编码GLP-1受体激动剂融合物的病毒载体和其在治疗代谢性疾病中的用途制造技术

提供了用于治疗受试者的代谢性疾病的组合物和方法。提供了一种病毒载体，所述病毒载体包含核酸分子，所述核酸分子包括编码GLP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】编码GLP
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1受体激动剂融合物的病毒载体和其在治疗代谢性疾病中的用途

技术介绍

[0001]胰高血糖素样肽1(GLP
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1)是在葡萄糖稳态中起重要作用的内源性肽激素。GLP
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1是在胃肠(GI)道中由胰高血糖素前体蛋白的蛋白水解切割产生的肽激素。GLP
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1和其它GLP
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1受体激动剂具有通过增强胰岛素释放、增加胰岛素敏感性、防止β细胞损失和延迟胃排空来控制高血糖的能力。然而，GLP
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1具有短的半衰期，这阻碍了其作为药物的使用。其它GLP
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1受体激动剂目前在人类中用于治疗糖尿病。被工程化以通过将激动剂与具有较长半衰期的蛋白质融合来克服天然激素的短半衰期的GLP
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1受体激动剂已经成为用于治疗2型糖尿病(T2DM)的重要治疗剂。

技术实现思路

[0002]本文提供了编码胰高血糖素样肽1(GLP
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1)受体激动剂融合蛋白构建体的病毒载体。在一些实施例中，与不具有融合配偶体的GLP
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1受体激动剂的载体介导的递送相比，这些病毒载体可以实现GLP
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1受体激动剂在受试者中的持续表达和/或增加的循环半衰期。进一步提供了制备和使用此类病毒载体的方法。
[0003]在一方面，提供了一种病毒载体，所述病毒载体包含核酸，所述核酸包括编码融合蛋白的多核苷酸序列。所述融合蛋白包含(a)前导序列，所述前导序列包括分泌信号肽，(b)胰高血糖素样肽
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1(GLP
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1)受体激动剂，以及(c)融合结构域，所述融合结构域包括(i)IgG Fc或其功能变体或(ii)白蛋白或其功能变体。在一个实施例中，所述载体是腺相关病毒载体。
[0004]在一个实施例中，(i)所述前导序列的所述分泌信号肽包括凝血酶信号肽；(ii)所述前导序列包括凝血酶前肽；和/或(iii)所述前导序列包括凝血酶前导序列。在另一个实施例中，所述前导序列包括IL
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2前导序列。在一个实施例中，所述GLP
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1受体激动剂选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和其功能变体。
[0005]在一个实施例中，所述融合结构域是人IgG4 Fc，所述人IgG4 Fc具有SEQ ID NO:11的序列或共享与其至少90％同一性的序列或其功能变体。在另一个实施例中，所述融合结构域是人白蛋白，所述人白蛋白具有SEQ ID NO:12的序列或共享与其至少90％同一性的序列或其功能变体。在一个实施例中，所述融合结构域是恒河猴IgG4 Fc，所述恒河猴IgG4 Fc具有SEQ ID NO:17的序列或共享与其至少90％同一性的序列或其功能变体。
[0006]在另一方面，所述病毒载体包含AAV衣壳和包装在所述AAV衣壳中的载体基因组，所述载体基因组包括AAV反向末端重复序列(ITR)、编码所述融合蛋白的所述多核苷酸序列以及指导所述融合蛋白的表达的调控序列。
[0007]在另一方面，提供了一种适用于治疗受试者的代谢性疾病的药物组合物。所述组合物包含水性液体和如本文所述的病毒载体。在一个实施例中，所述受试者是人。
[0008]在又另一方面中，提供了如本文所述的病毒载体用于制造用于治疗患有代谢性疾
病，任选地糖尿病的受试者的药物的用途。
[0009]在另一方面，提供了一种治疗患有代谢性疾病的受试者的方法。所述方法包含向所述受试者施用有效量的如本文所述的病毒载体或组合物。
[0010]根据本专利技术的以下详细描述，本专利技术的其它方面和优点将变得显而易见。
附图说明
[0011]图1A是度拉鲁肽(Dulaglutide)的示意图。
[0012]图1B是阿必鲁肽(Albiglutide)的示意图。
[0013]图2示出了体外的诱导型h度拉鲁肽(Trb)对CB7.fe度拉鲁肽(feTrb)。在用具有人凝血酶信号序列的诱导型人度拉鲁肽(TF.GT2A.度拉鲁肽(Trb))和CB7.猫科动物度拉鲁肽(feTrb)的质粒转染的HEK293细胞的培养上清液中测量GLP1
