhu80衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:8的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:8的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:7的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu80 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:8的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(e)AAVhu83衣壳，所述AAVhu83衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:10的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:10的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:9的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu83 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:10的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(f)AAVhu74/71衣壳，所述AAVhu74/71衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:12的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:12的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:11的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu74/71vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:12的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(g)AAVhu77衣壳，所述AAVhu77衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:14的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:14的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:13的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu77 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:14的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；
(h)AAVhu78/88衣壳，所述AAVhu78/88衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:16的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:16的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:15的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu78/88vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:16的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(i)AAVhu70衣壳，所述AAVhu70衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:18的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:18的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:17的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu70 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:18的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(j)AAVhu72衣壳，所述AAVhu72衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:20的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:20的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:19的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu72 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:20的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(k)AAVhu75衣壳，所述AAVhu75衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:22的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:22的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:21的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu75 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:22的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(l)AAVhu76衣壳，所述AAVhu76衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:24的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:24的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:23的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu76 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:24的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(m)AAVhu81衣壳，所述AAVhu81衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:26的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:26的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:25的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu81 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:26的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(n)AAVhu82衣壳，所述AAVhu82衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:28的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:28的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:27的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu82 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:28的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(o)AAVhu84衣壳，所述AAVhu84衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:30的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:30的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:29的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu84 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:30的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置
中脱酰胺化；(p)AAVhu86衣壳，所述AAVhu86衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:32的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:32的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:31的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu86 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:32的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(q)AAVhu87衣壳，所述AAVhu87衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:34的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:34的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:33的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu87 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:34的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(r)AAVhu88/78衣壳，所述AAVhu88/78衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:36的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:36的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:35的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu88/78vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:36的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(s)AAVhu69衣壳，所述AAVhu69衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:38的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:38的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:37的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu69 vp1、vp2和vp3蛋白的异质混合物的衣壳，所述蛋白在SEQ ID NO:38的至少四个位置中95％至100％脱酰胺化，并且任选地在其它位置中脱酰胺化；(t)AAVrh76衣壳，所述AAVrh76衣壳由以下组成：(i)由编码SEQ ID NO:42的核酸序列产生的衣壳；(ii)由编码SEQ ID NO:42的序列或与其至少95％相同的序列的SEQ ID NO:41的核酸序列产生的衣壳；或(iii)作为AAVhu69 vp1、vp2和vp3蛋白的异...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：