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Fc融合物。在用0nM、4nM和40nM的雷帕霉素(Rapa)处理后48小时或在转染CB7.fe度拉鲁肽(feTrb)后48小时，收集上清液。GLP1
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Fc通过活性形式GLP1 ELISA连同试剂盒的STD进行定量。
[0014]图3示出了GLP
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1在Rag1KO(RAG1
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/
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)小鼠(n＝5/载体)中的诱导型表达。通过肌内(I.M.或IM)递送所示载体(即，AAVrh91.TF.h度拉鲁肽(Trb)3w.rBG和AAVrh91.TF.rh度拉鲁肽(rhTrb).3w.rBG)，向Rag1KO雌性小鼠施用1x 10
11
GC/小鼠。每周进行一次采血。进行对活性形式的GLP
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1具有特异性的GLP1 ELISA。在第0天注射AAV载体，并且在AAV注射后约第14天和第15天通过口服强饲法施用雷帕霉素。
[0015]图4是pAAV.CMV.TF.GT2A.度拉鲁肽(Trb).3w.rBG的质粒图谱的示意图。
[0016]图5示出了经工程化的GLP
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1构建体在小鼠体内的AAV介导的表达。
[0017]图6A示出了用于在双载体系统中使用的包括诱导型构建体的示例表达盒的示意图。
[0018]图6B示出了用于在1
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载体系统中使用的包括诱导型构建体的表达盒的示意图，所述表达盒包括IRES连接子。
[0019]图7A示出了用于在1
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载体系统中使用的包括诱导型构建体的表达盒的示意图，所述表达盒包括F2A切割序列连接子和具有分泌信号的人GLP1
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Fc(h度拉鲁肽)。
[0020]图7B示出了GT2A切割序列的进一步详细视图，其中GT2A_V1包括SEQ ID NO:21的氨基酸序列，并且GT2A_V2包括SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
[0021]图8示出了在HEK293细胞上清液中的恒河猴示例性治疗转基因(rhTT)的表达，如在用各种构建体转染并且用0nM、4nM和40nM的雷帕霉素处理后测量的，并且以IU/mL rhTT绘制。
[0022]图9示出了体外的诱导型人(h)和恒河猴(rh)GLP
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1表达。在用包括凝血酶信号序列的诱导型h度拉鲁肽、包括2
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载体系统的rh度拉鲁肽和CB7.rh度拉鲁肽的质粒转染的HEK293细胞的培养上清液中测量GLP1
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Fc融合物。将细胞在第0天铺板，在第1天转染，在第2天用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】ID NO:21)或GT2A_V2(SEQ ID NO:22)的2A连接子。17.根据权利要求18至26中任一项所述的病毒载体，其包括所述ZFHD结合位点的至少8个拷贝。18.根据权利要求18至27中任一项所述的病毒载体，其中所述载体基因组包括SEQ ID NO:16的序列或与其至少70％相同的序列。19.一种病毒载体，其包括核酸分子，所述核酸分子包括：可调控启动子；激活结构域，所述激活结构域包括p65反式激活结构域和FKBP12
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雷帕霉素相关蛋白(FRAP)的FKBP12
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雷帕霉素结合(FRB)结构域；DNA结合结构域，所述DNA结合结构域包括锌指同源结构域(ZFHD)和三个FK506结合蛋白结合域(FKBP)亚基基因；ZFHD结合位点的8个拷贝；以及编码包括GLP
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1类似物和人IgG4 Fc的融合蛋白的序列。20.一种适用于治疗受试者的代谢性疾病的药物组合物，所述药物组合物包括水性液体和根据权利要求1至20中任一项所述的病毒载体。21.根据权利要求1至29中任一项所述的病毒载体或根据权利要求30或31中任一项所述的药物组合物，其在用于治疗患有代谢性疾病的受试者的方法中使用。22.一种根据权利要求1至29中任一项所述的病毒载体或根据权利要求29至31中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗患有代谢性疾病的受试者的药物中的用途。23.根据权利要求32或33所述的病毒载体或用途，其中所述组合物被调配为以1x109GC/kg至5x 10
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【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：